以CD99为靶点的嵌合抗原受体联合抗肿瘤药物的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种治疗肿瘤的联合用药方法及其应用，该联合用药的方法将嵌合抗原受体免疫细胞疗法与化学疗法结合起来，具有比单一化学疗法或单一免疫细胞疗法更强的抗肿瘤效果。同时能降低化疗药物的使用剂量，降低化疗药物产生的毒副作用。克服CAR‑T细胞治疗肿瘤过程中面临着肿瘤的高度异质性导致的脱靶以及靶点的单一性导致治疗效果不理想等问题。

【技术实现步骤摘要】
以CD99为靶点的嵌合抗原受体联合抗肿瘤药物的应用
本专利技术涉及医药生物领域，具体是指一种以CD99为靶点治疗广谱性肿瘤的嵌合抗原受体(CAR)联合抗肿瘤药物的应用。
技术介绍
2019年初，美国癌症学会公布的数据表明，全球2018年新发1810万例癌症，死亡960万，中国人群癌症发病率，死亡率均居全球首位，并呈迅猛增长态势。全球的科学家们也在致力于各种抗癌疗法的研究，免疫治疗作为继化疗和靶向治疗后抗癌治疗的第三次革命成为新一代的肿瘤治疗手段。2013年美国《科学》杂志把肿瘤免疫治疗选为当年最大的科学突破，2015年又将肿瘤免疫联合治疗列为最值得关注的四项科学进展之一。肿瘤免疫治疗是指应用免疫学的原理和方法，提高肿瘤的免疫原性，利用自身的免疫系统攻击肿瘤细胞，从而抑制或杀伤肿瘤细胞。按其治疗策略分为两大类：免疫检查点抑制剂(如CTLA-4、PD-1、PD-L1等)和细胞免疫治疗(如CAR-T等)。其中CAR-T细胞全称为嵌合抗原受体T细胞(ChimericAntigenReceptorT-Cell)，原理为通过基因工程的方法，将能识别某种肿瘤抗原的抗体单链可变区(Scfv)与CD3-ζ链的胞内区在体外偶联为一个嵌合蛋白，通过基因转导的方法转染体外培养的患者T细胞，使其表达嵌合抗体受体(CAR)。患者的T细胞被“重编程”后，生成大量具有杀伤性的CAR-T细胞，能够特异性的靶向肿瘤细胞。CAR-T与传统的免疫疗法相比，具有治疗更精确、靶向更精准、杀瘤更广泛、效果更持久等显著优势。作为新型前沿治疗手段，CAR-T治疗主要由中美引领发展，中国的表现尤为突出，截至2019年5月，全球CAR-T治疗临床试验登记项目507项，主要分布在中国和美国，分别占试验总数的44.2％和36.7％。CAR-T疗法已在临床上获得巨大成功，尤其是在血液肿瘤治疗中取得了巨大的成就。2017年美国FDA相继批准两款CAR-T免疫治疗产品Kymriah(tisagenlecleucel，CTL-019)和Yescarta(axicabtageneciloleucel，KTE-C10)上市，分别应用于治疗用于治疗复发或难治性(r/r)儿童和年轻成人B细胞急性淋巴细胞白血病和难治、复发型成人大B细胞淋巴瘤患者。CD99蛋白是由基因MIC2(MIC2X，MIC2Y)或编码的定位于细胞膜上的糖基化蛋白，其分子量为32kD。主要在胸腺表皮细胞，胰岛细胞，卵巢颗粒细胞以及睾丸支持细胞等正常组织细胞中高表达。过去的研究表明，血管瘤样纤维组织细胞瘤等20种肿瘤中95％以上的样本均为CD99阳性，T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤等19种肿瘤中大于75％的病人为CD99阳性，胶质母细胞瘤等14种肿瘤中大于55％的病人显示为CD99阳性。尤其是在尤文氏肉瘤中研究发现几乎100％的此类肿瘤为CD99阳性，临床上将其作为尤文肉瘤的诊断标志物。CD99不仅在初症时期的肿瘤中高表达，对于T细胞急性淋巴白血病(T-ALL)而言，CD99的表达用于化疗后免疫微小残留细胞的检测与诊断T-ALL复发的依据。化学抗癌药物在肿瘤的治疗的研究较早，应用也比较广泛。顺铂(Cisplatin，DDP)是1978年FDA批准的首个用于癌症治疗的铂类化合物，常用于治疗多种类型的癌症，包括卵巢癌、睾丸癌、头颈癌、结肠直肠癌、膀胱癌和肺癌等，具有抗癌谱广、作用机制独特、利于临床联合用药等特点。顺铂的抗肿瘤作用与DNA损伤和DNA合成的抑制相关。顺铂与DNA相互作用形成DNA加合物，导致DNA链内或链间交联，激活多种信号通路，诱导氧化应激，激活细胞凋亡，最终导致肿瘤细胞死亡。紫杉醇(Paclitaxel，PTX)最早于1992年被FDA批准用于晚期乳腺癌的治疗。2018年，在美国被批准用于治疗乳腺癌，胰腺癌，卵巢癌，卡波西氏肉瘤和非小细胞肺癌。紫杉醇是从红豆杉中提取出的天然生物碱，对微管蛋白的聚合进程具有明显的刺激作用，同时能够对微管蛋白的解聚反应起到明显的抑制作用，从而提升微管蛋白的稳定性，阻断肿瘤细胞的有丝分裂进程，提高化疗的敏感性。尽管CD99为靶点能够成为有效治疗肿瘤的方法，但是CAR-T细胞治疗肿瘤过程中仍然面临着肿瘤的高度异质性导致的脱靶以及靶点的单一性导致治疗效果不佳等问题。其中肿瘤细胞的高度异质性直接导致了CAR-T疗法在治疗过程中的局限性，而靶点的单一性限制了治疗上的效果和肿瘤的清除。CAR-T联合抗肿瘤药物治疗既可以利用CART细胞的靶向性又具有抗肿瘤药物的广泛性，提高单一疗法治愈率。因此CAR-T联合抗肿瘤药物治疗可能是作为肿瘤治疗和愈后很关键性的治疗手段。申请人在前期研究中制备获得了一种以CD99为靶点的嵌合抗原受体(CAR),(专利公开号CN110590960A)，其携带靶向CD99的ScFv序列，携带该序列的CAR-T细胞可以有效的杀伤任何表面表达CD99的肿瘤细胞，拓展了杀伤肿瘤的广谱性。在此基础上，申请人在对该嵌合抗原受体的临床应用进行更进一步的研究过程中，惊喜地发现，利用携带该序列的CAR-T细胞联合化学抗癌药联合使用，具有协同抗肿瘤的技术效果。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种治疗肿瘤的联合用药方法及其应用，该联合用药的方法将嵌合抗原受体免疫细胞疗法与化学疗法结合起来，具有比单一化学疗法或单一免疫细胞疗法更强的抗肿瘤效果。同时能降低化疗药物的使用剂量，降低化疗药物产生的毒副作用。克服CAR-T细胞治疗肿瘤过程中面临着肿瘤的高度异质性导致的脱靶以及靶点的单一性导致治疗效果不理想等问题。为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：一方面，本专利技术提供一种以CD99为靶点的嵌合抗原受体(CAR)和抗肿瘤药物治疗广谱性肿瘤的联合用药组合物。所述以CD99为靶点的嵌合抗原受体，从N端到C端顺次拼接信号肽、单链抗体ScFv、strepII、CD8hinge、CD28跨膜区、CD28胞内结构域、胞内共刺激域4-1BB和CD3ζ链；优选地，所述单链抗体ScFv能够识别肿瘤细胞表面的CD99抗原。所述信号肽的氨基酸序列如SEQIDNO.5所示，strepII的氨基酸序列如SEQIDNO.7所示，CD8hinge的氨基酸序列如SEQIDNO.9所示，CD28跨膜区(CD28TM)的氨基酸序列如SEQIDNO.11、CD28胞内结构域(CD28ICD)的氨基酸序列分别如SEQIDNO.17所示，胞内共刺激域4-1BB的核苷酸序列如SEQIDNO.13所示，CD3ζ的核苷酸序列如SEQIDNO.15所示。在本专利技术的一些实施例中，单链抗体ScFv的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，优选地，所述单链抗体ScFv的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。在本专利技术的一些实施例中，单链抗体ScFv的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示，对应地，所述单链抗体ScFv的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示。所述抗肿瘤药物包括顺铂和紫杉醇。优选地，上述技术方案中，所述顺铂浓度为32μg/mL，所述紫杉醇的浓度为20nmol/L。<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种广谱抗肿瘤药物组合物，其特征在于，所述抗肿瘤药物的活性成分包括；/n(1)一种表达嵌合型抗原受体的免疫细胞，所述免疫细胞携带有特异性识别肿瘤细胞表面的CD99抗原的单链抗体，所述单链抗体的ScFv的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；/n(2)化学抗肿瘤药物。/n

【技术特征摘要】
1.一种广谱抗肿瘤药物组合物，其特征在于，所述抗肿瘤药物的活性成分包括；
(1)一种表达嵌合型抗原受体的免疫细胞，所述免疫细胞携带有特异性识别肿瘤细胞表面的CD99抗原的单链抗体，所述单链抗体的ScFv的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；
(2)化学抗肿瘤药物。


2.如权利要求1所述的广谱抗肿瘤药物组合物，其特征在于，所述化学抗肿瘤药物选自顺铂或紫杉醇。


3.权利要求1或2所述的抗肿瘤药物组合物在制备治疗抗肿瘤药物制剂中的应用。


4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括尤文...

【专利技术属性】
技术研发人员：张同存，顾潮江，祝海川，周经姣，周勇，史江舟，
申请(专利权)人：武汉波睿达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42