使用嵌合抗原的免疫诊断检测法制造技术

本发明专利技术涉及用于对感染或其他病态进行诊断和预后检测的嵌合抗原。本发明专利技术提供一种含有嵌合抗原的药盒、一种制备嵌合ＨＩＶ抗原的方法、一种检测样品中抗ＨＩＶ抗体的方法及一种表达载体。（*该技术在2008年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用于对感染或其他病态进行诊断和预后检测的嵌合抗原。各种免疫诊断检测法都是基于抗原与其相应抗体之间的结合亲和力。当形成抗原-抗体复合物时，可用各种检测系统，如放射性同位素、荧光标记或酶如辣根过氧化物酶来检测复合物。使用免疫测定技术多年来已成为标准实验室常规。所有各种检测法的基本原则都是使标记的抗原与预选的抗体结合，然后测定结合的复合物的量。近年来，使用单克隆抗体代替多克隆抗体，提高了测定的灵敏度和特异性。然而，使用单克隆抗体代替多克隆抗体，并不能完全解决特定检测的特异性或灵敏度问题。在抗体抗原复合物形成之后，仍然继续竞争分子上的特定结合位点。许多免疫检测法依赖于结合复合物对最初用以结合到固相载体上的同一抗体的识别。因为竞争可利用的结合位点，所以在检测的两个关键点上依赖同一抗体，会进一步降低灵敏度。另外，缺乏抗体的特异性可导致出现“假阳性”，尤其是在这样一些免疫检测中，其中正在对疾病进展的各阶段进行诊断，并且，与特定疾病阶段有关的抗原决定基的识别具有重要意义。为了解决这个问题，已设计了“两位点”或“夹心”免疫测定法。在这种类型的免疫检测法中，有两个抗体结合到抗原表面上，其中一个是放射标记的或已有某些其他检测分子结合到该抗体上，而另一抗体则结合到固相载体上。这样，减少了对分子上特定结合位点的竞争。夹心法则因使用高度纯化的抗体而可进一步提高特异性。对于某些疾病，早期诊断以及鉴定疾病的阶段可能是十分重要的，其中一个例子就是获得性免疫缺陷综合症(爱滋病)。HIV-爱滋病及相关疾病的致病因子，是还原病毒科的一个成员。存在有几种包括人类Ⅲ型嗜T淋巴细胞病毒(T-LymphotropicVirus，HTLV-Ⅲ)、淋巴结病病毒(LAV)和爱滋病相关还原病毒(ARV)在内的HIV的分离物。最近发现定名为2型HIV的相关还原病毒与西非的爱滋病有关(Cuyaderetal.，Nature326662，1987)。HIV基因组的分子特征表明，该病毒具有与其他还原病毒一样的整个gag-pol-env结构(Ratneretal.，Nature313277，1985;Wain-Hobsonetal.，Cell409.1985)。此外，它至少含有5个未见于较常见的还原病毒的基因Sor、tat3、art/trs、3′orf和R。鉴于爱滋病的严重性，早期并准确地诊断HIV感染，以及由血库中检出并除掉HIV污染的样品，是极其重要的。Callo等人在美国专利4，520，113号中公开了使用得自HTLV-Ⅲ的抗原检测血清中存在的抗HTLV-Ⅲ抗体。Montagnier等人在EP-A-138，667号中公开了使用特定的LAV抗原检测病毒感染。Papas等人在美国专利申请6，664，972号(德温特登记号85-110268/18)中公开了HTLV-Ⅰ被膜蛋白编码顺序在大肠杆菌内的表达，以及所表达的蛋白质在检测HTLV-Ⅰ感染中的应用。Crowl等人(Cell，41979，1985)报导了HTLV-Ⅲ被膜蛋白基因(env)的某些部分在大肠杆菌内的表达，以及这些蛋白质在检测HTLV-Ⅲ感染中的应用。Casey等人(J。Virol。，55417，1985)报导了一种gag基因产物(一种定名为p24的HTLV-Ⅲ内部结构蛋白)的纯化方法，以及该蛋白在检测HTLV-Ⅲ感染中的应用。本领域的许多研究者从事在细菌中表达爱滋病还原病毒的各种抗原的研究。最近构建了具有HIV特定片段顺序的一些新肽，用作接触爱滋病病毒的检测试剂(Cosand，美国专利4，629，783号;Capon等人，EP-A-187041号)。Steimer等人(J。Virology，589，1986)描述了使用来自爱滋病还原病毒聚合酶基因(pol)的核酸内切酶区域的重组多肽，检测被感染者血清抗体的方法。Chang在EP-A-185，444中描述了一种用含有编码env基因顺序的HTLV-ⅢcDNA的重组载体转化的细胞所表达的多肽，以及这种免疫活性多肽在检测HTLV-Ⅲ中的应用。Dowbenko等人描述了爱滋病还原病毒p24gag蛋白在大肠杆菌内的表达，及其作为诊断试剂的应用。Chrayeb等人(DNA，593，1986)和Steimer等人(Virology，150283，1986)还报导了HTLV-Ⅲ核心抗原在大肠杆菌内的合成及其与人血清的免疫反应活性。本专利技术的一个实施方案中描述了用于检测针对特定抗原的抗体的免疫诊断药盒(device)。该药盒包括一种固相载体，与固相载体相结合的抗体及具有第一和第二抗原区的嵌合抗原，其中第一抗原区与已结合的抗体反应，但不与识别第二抗原区的抗体产生交叉反应。本专利技术的另一实施方案是一种制备嵌合HIV抗原的方法，包括使大肠杆菌半乳糖激酶(galK)基因的一部分与HIV基因片段相融合，并将所得的融合基因片段引入一种生物体内，然后培养该生物以使之表达嵌合HIV抗原。本专利技术的另一实施方案描述了一种表达载体，包括一个启动子及一个galK基因部分，后者邻接一个不与galK起交叉反应的抗原的编码顺序。在本专利技术的再一个实施方案中，描述了一种检测样品中抗HIV抗体的方法。使样品与结合到固相载体上的galK-HIV嵌合抗原接触，使得只有含HIV特异性免疫球蛋白的样品与嵌合HIV抗原结合，从而完成抗体的检测。本专利技术的嵌合抗原是一种融合蛋白，编码该融合蛋白的顺序包含编码不能与目的蛋白产生交叉反应的基因产物的一部分大肠杆菌基因，以及与其融合的编码目的蛋白的基因片段。目的基因片段可以是编码与特定疾病或疾病状态(如爱滋病、淋病、梅毒等性传播的疾病、衣原体病或乙型肝炎)有关的蛋白质的基因片段。反映特定疾病或疾病状态的其他特异性基因产物，如与特异性肿瘤、遗传异常、其他细菌、真菌、病毒或寄生虫性疾病(如由疟原虫、锥虫、假丝酵母、毕赤酵母、沙门氏菌、假单孢菌等引起的疾病)有关的蛋白质，亦可作为融合蛋白而表达。因为嵌合抗原的一部分特异地针对特定疾病或疾病状态，所以用嵌合抗原来诊断或预后疾病是有利的。使用融合系统如大肠杆菌galk系统还可提供一种高水平表达嵌合抗原的方法，特别是当嵌合抗原不能由其未融合的基因片段来表达很差的情况下。嵌合抗原的galk部分可起到连接其他特异性蛋白质的“柄”的作用。由于其特异性，嵌合抗原还提供了一种纯化蛋白质的有效方法。可以使用的其他galK样“柄”包括流感NS-1蛋白质的某些部分、噬菌体λO蛋白、大肠杆菌β-半乳糖苷酶蛋白、或任何可在大肠杆菌或其他细菌、酵母、高等真核细胞等重要重组宿主内很好表达的蛋白质。但在选择“柄”时，必须使融合蛋白的柄部分具有免疫识别能力，但又不被样品中的结合位点识别。嵌合抗原在免疫诊断药盒中是有用的，它不仅提供了对目的蛋白的高度特异性，而且提高了检测方法的灵敏度。因为嵌合抗原的一部分不被样品(如人或动物血液、血浆、血清、唾液、痰、排泄物或其他体液)所识别，所以目的蛋白的所有抗原决定基均可用来结合样品。这一特性大大提高了特异性，并且是对使用特异性单克隆抗体的一种改进。使用单克隆抗体，有可能出现两种单克隆抗体识别目的抗原上交叠的抗原决定基并因而竞争结合位点的情况。由于galK柄部分所独具的特异性，所以将嵌合抗原用于免疫诊断测本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测抗某种特定抗原的抗体的免疫诊断药盒，包括　　ａ）一种固相载体，　　ｂ）一种结合到固相载体上的抗体，　　ｃ）一种具有第一和第二抗原区的嵌合抗原，其中第一抗原区可与结合的抗体反应，但不与识别第二抗原区的抗体产生交叉反应。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：克里丝汀玛丽迪宝克，马丁罗森堡，
申请(专利权)人：史密丝克莱恩贝克曼公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]