一种负载的DC细胞、DC-CIK细胞及在肿瘤细胞治疗方面的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种负载的DC细胞、DC‑CIK细胞及在肿瘤细胞治疗方面的应用。本发明专利技术研究结果表明，2'‑FL负载可以提高DC细胞的活性，2'‑FL负载的DC细胞不仅可以促进CIK细胞体外增殖，还可以提高CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤力。以2'‑FL负载的DC细胞替代常规未经负载的DC细胞制得的DC‑CIK细胞可以用于制备抗肿瘤药物，在体外共培养后输入肿瘤患者体内进行细胞治疗；也可以直接将2'‑FL负载的DC细胞用于制备抗肿瘤药物，输入肿瘤患者体内后激活患者体内的CIK细胞进行细胞治疗。

【技术实现步骤摘要】
一种负载的DC细胞、DC-CIK细胞及在肿瘤细胞治疗方面的应用
本专利技术属于生物领域，涉及肿瘤的细胞治疗，具体涉及一种负载的DC细胞、DC-CIK细胞及在肿瘤细胞治疗方面的应用。
技术介绍
DC-CIK即为CIK细胞与DC细胞在体外共同培养，在促进DC细胞成熟的同时，更加强了ClK细胞的抗肿瘤活性。DC细胞能激活人体的免疫系统，可以长期的监视、杀伤肿瘤细胞，表现出了强大的抗原提呈功能；CIK细胞能够直接并精准的“点杀”肿瘤细胞，清除微小病灶，且不会殃及正常组织，所以将DC与CIK细胞联合培养(即DC-CIK细胞)，既能凸显出特异性的免疫杀伤，又能展现其强大的非特异性的抗瘤效应，如同战场中的“侦察兵”与“炮兵”之间的相互配合的战略部署。而且除了杀瘤活性高及杀瘤广的特点之外，还具有降低免疫耐受的特性，可有效的预防某些自身免疫性疾病。两者的联合在生物免疫治疗中的作用明显，充分的调动自身免疫，抑制杀伤肿瘤细胞，更为重要的是不损伤正常组织，有效提高肿瘤患者的生活质量，延长生存期，这较之传统的治疗方式，更具临床价值，是目前一种较为先进、有效及成熟的生物治疗手段。研究表明，通过选择合适的负载物对DC细胞负载后再与CIK细胞共培养，可以进一步提高CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤力。2'-岩藻糖基乳糖(2'-fucosyllactose，2'-FL)是母乳中发现的主要低聚糖之一，其含量高且现阶段研究最为广泛。2'-FL具有多种健康作用，包括：被肠道益生菌降解代谢，提供能量促进自身生长；特异性结合肠道中的致病菌阻止其粘附在肠道上皮细胞；在肠道淋巴系统及全身发挥免疫调节作用。目前没有2'-FL对DC细胞负载后用于CIK细胞体外培养促进CIK细胞增殖并提高其杀伤力的研究报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种负载的DC细胞、DC-CIK细胞及在肿瘤细胞治疗方面的应用，以在体外迅速获得大量具有高杀伤力的DC-CIK细胞，进而可以“大量”、“高效”用于输入肿瘤患者体内用于肿瘤治疗。本专利技术目的通过如下技术方案实现：一种DC-CIK细胞，该DC-CIK细胞由DC细胞和CIK细胞共培养制的；所述DC细胞为2'-岩藻糖基乳糖负载的DC细胞。上述DC-CIK细胞用于制备抗肿瘤药物的用途。一种DC细胞，该DC细胞为2'-岩藻糖基乳糖负载的DC细胞。上述DC细胞用于CIK细胞体外培养促进其增殖的用途。上述DC细胞用于CIK细胞体外培养提高其杀伤力的用途。上述DC细胞用于制备抗肿瘤药物的用途。2'-岩藻糖基乳糖用于DC细胞体外培养提高其活性的用途，所述活性指与CIK细胞共培养提高其对肿瘤细胞的杀伤力。有益效果：本专利技术实验结果表明，2'-FL负载可以提高DC细胞的活性，2'-FL负载的DC细胞不仅可以促进CIK细胞体外增殖，还可以提高CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤力。以2'-FL负载的DC细胞替代常规未经负载的DC细胞制得的DC-CIK细胞可以用于制备抗肿瘤药物，在体外共培养后输入肿瘤患者体内进行细胞治疗；也可以直接将2'-FL负载的DC细胞用于制备抗肿瘤药物，输入肿瘤患者体内后激活患者体内的CIK细胞进行细胞治疗。本专利技术技术方案可以达到在体外迅速获得大量具有高杀伤力的DC-CIK细胞，进而可以“大量”、“高效”用于输入肿瘤患者体内用于肿瘤治疗的目的。附图说明图1为对照组和负载组DC-CIK细胞扩增倍数(A)和CD3+CD56+细胞比例(B)；图2为空白组、对照组和负载组剥离肿瘤拍照图；图3为对照组和负载组裸鼠体内肿瘤抑制率。具体实施方式一、实验材料PBMC人外周血单个核细胞购自深圳市豪地华拓生物科技有限公司，冻存发货。人外周血树突状原代细胞(DC原代细胞)购自上海雅吉生物科技有限公司，冻存发货。HepG2细胞购自ATCC，复苏传代培养后使用，以对数期细胞种植于裸鼠体内。RPMI-1640培养液、胎牛血清、AIM-V无血清培养液、人AB血清购自美国Gibco公司。2'-岩藻糖基乳糖(2'-FL，以下使用缩写表示)纯度≥98％。雄性健康SPF级BALB/c-nu裸鼠购自南京大学模式动物研究所，7～8周龄，体重24～26g。二、实验方法1、PBMC人外周血单核细胞的复苏和传代①提前5分钟准备37摄氏度的无菌水(提前一天准备无菌水1L备用，倒出300mL微波炉稍微加热，调整到37度)；②将PBMC冻存管放入37摄氏度水中，上部分用手捏住，不要让盖缝处浸入水中，摇晃冻存管，尽可能在1分钟内融化细胞(不要超过2分钟，间期时不时拿出看下，待细胞融化到剩下小粒冰状物，停止水浴)；③冻存管离心(900rpm、1min)，管壁喷75％乙醇消毒，待乙醇挥发后，无菌操作吸取上清冻存液体丢弃，补加1mL培养基混匀，加入到培养瓶(T25)接种并补加培养基在37℃、5％CO2条件培养。培养基为含有1％双抗和10％胎牛血清的RPMI-1640培养基。④细胞培养至密度达80％以上时即可传代。2、DC细胞的复苏和传代①提前5分钟准备37摄氏度的无菌水(提前一天准备无菌水1L备用，倒出300mL微波炉稍微加热，调整到37度)；②将DC细胞冻存管放入37摄氏度水中，上部分用手捏住，不要让盖缝处浸入水中，摇晃冻存管，尽可能在1分钟内融化细胞(不要超过2分钟，间期时不时拿出看下，待细胞融化到剩下小粒冰状物，停止水浴)；③冻存管离心(900rpm、1min)，管壁喷75％乙醇消毒，待乙醇挥发后，无菌操作吸取上清冻存液体丢弃，补加1mL培养基混匀，加入到培养瓶(T25)接种并补加培养基在37℃、5％CO2条件培养。培养基为含有1％双抗和10％胎牛血清的RPMI-1640培养基。④细胞达到80％汇合时便可传代。3、CIK细胞培养取传代的PBMC，吸弃培养基，0.25％胰酶消化后，用含5％人AB血清的AIM-V培养液重悬制成浓度为1.5×106/mL的细胞悬液，加入终浓度为1000IU/mL的IFN-γ，在37℃、5％CO2条件培养24h后，加入终浓度为80μg/L的抗CD3McAb和终浓度为1000IU/mL的rhIL-2继续培养，每2～3d补加含有5％人AB血清、80μg/L抗CD3McAb和1000IU/mLrhIL-2的AIM-V培养液，维持细胞浓度为1.5×106/mL。收集继续培养7d的CIK细胞。4、DC细胞培养和负载取传代的DC细胞，吸弃培养基，0.25％胰酶消化后，用含5％人AB血清的AIM-V培养液重悬制成浓度为1.0×106/mL的细胞悬液，加入终浓度为500IU/mL的IL-4和1000IU/mL的GM-CSF，在37℃、5％CO2条件培养，每2～3d补加含有5％人AB血清、500IU/mLIL-4和1000IU/mLGM-CSF的AIM-V培养液本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种DC-CIK细胞，其特征在于：该DC-CIK细胞由DC细胞和CIK细胞共培养制的；所述DC细胞为2'-岩藻糖基乳糖负载的DC细胞。/n

【技术特征摘要】
1.一种DC-CIK细胞，其特征在于：该DC-CIK细胞由DC细胞和CIK细胞共培养制的；所述DC细胞为2'-岩藻糖基乳糖负载的DC细胞。


2.权利要求1所述的DC-CIK细胞用于制备抗肿瘤药物的用途。


3.一种DC细胞，其特征在于：该DC细胞为2'-岩藻糖基乳糖负载的DC细胞。


4.权利要求3...

【专利技术属性】
技术研发人员：单海华，
申请(专利权)人：单海华，
类型：发明
国别省市：江苏;32