初级细胞的永久化制造技术

应用电穿孔作为一种传染方法，用致癌基因ＤＮＡ／致癌基因使初级细胞永久化。（*该技术在2007年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
此申请为1986年2月28日提交的835，089号待批申请的继续部分。本专利技术是关于以致癌基团DNA/致癌基因转染初级细胞，应用电穿孔技术将此DNA转移到这些细胞中以生产永久化初级细胞的一种方法。将DNA转染到哺乳动物细胞，在基因表达和调节的研究中，作出了重要的贡献。这一技术有助于发现新的基因，而分子探针则对其并不适用。惯常引导基因进入细胞的种种方法，可分为自然的和人工的两个系统。“自然的”转染是通过完整的(或经遗传操纵处理的)病毒感染细胞来完成的。来自病毒(DNA，RNA)的遗传信息可被整合到宿主细胞DNA中，结果导致缩主细胞的转化作用。“人工的”转染是在试管中操作处理DNA并将其导入不同起源的完整细胞，通常用化学的或手工的方法来完成。若干技术已发展到引导DNA进入体细胞中。这些技术可分为下述五种，依靠这些不同的方法将大分子转移到受体细胞内1.微量注射法〔Graessmann等，Hoppe-seyler′s Z Physiol.Chem.，352，527-532，(1971);Capecchi，Cell，22，470-488(1980)〕。2.载体介导的转移一、红细胞影本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生产永久化初级细胞系的方法，此方法包括：（ａ）提供正常的、经激活／刺激的初级细胞；（ｂ）经电穿孔作用用致癌基因ＤＮＡ／致癌基因（包含或不包含于脂质体中）转染上述初级细胞，从而产生转染了的初级细胞；以及（ｃ）自上述转染的初级细 胞中回收永久化的初级细胞系。

【技术特征摘要】
US 1987-1-30 ;US 1986-2-28 835,089范围内的所有实施方案。权利要求1.一种生产永久化初级细胞系的方法，此方法包括(a)提供正常的、经激活/刺激的初级细胞；(b)经电穿孔作用用致癌基因DNA/致癌基因(包含或不包含于脂质体中)转染上述初级细胞，从而产生转染了的初级细胞；以及(c)自上述转染的初级细胞中回收永久化的初级细胞系。2.根据权利要求1的方法，其中致癌基因DNA是从初级细胞肿瘤或肿癌初级细胞系得来的基因组DNA，其中这样的肿瘤或肿瘤细胞系具有与将被永久化初级细胞类型相一致的起源。3.根据权利要求1的方法，其中致癌基因是从一初级细胞肿瘤或肿瘤的初级细胞系得来的，其中这样的肿瘤或肿瘤细胞系具有与将被永久化的初级细胞类型相一致的起源。4.根据权利要求2的方法，其中初级细胞是造血细胞源。5.根据权利要求4的方法，其中初级细胞是多潜能干细胞、B-淋巴细胞、B-系细胞前体、T-淋巴细胞。T-系细胞前体、髓样干细胞、单核细胞、巨噬细胞、中性白细胞、嗜曙红细胞、巨核细胞或肥大细胞。6.根据权利要求4的方法，其中初级细胞都是B-淋巴细胞。7.根据权利要求5的方法，其中B一淋巴细胞是已用抗原激活/刺激过的。8.根据权利要求5的方法，其中致癌基因是Ha-ras致癌基因或P53-H7致癌基因。9.根据权利要求6的方法，其中致癌基因DNA是从BJAB得来的基因组DNA。10.根据权利要求6的方法，其中致癌基因DNA是从REH细胞系得来的基因组DNA。11.根据权利要求6的方法，其中致癌基因DNA是从EL4细胞系得来的基因组DNA。12.根据权利要求1的方法产生的永久化的初级细胞系。13.根据权利要求12的细胞系，其中致癌基因DNA是从初级细胞肿瘤或肿瘤初级细胞系得来的基因组DNA，其中这样的肿瘤或肿瘤细胞系具有与将被永久化的初级细胞系类型相一致的起源。14.根据权利要求12的细胞系，其中致癌基因是从初级细胞肿瘤或肿瘤初级细胞系得来的，其中这样的肿瘤或肿瘤细胞系具有与将被永久化的初级细胞类型相一致的起源。15.根据权利要求12的细胞系，其中初级细胞是造血细胞源。16.根据权利要求15的细胞系，其中的初级细胞是多潜能干细胞、B-淋巴细胞、B-系细胞前体、T-淋巴细胞、T-系细胞前体、髓样干细胞、单核细胞、巨噬细胞、中性白细胞、嗜曙红细胞、巨核细胞或肥大细胞。17.根据权利要求16的细胞系，其中初级细胞是B-淋巴细胞。18.根据权利要求17的细胞系，其中B一淋巴细胞是已用抗原激活/刺激过的。19.根据权利要求16的细胞系，其中致癌基因是Ha-ras致癌基因。20.根据权利要求16的细胞系，其中致癌基因DNA是来自BJAB基因组DNA。21.根据权利要求16的细胞系，其中致癌基因DNA是从REH细胞系得来的基因组DNA。22.根据权利要求16的细胞系，其中致癌基因DNA是从EL4细胞系得来的基因组DNA。23.一种生产生物制品的方法，其中生物制品的编码序列包含在含于永久化的初级细胞系中的DNA内，此方法包括(a)提供正常的、经激活/刺激的初级细胞;(b)经电穿孔作用用致癌基因的DNA/致癌基因(可任意选择地包含于脂质体中)转染上述初级细胞，从而产生转染的初级细胞;(c)自这种转染的初级细胞回收永久化的初级细胞系;并且(d)在能够生产此生物制品的条件下培养此种永久化的细胞系。24.一种生产含有外源功能性DNA序列的共转染的永久化初级细胞系的方法，该方法包括(a)提供正常的、经激活/刺激过的初级细胞;(b)用致癌基因DNA/致癌基因和外源功能能性DNA序列(可任意选择地包含于脂质体中)经电穿孔共转染这种初级细胞，从而产生共转染的初级细胞;(c)从这种共转染的初级细胞回收含有外源功能性DNA序列的永久化的初级细胞系...

【专利技术属性】
技术研发人员：爱德华马克亨利，兹登卡勒德米拉乔纳克，帕特里克西蒙雅克马希，
申请(专利权)人：史密丝克莱恩贝克曼公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]