一种活性增强型NK细胞的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种活性增强型NK细胞的制备方法，所述方法包括以下步骤：(1)将外周血单个核细胞与饲养细胞进行第一次共培养，得到经第一次共培养的细胞群体；(2)将所述经第一次共培养的细胞群体采用含有细胞因子组合物的培养基培养，得到活化的经第一次共培养的细胞群体；(3)将所述活化的经第一次共培养的细胞群体与饲养细胞进行第二次共培养，得到活性增强型NK细胞。本发明专利技术将饲养细胞法和细胞因子刺激法相结合，按照特定顺序添加饲养细胞或细胞因子组合物，制备得到高纯度、高数量、具有显著提高的细胞杀伤能力的NK细胞，在细胞免疫治疗领域具有重要的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种活性增强型NK细胞的制备方法
本专利技术属于生物
，涉及一种活性增强型NK细胞的制备方法。
技术介绍
NK细胞(自然杀伤细胞，naturalkillercell)又称大颗粒性淋巴细胞，与γδT细胞和NKT细胞共同发挥固有免疫和获得性免疫功能。一方面，当机体发生感染或创伤时，NK细胞以防御者的身份通过非肽-MHC的方式快速、广泛、特异识别抗原，及时清除病原微生物和变异细胞，发挥固有免疫作用；另一方面，NK细胞参与适应性免疫应答，影响αβT细胞和B细胞的效应功能。近年来细胞免疫疗法在癌症治疗中展现出了巨大的潜力，被认为是最有希望攻克癌症的方法，其中，基于NK细胞的免疫治疗技术受到了越来越多的关注。目前，制约NK细胞临床应用的主要障碍在于难以获得数量充足的NK细胞，在体外实现NK细胞的大规模扩增是NK细胞治疗要解决的关键问题。外周血中NK细胞数量少，而肿瘤病人的外周血中NK细胞的数量和活性明显下降，不同人的NK细胞的性质有很大差别。将基于NK细胞的免疫治疗技术应用于临床，对NK细胞的数量要求高。现有技术存在着扩增后的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种活性增强型NK细胞的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：/n(1)将外周血单个核细胞与饲养细胞进行第一次共培养，得到经第一次共培养的细胞群体；/n(2)将所述经第一次共培养的细胞群体采用含有细胞因子组合物的培养基培养，得到活化的经第一次共培养的细胞群体；/n(3)将所述活化的经第一次共培养的细胞群体与饲养细胞进行第二次共培养，得到活性增强型NK细胞。/n

【技术特征摘要】
1.一种活性增强型NK细胞的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)将外周血单个核细胞与饲养细胞进行第一次共培养，得到经第一次共培养的细胞群体；
(2)将所述经第一次共培养的细胞群体采用含有细胞因子组合物的培养基培养，得到活化的经第一次共培养的细胞群体；
(3)将所述活化的经第一次共培养的细胞群体与饲养细胞进行第二次共培养，得到活性增强型NK细胞。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述饲养细胞包括Daudi细胞和/或B淋巴母细胞样细胞；
优选地，步骤(1)所述饲养细胞经γ射线处理；
优选地，所述γ射线的强度为100～200Gy。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述外周血单个核细胞与饲养细胞的细胞数比例为1:(1～10)；
优选地，所述外周血单个核细胞与Daudi细胞的细胞数比例为1:(6～8)；
优选地，所述外周血单个核细胞与B淋巴母细胞样细胞的细胞数比例为1:(3～5)。


4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述第一次共培养的时间为3～5天。


5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述细胞因子组合物包括IL-12、IL-15和IL-18；
优选地，所述IL-12的终浓度为5～20ng/mL；
优选地，所述IL-15的终浓度为5～20ng/mL；
优选地，所述IL-18的终浓度为5～20ng/mL；
优选地，步骤(2)所述培养的时间为12～24h。


6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，步骤(...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤朝阳，秦乐，吴迪，魏志辉，王翠花，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：广东昭泰体内生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44