钠(离子)诊断/测定试剂盒及钠(离子)浓度测定方法技术

本发明专利技术涉及一种利用酶比色法及酶联法技术的钠（离子）诊断／测定试剂盒，同时本发明专利技术还涉及测定钠（离子）浓度的方法原理、试剂的组成及成分，属于医学／食品检验测定技术领域。本发明专利技术的试剂盒主要成分包括：缓冲液、辅酶、乳糖、β－半乳糖苷酶、半乳糖氧化酶、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ氧化酶及稳定剂；通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生一系列的酶促反应，再将反应物置于紫外／可见光分析仪下，检测主波长３４０ｎｍ处吸光度上升的速度，从而测算出钠（离子）的浓度大小。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种钠(离子)诊断/测定试剂盒，同时本专利技术还涉及测定钠 (离子)浓度的方法，属于医学/食品/环境检验测定

技术介绍
血清中钠离子含量(简称"血钠")在临床上有着非常重要的意义，医学上有三个决定水平，依次为水平1——115mmo1/1，水平2——135mmo1/1， 水平3——150mmo1/1。当患者血钠浓度等于或低于水平1时，可出现神志不 清、疲劳、恶心、头痛、呕吐和厌食等症状，表明机体内水的比例大于钠， 应采用相应治疗措施；当血钠浓度低于水平2时，应查找低钠血症的原因， 进一步测定血清渗透压、血钾并进行尿液分析，以确定诊断；当血钠浓度高 于水平3时，应检査其它试验项目，寻找导致高钠血症的原因。现有技术中测定钠离子含量的常用方法有火焰光度计法、离子选择电 极法、化学测定法、原子分光光度法、酶动力学法等。火焰光度计法——1950年开始使用并一直沿用至今，可检测血清、尿液、 脑脊液及胸腹水中的Na+和K+，是一种发射光谱分析法，其结果准确可靠， 广为临床采用。该方法分为内标准法和外标准法两种。外标准法操作误差较 大， 一般不采用。现在主要使用内部标准法，即向标本及标准液中加进相同 浓度的内部标准元素锂或铯进行测定，操作时，将含锂的溶液作为稀释液， 同时测定K+、 Na+和Li+的浓度，以标本与标准液的Na+7Li+与K+7Li+比值， 计算Na+、 K+浓度。由于血清稀释倍数大，血清蛋白质粘性的影响几乎可以 忽略不计。离子选择电极法——简称ISE法，是采用灵敏的特定专用电极，在专用 仪器上进行血清和尿等体液中的K+、 Na+的测定，因标本用量少，快速准确， 几乎有取代其它方法的趋势。其测定原理是，用离子选择电极与参比电极组4合起来，浸泡在待测标本溶液中进行检测。目前已有的电极种类有①玻璃 膜电极，感应材料为玻璃薄膜，有PH电极、K+电极和Na+电极；②固相膜电 极，由难溶性金属物质加压成型，以固体膜或单日膜作为感应膜，有C卜电极和F-电极；③液态膜电极，将环氧树脂或内装聚氯乙稀作为感应膜，有Ca^ 电极；④用缬氨霉素膜制成的K+电极。上述电极均有一定的使用寿命，因为 电极使用一段时间后就会自动老化，有效期长短不一。目前离子选择电极法 应用也较为普遍，但是电极成本昂贵。此外，化学测定法主要利用复环王冠化合物如穴冠醚或球冠醚，作为离 子载体进行测定。由于大环结构内有空穴，分子内部的氧原子有未共用电子 对可与金属离子结合，根据空穴大小，可选择性结合不同直径的金属离子， 从而达到测出离子浓度的目的；原子分光光度法也可用于检测血清中K+、 Na + ，但操作繁杂，误差较大，不及火焰光度法简便。酶法测定钠离子含量的方法，与火焰光度计法或离子选择电极法都有较 好的一致性，这种方法抗干扰性强、稳定性好，但用生化分析仪不能同时测 定钠离子和钾离子各自的含量，导致这种方法不能得到推广应用。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提出一种利用酶比色法(Enzymatic Colorimetric Method)及酶(偶)联法(Couple Reaction)技术，连续监测还 原型烟酰胺辅酶(还原型辅酶)在340nm波长处吸光度的变化，得以测定钠 (离子)浓度的方法，同时，本专利技术还将给出用以实现该方法的钠(离子) 诊断/测定试剂盒，采用该试剂不仅可以在紫外/可见光分析仪或半、全自动生 化分析仪上进行钠(离子)浓度测定，而且测定速度快、准确度高，因而可 以得到切实的推广应用。本专利技术钠(离子)浓度测定方法原理如下乳糖+水(3-半乳糖苷酶^矿葡萄糖+半乳糖半乳糖+氧半乳糖氧化酶D-galacto-hexodialdose +过氧化氢过氧化氢+辅酶 NAD(T)H氧化酶 还原型辅酶+氧 这种方法应用需要钠离子激活的(3-半乳糖苷酶(P-galactosidase ; EC 3.2丄23)具有乳糖酶(lactase ; EC3.2丄108)的特性，酶(偶)联半乳糖氧化 酶(D陽galactose oxidase; EC 1.1.3.9)、 NAD(P)H氧化酶(NADPH oxidase; EC 1.6.3.1)酶促反应速率比色法。在钠离子的激活下，P-半乳糖苷酶酶解乳 糖反应产生半乳糖，再通过(偶)联合半乳糖氧化酶、NAD(P)H氧化酶的作 用，最终将辅酶(在340nm处没有吸收峰)还原成为还原型辅酶(在340nm 处有吸收峰)，从而得以测定还原型辅酶在340nm处吸光度上升的速度，通过 测量340nm处吸光度上升的速度，可以测算钠(离子)的浓度大小。实验表明，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑，无 论是单剂、双剂还是三剂，如下成分关系的本专利技术钠(离子)诊断/测定试剂盒较为理想缓冲液 100 mmol/L稳定剂 500 mmol/L辅酶 3 mmol/L(3-半乳糖苷酶 10000 U/L半乳糖氧化酶 12000 U/LNAD(P)H氧化酶 12000 U/L乳糖 20 mmol/L本专利技术的钠(离子)诊断/测定试剂盒可以是单剂，包括缓冲液、稳定剂、辅酶、P-半乳糖苷酶、半乳糖氧化酶、NAD(P)H氧化酶、乳糖。试剂盒可以是十粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试 剂，直接使用。也可以将上述单剂试剂配成如下双剂试剂 试剂1缓冲液、稳定剂、辅酶、乳糖。 试剂2缓冲液、稳定剂、P-半乳糖苷酶、半乳糖氧化酶、NAD(P)H氧化酶。 辅酶、卩-半乳糖苷酶、半乳糖氧化酶、NAD(P)H氧化酶、乳糖在试剂l或 试剂2中的位置可以不限。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使 用；也可以配制成液体试剂，直接使用。还可以将上述单剂试剂配成如下三剂试剂 试剂1缓冲液、稳定剂、辅酶、乳糖。 试剂2缓冲液、稳定剂、半乳糖氧化酶、NAD(P)H氧化酶。 试剂3缓冲液、稳定剂、P-半乳糖苷酶。辅酶、P-半乳糖苷酶、半乳糖氧化酶、NAD(P)H氧化酶、乳糖在试剂l、 试剂2或试剂3中的位置可以不限。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水 溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。无论是单剂、双剂还是三剂，本专利技术测定钠(离子)浓度的方法，其辅酶 可以是NADP十、NAD+或thio- NAD十中的 一种。具体实施例方式下面结合实施例子对本专利技术作进一步的说明。 实施例一本实施例的钠(离子)诊断/测定试剂为单试剂，包括三(羧甲基)氨基甲垸一盐酸缓冲液 100mmol/L 稳定剂 500 mmol/L辅酉每 3 mmol/LP-半乳糖苷酶 10000 U/L半乳糖氧化酶 12000 U/LNAD(P)H氧化酶 12000 U/L乳糖 20 mmol/L试剂全部溶解配好后，分装入瓶，进行冷冻干燥，制成干粉试剂；使用前，加入纯净水，复溶后使用。在全自动生化分析仪上设定温度37i:，反应时间10分钟，起始吸光度《0.1，测试主波长340nm，测试副波长405nm，被测钠(离子)样品与试剂的体积比例为1/25，反应方向为正反应(上升反应)，延迟时间大约2分钟左右，检测时间2分钟左右。加入样品和试剂后，使之混合并发生反应，最终将反应物置于生化分析仪下，检测主波长340nm吸光度上升的速度，从而测算出钠(离子)的浓度大实本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种酶比色法及酶联法的钠（离子）的浓度测定方法，其方法原理如下：　乳糖＋水　β－半乳糖苷酶／Ｎａ↑［＋］　葡萄糖＋半乳糖　半乳糖＋氧　半乳糖氧化酶　Ｄ－ｇａｌａｃｔｏ－ｈｅｘｏｄｉａｌｄｏｓｅ＋过氧化氢　过氧化氢＋ 辅酶　ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ氧化酶　还原型辅酶＋氧　将最终反应物置于紫外／可见光分析仪或半、全自动生化分析仪下，检测主波长３４０ｎｍ吸光度上升的速度，测算出钠（离子）的浓度大小测定结果。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王尔中，
申请(专利权)人：苏州艾杰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]