纯化的双阴性T细胞及其制备和应用制造技术

本发明专利技术提供了一种去除了IL‑17分泌细胞的DNT细胞群。本发明专利技术还提供了该DNT细胞群的制备方法和应用，其具有显著的抑制T细胞增殖、诱导凋亡的作用，还可以抑制脂肪组织炎症、改善胰岛素抵抗、减轻糖尿病、缓解脂肪性肝炎，也可以用于抗原特异性的过敏性哮喘的预防和治疗。

【技术实现步骤摘要】
纯化的双阴性T细胞及其制备和应用
本专利技术涉及生物医药领域，更具体地涉及一种纯化的双阴性T细胞及其制备和应用。
技术介绍
双阴性T细胞(DoublenegativeTcells，DNT细胞)是一种表型独特的TCRαβ+T淋巴细胞，不表达CD4、CD8、NK等细胞的特征表面标志。虽然DNT细胞在人、小鼠外周血和淋巴器官中仅占总T淋巴细胞的1％-3％，但越来越多的研究证明这种罕见的T细胞群在免疫系统中起着关键和多样化的调节作用。多数研究表明DNT细胞对于维持机体抗原特异性的免疫稳态具有至关重要的作用。DNT细胞高表达穿孔素、颗粒酶B和FasL，对CD4和CD8T细胞、B细胞、树突状细胞和NK细胞等均表现出很强的免疫抑制活性，从而可以下调机体过度的免疫反应，从而达到抑制移植排斥反应、避免移植物抗宿主病的发生以及有效控制自身免疫性疾病的发生和发展。由于DNT细胞高表达颗粒酶和穿孔素等细胞杀伤相关蛋白，也可用于肿瘤细胞的杀伤治疗。基于这些发现，将DNT细胞体外扩增，用于器官移植排斥反应、移植物抗宿主病、自身免疫性疾病，乃至肿瘤预防和治疗的研究不本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种细胞制剂，其特征在于，所述的细胞制剂包含DNT细胞群，并且所述的DNT细胞群中，占总细胞数量95％以上的细胞不分泌表达IL-17，较佳地，98％以上，更佳地，99％以上，最佳地，99.9％以上。/n

【技术特征摘要】
1.一种细胞制剂，其特征在于，所述的细胞制剂包含DNT细胞群，并且所述的DNT细胞群中，占总细胞数量95％以上的细胞不分泌表达IL-17，较佳地，98％以上，更佳地，99％以上，最佳地，99.9％以上。


2.如权利要求1所述的细胞制剂，其特征在于，所述的DNT细胞群中，占总细胞数量95％以上的细胞具有表面抗原CD3+和TCRαβ。


3.如权利要求1所述的细胞制剂，其特征在于，所述的DNT细胞群中，占总细胞数量50％以上的细胞高表达LAG3基因。


4.一种制备权利要求1所述细胞制剂的方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：
(a)提供单个核细胞群(PBMCs)，通过分选获得DNT细胞为主的第一细胞亚群；
(b)从第一细胞亚群中去除分泌IL-17的DNT细胞后对其进行扩增培养，从而获得第二细胞亚群；或者
对第一细胞亚群进行扩增培养后去除分泌IL-17的DNT细胞，从而获得第二细胞亚群；
(c)任选地，对第二细胞亚群中的DNT细胞进行进一步分选，从而获得第三细胞亚群；
(d)将第二或第三细胞亚群与合适的载体混合，从而得到权利要求1所述细胞制剂。


5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，在步骤(a)中，去除单个核细胞群中的B细胞、CD4和CD8T细胞、γδT细胞、1型NKT和2型NKT细胞，从而获得DNT细胞为主的第一细胞亚群。


6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，在步骤(b)中，利用选自针对组A表达蛋白的一种或多种抗体，在培养前去除分泌IL-17的DNT细胞，其中组A包括：S100a6、Tmem176b、CXCR6、Ramp1、Tmem176a、Lgals1、Lgals3、ACTN2、ICOS、CCR2、CD82、CD127...

【专利技术属性】
技术研发人员：张栋，朱彦兵，杨璐，田丹，王崧，孙广永，
申请(专利权)人：北京医明佳和生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11