多元同步标记分析法制造技术

本发明专利技术是一种生物试样（如血、尿及其它）中的物质测量方法，它建立在固相标记分析的基础上，原理是将多种抗原抗体或其它特异性结合物，分别包被在固相载体上，在同一体系里与相应的抗体、抗原或其他特异性结合物反应，达到同时测定几种物质成分含量的目的。这个方法具有节省标本，操作简单，降低成本，减少误差等优点。（*该技术在2013年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物标样(血、尿及其它)标记分析方法，特别适用于免疫测定即血、尿液或其他生物样品中抗原、抗体及机体成分的测定方法，临床工作中，为了诊断一种疾病，经常需要测定多种成分，常规的标记分析，只能一种一种地测定，即取一份标本血清或其他样品经过一系列的技术操作处理，获得一种成分的含量值，分析的项目越多，耗费的时间就越多，需要的样品也就越多，取大量的样品，对病人是一种痛苦，以乙肝表面抗原，E抗原，表面抗体，E抗体、核心抗体，通常称之为两对半的测定为例，要取得这五种数据，需要作五次操作处理，需要取五份总计0.8毫升血清标本，对儿童来说取够所需的血量并非容易的事，特殊标本的取材更困难，甚至无法测定多种必要的项目，影响论断，另外，检测多种项目要进行多次技术操作，工作量大，消耗多，误差因素也多。本专利技术的目的就是针对上述现有标记分析法的不足，建立了一种只用一份标本(血清或其他)进行一次操作处理，就可以完成多种项目检测的方法，从而提高了标记分析的效率，简化了操作，减少了标本用量，减少了误差的机会。本专利技术称作多元同步标记分析法，它是在常规固相标记分析的基础上开发出来的，多元同步标记分析的理论基础是免疫学的特异性-即抗体只与相应的抗原结合，Cutt和Treager的抗体包被塑料载体的新技术，为多元同步标记分析的专利技术奠定了技术条件。长时以来，人们始终沿用常规的标记分析法，是因为客观上存在着若干尚未解决的实际问题，如免疫学的特异性虽然在理论上被承认，但多种抗原抗体在同一体系同时进行反应时，不同抗原抗体之间有无交叉反应，可否造成干扰;常规的固相载体，无论包被上什么特异物，在外观上均无差别，难于分辨;常规固相标记分析用的试剂，是否适合多元同步标记分析使用，有无干扰物存在，如何将干扰物分离;常规的标记分析，需要一系列的标准管，如果多元同步标记分析沿用常规方法，每一种被测物都带一系列标准管，操作复杂，浪费试剂，多元同步标记分析的优越性也就体现不出来;多元同步标记分析的反应体系必然要增大，被测物和试剂的浓度势必降低，反应机率减少，灵敏度降低。只有解决上述几个问题，多元同步标记分析法才能建立。本专利技术通过大量的试验观察，确认了如下的原则和方法。1、常用的抗体特导性很高，在同一体系内多对抗原抗体可以互不干涉地进行特导性反应。2、常规固相标记分析的试剂，因为存在干扰物，不能简单地混合使用，需要根据分析项目作认真地分析，必要地检测，查出干扰因素，用物理或化学方法将干扰除去。3、常用的固相载体为聚乙烯、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、聚丙烯酰胺，聚丙烯醛、尼龙等或涂有上述材料的固相支持物，都可用于多元同步标记分析法，为了区分不同的包被物，本专利技术采用热灼，钻孔等方法制造区分标态，也可用形志，大小作为区分标志，也可以加彩色。实验证明，这些标志方法是行之有效的。如果包被珠在试管内不能上下易位，顺序可以成为区分的标志。利用空吸法，使分珠操作既简单，又迅速、准确。4、本专利技术配制了共用标准，减少了标准管数目，节省了试剂，简化了操作。常规标记分析的标准品，只要含量准确，含有杂质并没有影响，例如，常规分析法表面抗原阳性对照中含有E抗原或其他并不影响表面抗原的测定。若用这种试剂配制多元同步测定的阳性对照，就会产生干扰。配制多元同步测定标准的试剂，需根据测定的项目，认真分析所用试剂是否存在干扰因素。若存在干扰因素，则采用化学、物理方法除去干扰，进行必要的纯化处理。以HBsAg HBeAg HBcAb同步放射性标记分析的试剂要求列表如下+表示必须达到一定量，-表示不能存在，0表示无关。试剂成分试剂 HBsAg HBsAb HBeAg HBeAg HBcAg HBcAbHBsAgHBeAg阳性对照 + - + - - +HBcHbHBsAgHBeAg阴性对照 - - - - - -HBcAb标记HBcAb - - - - - -HBsAbHBeAb标记试剂 - + - + 0 0HBcAg包被珠 - - - - + -HBsAb包被珠 - + - - - -HBeAb包被珠 - - - + - -5、由于多元同步标记分析的反应体系要比常规法增大，反应试剂和被测物的浓度降低，本专利技术采用延长反应时间，如实例延长1倍，增加反应机率予以解决。本专利技术的技术方案就是在上述实验观察的基础上提出的。利用抗原抗体或他特异性结合物，包被在固相材料上，在同一反应体系里，在固相载体上与被测的抗原或其他结合物，分别进行特异反应，进行定性、定量测定，其特征在于a、多种被测物在同体系，同一试料里，同时进行反应。b、被测物种类根据固相的标志或顺序区分。c、多种被测物标准，融汇在同一样品里。具体操作步骤如下1、标本制备因多元同步标记分析法，建立在常规的固相分析基础上，因此对标本无特殊要求，与常规方法处理保存标本的原则相同。2、试剂常规法是单一成分测定，只要试剂适用于某成分的测定即可，即使存在无关成分，只要不干扰该项测定即可，多元同步标记分析要求不含干扰同一体系其他成分测定的物质，这需要对试剂进行加工处理提纯。可以采用任一种提纯法，最方便的是亲和层析法。3、反应方法这个方法的核心技术是利用不同的抗体(抗原或其他特异性结合物)包被在各不相同的可以区分的在固相载体上，在同一体系分别摄取相应的抗原(抗体或其他特异性结合物)将被测物分离，在去除无关因素或干扰因素后，再加标记抗体(抗原或其他特异性结合物)，通过标记物定量，计算被测物含量。操作方法与常规的固相标记分析法类同即夹心法，竞争法，中和法。常规方法是单一成分测定，多元同步法则可以结合使用多种方法即在同一体系既有夹心过程，又存在竞争过程、中和过程。4、数据处理a、标准曲线法用于定量测定。b、定性分析计数与含量成负相关的定性测定法-中和法、竞争法以样品计数低于阴性对照的50%为阳性;计数与含量成正相关的定性测定-夹心法，以样品计数高于阴性对照的2.1倍为阳性。c、根据数据统计原理，作正规的七检验判断阴性或阳性更好。下面结合多元同步标记分析举例，作进一步的说明(一)HBsAg HBeAg HBcAB同步放射性标记分析。1、设备放射性标记分析实验室常规仪器，计数器，洗珠设备，分珠器等。2、试剂(1)、HBsAg、HBeAg、HBcAb阴性对照下称三阴对照血清。(2)、HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性对照下称三阳对照血清。(3)、HBsAb包被珠。(4)、HBeAb包被珠。(5)、HBcAg包被珠。(6)、HBcAb、HBeAb复合标记试剂。三、方法三阴管 三阳管 被测样品管三阴性对照: 0.2三阳性对照 0.2样品 0.2HBcAb标记试剂 0.5 0.5 0.5HBsAb包被珠 一粒 一粒 一粒HBEAb包被珠 一粒 一粒 一粒HBcAb包被珠 一粒 一粒 一粒45度C3h后蒸溜水洗三次每次3ML取出上层HBcAg包被珠作HBcAb测定。HBsAbHBeAb标记试剂 0.4 0.4 0.445度2h后，室温过夜蒸溜水洗三次每次3ML取出上层作HBeAg测定，底层留作HBsAg测定。4、结果计算，按常规方法本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生物试样（血、尿或其它物质）的多元同步标记分析法，利用抗原、抗体或其他特异性结合物包被在固相材料上，在同一体系里，在固相载体上与被测的抗体，抗原或其他特异性结合物分别进行特异性反应，进行定性定量测定，其特征在于：ａ、多种被测物在同一 体系，同一试样、同时进行反应。ｂ、被测物种类的区分，根据固相的标志或区位，顺序。ｃ、多种被测物标准融汇在同一标样里。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张兴祥，王俐敏，
申请(专利权)人：首钢总公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]