一种基于电转重编程质粒制备NK样细胞的方法技术

本发明专利技术提供了一种基于电转重编程质粒制备NK样细胞的方法，所述方法包括以下步骤：(1)采用抗人CD3抗体和抗人CD28抗体的组合活化T细胞；(2)将靶向Bcl11b基因的CRISPR/Cas9质粒电转入活化的T细胞，得到所述NK样细胞。本发明专利技术采用电转化的方法将靶向Bcl11b基因的CRISPR/Cas9质粒导入活化的T细胞，合理设置电转条件，使得基因编辑系统转入原代T细胞中进行高效的基因编辑，显著降低了细胞毒性，配合合理的培养扩增条件，制备得到具有杀伤作用的NK样细胞。

【技术实现步骤摘要】
一种基于电转重编程质粒制备NK样细胞的方法
本专利技术属于生物
，涉及一种基于电转重编程质粒制备NK样细胞的方法。
技术介绍
近年来细胞免疫疗法在癌症治疗中展现出了巨大的潜力，被认为是最有希望攻克癌症的方法，其中，基于T细胞的免疫治疗技术受到了广泛关注，是目前的研究热点。为了克服主要组织相容性复合体(MHC)的限制性，研究人员研究T细胞的激活分化机制，尝试对其进行基因改造，获得具有增强的抗肿瘤活性的T细胞。Li等人将小鼠T细胞重编程成为NK样细胞(inducedT-to-naturalkillercells，ITNK细胞)(Li,P.etal.ReprogrammingofTcellstonaturalkiller-likecellsuponBcl11bdeletion.Science329,85-89(2010).)，并于近年采用CRISPR/Cas9技术成功地将人T细胞重编程成为ITNK细胞。CRISPR/Cas9是研究最深入、应用最成熟的一种基因编辑工具，已经成功应用于多种细胞系的基因编辑。但是，它对原代细胞的编辑效本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于电转重编程质粒制备NK样细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：/n(1)采用抗人CD3抗体和抗人CD28抗体的组合活化T细胞；/n(2)将靶向Bcl11b基因的CRISPR/Cas9质粒电转入活化的T细胞，得到所述NK样细胞。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于电转重编程质粒制备NK样细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)采用抗人CD3抗体和抗人CD28抗体的组合活化T细胞；
(2)将靶向Bcl11b基因的CRISPR/Cas9质粒电转入活化的T细胞，得到所述NK样细胞。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述T细胞来源于外周血和/或脐带血。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述抗人CD3抗体和抗人CD28抗体的摩尔比为(1～5):1。


4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述T细胞活化3～6天后，将所述靶向Bcl11b基因的CRISPR/Cas9质粒电转入T细胞。


5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，所述靶向Bcl11b基因的CRISPR/Cas9质粒含有sgRNA表达框和Cas9蛋白表达框；
优选地，所述sgRNA包括SEQIDNO:1所示的核酸序列。


6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述电转的电压为800～2500V；
优选地，所述电转的时间为1～8ms；
优选地，对于2mm电击杯，所述电转的电压为1000～2000V，时间为1～4ms。


7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于，在步骤(2)之后还包括采用培养基培养NK样细胞的步骤；
优选地，所述培养基中添加有细胞因子组合物；
优选地，所述细胞因子组合物包括IL-12、IL-15和IL-18；
优选地，所述IL-12在所述培养基中的浓度为1～100ng/mL；
优选地，所述IL-15在所述培养基中的浓度为1～100ng/mL；
优选地，所述IL-18...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤朝阳，秦乐，吴迪，魏志辉，王翠花，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：广东昭泰体内生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44