用于抑制EIF4G1表达的USP10模拟多肽的制备方法技术

一种用于抑制EIF4G1表达的USP10模拟多肽的制备方法，以200个氨基酸残基为缺失单位，构建USP10缺失突变表达载体；在非小细胞肺癌细胞株中过表达筛选到的不能与EIF4G1结合的USP10缺失突变表达载体；检测以上缺失突变是否影响EIF4G1的表达；在上面筛选出的关键区域内，缩短缺失突变片段长度，确定结合关键残基所在区域；检测EIF4G1的表达水平，缩小影响USP10分子中与EIF4G1结合的关键区域；重复以上步骤，将结合区域缩短；进行关键残基的定点突变，用丙氨酸替换可能的关键残基构建定点突变表达载体，最终确定SP10分子中与EIF4G1结合的关键残基。

【技术实现步骤摘要】
用于抑制EIF4G1表达的USP10模拟多肽的制备方法
：本专利技术属于生物工程领域，涉及一种多肽的制备方法，具体来说是一种用于抑制EIF4G1表达的USP10模拟多肽的制备方法。
技术介绍
：据统计，肺癌发病率和死亡率均占所有恶性肿瘤首位。肺癌可分为非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)和小细胞肺癌(smallcelllungcancer,SCLC)两大类，其中非小细胞肺癌(NSCLC)占所有肺癌病例的80％～85％。其中只有15-25％的非小细胞肺癌有手术治疗的机会，而即使接受根治性手术治疗，仍然有50％的NSCLC患者会复发。现在传统的治疗手段(手术及放化疗)在提高非小细胞肺癌的五年生存率方面遇到了瓶颈，而随着近几年转化医学的研究推进，研究了一些肿瘤检测方法和靶点，开发出了一些靶向性药物，但由于对NSCLC的疾病机制还不清楚，临床上仍然缺乏有效的早期检测指标和治疗靶点。因此，针对非小细胞肺癌的早期诊断指标和治疗靶点的转化医学基础研究具有重要意义。真核细胞的蛋白质翻译起始是一个被高度调控的过程，在本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于抑制EIF4G1表达的USP10模拟多肽的制备方法，其特征在于包括如下步骤：/n1)以200个氨基酸残基为缺失单位，构建USP10缺失突变表达载体，免疫共沉淀和WB检测USP10缺失突变蛋白片段与EIF4G1的结合情况，如果某一片段不能与EIF4G1结合，说明关键残基存在于缺失区域内，初步确定结合关键残基所在区域；/n2)在非小细胞肺癌细胞株中过表达以上步骤筛选到的不能与EIF4G1结合的USP10缺失突变表达载体，WB检测EIF4G1的表达水平，观察该缺失突变对EIF4G1表达水平的影响；/n3)在上面筛选出的关键区域内，进一步缩短缺失突变片段长度，以50个氨基酸残基为缺失单位构...

【技术特征摘要】
1.一种用于抑制EIF4G1表达的USP10模拟多肽的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
1)以200个氨基酸残基为缺失单位，构建USP10缺失突变表达载体，免疫共沉淀和WB检测USP10缺失突变蛋白片段与EIF4G1的结合情况，如果某一片段不能与EIF4G1结合，说明关键残基存在于缺失区域内，初步确定结合关键残基所在区域；
2)在非小细胞肺癌细胞株中过表达以上步骤筛选到的不能与EIF4G1结合的USP10缺失突变表达载体，WB检测EIF4G1的表达水平，观察该缺失突变对EIF4G1表达水平的影响；
3)在上面筛选出的关键区域内，进一步缩短缺失突变片段长度，以50个氨基酸残基为缺失单位构建缺失突变表达载体，通过哺乳动物细胞表达，免疫共沉淀和WB检测USP10缺失突变蛋白片段与EIF4G1结合情况，进一步确定结合关键残基所在区域；
4)按以上步骤2)、3)的方法方法检测EIF4G1的表达水平，进一步缩小影响USP10分子中与EIF4G1结合的关键区域；
5)重复以上筛选方法，进一步将结合区域缩短至20-30氨基酸残基时，按以上方法检测EIF4G1的表达水平；
6)进行一系列关键...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐增光，刘亚丽，白宝鑫，曹月誉，
申请(专利权)人：上海市东方医院同济大学附属东方医院，
类型：发明
国别省市：上海;31