本发明专利技术涉及一种利用酶比色法及酶联法技术的钠（离子）诊断／测定试剂盒，同时本发明专利技术还涉及测定钠（离子）浓度的方法原理、试剂的组成及成分，属于医学／食品检验测定技术领域。本发明专利技术的试剂盒主要成分包括：缓冲液、乳糖、β－半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、还原型色原体组合及稳定剂；通过一系列的酶促反应，最终将无色的还原型色原体组合氧化成有色的染料，从而可以通过可见光分析仪器，在４００－７００ｎｍ波长处，测定染料含量的高低，进而直接反映出钠（离子）浓度的大小。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种钠(离子)诊断/测定试剂盒，同时本专利技术还涉及测定钠 (离子)浓度的方法，属于医学/食品/环境检验测定
技术介绍
血清中钠离子含量(简称"血钠")在临床上有着非常重要的意义，医学上有三个决定水平，依次为水平1——115mmo1/1，水平2——135mmo1/1， 水平3——150mmo1/1。当患者血钠浓度等于或低于水平1时，可出现神志不 清、疲劳、恶心、头痛、呕吐和厌食等症状，表明机体内水的比例大于钠， 应采用相应治疗措施；当血钠浓度低于水平2时，应查找低钠血症的原因， 进一步测定血清渗透压、血钾并进行尿液分析，以确定诊断；当血钠浓度高 于水平3时，应检査其它试验项目，寻找导致高钠血症的原因。现有技术中测定钠离子含量的常用方法有火焰光度计法、离子选择电 极法、化学测定法、原子分光光度法、酶动力学法等。火焰光度计法——1950年开始使用并一直沿用至今，可检测血清、尿液、 脑脊液及胸腹水中的Na+和K+，是一种发射光谱分析法，其结果准确可靠， 广为临床采用。该方法分为内标准法和外标准法两种。外标准法操作误差较 大， 一般不采用。现在主要使用内部标准法，即向标本及标准液中加进相同 浓度的内部标准元素锂或铯进行测定，操作时，将含锂的溶液作为稀释液， 同时测定K+、 Na+和Li+的浓度，以标本与标准液的^+/0+与1^+/0+比值， 计算Na+、 K+浓度。由于血清稀释倍数大，血清蛋白质粘性的影响几乎可以 忽略不计。离子选择电极法——简称ISE法，是采用灵敏的特定专用电极，在专用 仪器上进行血清和尿等体液中的K+、 Na+的测定，因标本用量少，快速准确，6几乎有取代其它方法的趋势。其测定原理是，用离子选择电极与参比电极组 合起来，浸泡在待测标本溶液中进行检测。目前已有的电极种类有①玻璃 膜电极，感应材料为玻璃薄膜，有PH电极、K+电极和Na+电极；②固相膜电极，由难溶性金属物质加压成型，以固体膜或单日膜作为感应膜，有c卜电极和F-电极；③液态膜电极，将环氧树脂或内装聚氯乙稀作为感应膜，有Cf电极；④用缬氨霉素膜制成的K+电极。上述电极均有一定的使用寿命，因为 电极使用一段时间后就会自动老化，有效期长短不一。目前离子选择电极法 应用也较为普遍，但是电极成本昂贵。此外，化学测定法主要利用复环王冠化合物如穴冠醚或球冠醚，作为离 子载体进行测定。由于大环结构内有空穴，分子内部的氧原子有未共用电子 对可与金属离子结合，根据空穴大小，可选择性结合不同直径的金属离子， 从而达到测出离子浓度的目的；原子分光光度法也可用于检测血清中K+、 Na + ，但操作繁杂，误差较大，不及火焰光度法简便。酶法测定钠离子含量的方法，与火焰光度计法或离子选择电极法都有较 好的一致性，这种方法抗干扰性强、稳定性好，但用生化分析仪不能同时测 定钠离子和钾离子各自的含量，导致这种方法不能得到推广应用。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提出一种利用酶比色法(Enzymatic Colorimetric Method)及酶联法(Couple Reaction)技术，计量通过酶联反应 生成吲嗒胺色原(Indaminedye)或醌亚胺色原(Quioneimine dye)所导致在 400—700nm波长处吸光度的上升，得以测定钠(离子)浓度的方法，同时， 本专利技术还将给出用以实现该方法的钠(离子)诊断/测定试剂盒，采用该试剂 不仅可以在可见光分析仪或半、全自动生化分析仪上进行钠(离子)浓度测 定，而且测定速度快、灵敏度大、准确度高，因而可以得到切实的推广应用。 本专利技术钠(离子)浓度测定方法原理如下乳糖+水(3-半乳糖苷酶"3+葡萄糖+半乳糖葡萄糖+氧葡萄糖氧化酶葡糖酸内酯+过氧化氢 过氧化氢+还原型色原组合过氧化物酶 巧l嗒胺色原或醌亚胺色原+水这个方法应用需要钠离子激活的P -半乳糖苷酶((P-galactosidase ; EC 3.2丄23)具有乳糖酶(lactase ; EC3.2丄108)的特性，(偶)联葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase; EC 1.1.3.4)及过氧化物酶(peroxidase ; EC 1.11.1.7)酶促反应速率比色法。在钠离子的激活下，P -半乳糖苷酶酶解乳糖反应产生葡 萄糖，再通过(偶)联合葡萄糖氧化酶、过氧化物酶的作用，最后生成的过 氧化氢在过氧化物酶的作用下，将无色的还原型色原体组合氧化成有色的染 料，从而可以通过可见光分析仪器，在400—700nm (根据还原型色原体组合 的不同而定)波长处，测定染料一吲嗒胺色原(Indaminedye)或醌亚胺色原 (Quioneiminedye) —含量高低的光吸收大小；通过测量400—700nm (根据 还原型色原体组合的不同而定)处吸光度上升的速度，得出钠(离子)浓度 大小测定结果。实验表明，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑，如下成分关系的本专利技术钠(离子)诊断/测定试剂盒较为理想缓冲液 10Ommol/L稳定剂 过氧化物酶 (3 -半乳糖苷酶 葡萄糖氧化酶 乳糖500 mmol/L 30000 U/L 10000U/L 12000U/L 20 mmol/L还原型色原体组合0.1--20 mmol/L所述还原型色原体组合(Chromogen)可以是下列28个组合中的任何一个配对组合3-甲基-2-苯噻唑酮腙石碳酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙N-乙基^N- (3-硫丙基)-m-噻啶胺3-甲基-2-苯噻唑酮腙 N,N-双乙基-m-甲苯胺3-甲基-2-苯噻唑酮腙2.4- 双氯石碳酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙 2,4,6-仨溴-3-羟基-苯磺酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙3.5- 双氯石碳酸磺酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙 3,5-双氯-2-羟基-苯磺酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙N-乙基-N- (2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺钠盐3-甲基-2-苯噻唑酮腙 仨溴羥基苯甲酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙双甲基苯胺3-甲基-2-苯噻唑酮腙N-乙基-N- (2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺3-甲基-2-苯噻唑酮腙2,2，-AZINO-双(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)3- 甲基-2-苯噻唑酮腙4- 羥基-3-甲氧基苯甲酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙 3-甲基-乙基-羥基苯胺94-氨基抗砒石碳酸4-氨基抗砒N-乙基一N- (3-硫丙基)-m-噻啶胺4-氨基抗砒 N，N-双乙基-m-甲苯胺4-氨基抗砒2.4- 双氯石碳酸4-氨基抗砒2,4,6-仨溴-3-羟基-苯磺酸4-氨基抗砒 3，5-双氯石碳酸磺酸4-氨基抗砒3.5- 双氯-2-羟基-苯磺酸 4-氨基抗砒N-乙基-N- (2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺钠盐4-氨基抗砒仨溴羥基苯甲酸4-氨基抗砒 双甲基苯胺4-氨基抗砒N-乙基-N- (2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺 4-氨基抗砒2,2'-AZINO-双G-乙基苯噻唑-6-磺酸) 4-氨基抗砒4-羥基-3-甲氧基苯甲酸4-氨基抗砒 3-甲基-乙基-羥基苯胺本专利技术的钠(离子)诊断/测定试剂盒可以是单剂，包括 缓冲液、稳定剂、(3 -半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、乳糖、还原型色原体组合。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种酶比色法及酶联法技术的钠（离子）浓度测定方法，其方法原理如下： 乳糖＋水 β－半乳糖苷酶／Ｎａ↑［＋］ 葡萄糖＋半乳糖 葡萄糖＋氧 葡萄糖氧化酶 葡糖酸内酯＋过氧化氢 过氧化氢＋还原型色原组合 过氧化物酶 吲嗒胺色原或醌亚胺色原＋水 将最终反应物置于可见光分析仪下，检测４００－７００ｎｍ处直接反映吲嗒胺色原或醌亚胺色原含量高低的光吸收速度，得出钠（离子）浓度大小测定结果。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王尔中，
申请(专利权)人：苏州艾杰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]
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