本发明专利技术的一个实施方案提供一种通过获得含有细胞的痰样品来确定痰样品是否含有发育异常的或癌性的细胞的方法。用TCPP标记所述痰样品，以将疑似为发育异常的或癌性的细胞染色。用约475nm+/-30nm的激发波长的光激发所述标记的痰样品，并检测来自被鉴定为巨噬细胞的细胞的、在约560nm+/-30nm的发射。将成像仪聚焦于一个或多个疑似为发育异常的或癌性的细胞的质膜上，并在聚焦于痰样品的细胞的质膜以后，检测所述痰样品的TCPP标记的细胞在约655nm+/-30nm的发射(如果存在的话)。测量传感器的每个像素的光子通量，以获得成像的细胞的值。将测得的值评分，以确定细胞是否是癌性的或发育异常的。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于分析被5，10，15，20四(4-羧基苯基)卟吩(TCPP)标记的样品的系统和方法相关串请的交叉引用本申请要求2009年7月17日提交的标题为“System and Method for AnalyzingSamples Labeled with5,10,15, 20, Tetrakis (4-Carboxyphenyl) Porphine (TCPP)(用于分析被5，10，15，20，四(4-羧基苯基)卟吩(TCPP)标记的样品的系统和方法)”的美国临时专利申请系列号61/226，646d的申请的优先权和权益，其说明书和权利要求书通过引用结合于此。关于联邦资助的研究或开发的声明不适用。_5]通过引用在光盘上呈送的材料的并入 不适用。_7] 版权材料不适用。
技术介绍
研究疾病进展并分析组织样品的异常(包括癌症在内)的病理学家已经确定，一种被称为发育异常(dysplasia)的细胞状态可以潜在地鉴定处于癌前状态的细胞，所述发育异常是指细胞的异常形成或成熟。不被制止，发育异常可经由轻微的、中度的和严重的阶段进展，最后进展为癌症。中等发育异常的病例中大约有七分之一会进展为癌症，已经报道在严重发育异常的病例中多至83%会进展为癌症，取决于涉及的细胞的种类。但是，除去轻微和中度的发育异常可极大地减少癌症的发展。在肺中，发育异常的细胞的除去不但极大地减少了癌细胞的形成，而且在有些情况下，肺组织会恢复至正常的形态。一般而言，越早地检测到癌症，患者存活的预后越好。如果乳腺癌在其仍局限于单一团块时被及早发现，五年存活率大于96%。当其已经扩散至远端区域时，五年存活率小于20%。对于肺癌，当其作为单一团块被发现时，五年存活大于46%。当其已经扩散时，五年存活小于14%。对于子宫颈癌，当在发展至更严重阶段之前发现癌前病变并予以治疗时，可实现存活的额外提高(Boring 和 Squiresl993, CA Cancer J Clin43:7-26 和 Fergusonl990,Hematol Oncol Clin N Am4:1053-1168)。肺癌目前是美国男性和女性的癌症死亡的首要原因(Wingo等人.1995，CAClinical J Clin45.8_30)。在1997年，估计有160，000人死于肺癌，占美国男性总的癌症死亡的12%，占美国女性癌症死亡总人数的2% (Boring&Squiresl993，出处同上)。肺癌也是最致命的癌症种类之一，正如五年存活率只有14%所反映的。与其他人癌症种类相比，肺癌患者的不良预后在很大程度上归因于缺乏有效的早期检测方法。在临床(症状的)呈现时期，所有患者中超过三分之二具有区域性结节累及或远端转移瘤(metastases)，这二者通常是无法治愈的。但是，在具有局限性(O期或I期)肺癌的患者的研究中，五年存活率已经介于40%至70%之间(Boring&Squires, 1993,出处同上；Ferguson, 1990,出处同上)。在历史上，唯一用来在症状出现前检测肺癌的诊断试验是痰细胞学(sputumcytology)和胸部放射摄影术。结果，在过去几十年的研究中，已经广泛地评估了这些试验作为大规模筛选工具的效力。两种试验检测症状发生前的早期癌症，尤其是扁平细胞癌。筛选方法的改进主要围绕通过显微术的技术进展来提高痰细胞学的效用。痰细胞学要求对细胞样品进行目检，在目检期间，用细胞大小、形状、构造以及细胞核与细胞质的大小比率来确定细胞的形态。因为这种细胞形态学的评估要求目检和分类，所以该技术要求临床观测者具有极其大量的专业技术。已经进行的多项研究的结果提示，计算机辅助的高分辨率图像分析能够检测出与若干组织类型有关联的看似正常的细胞核中无法目测的(subvisual)变化(Montag 等人.1991, Anal Quant Cytol Histol 13:159-167 ;Haroske 等人.1988, Arch Geschwulstforsch, 58:159-168 ;Hutchinson等人.1992, Anal Quant CytolEstol4 =330-334)。对细胞样品中的DNA分布进行计算机辅助分析，会提供74%正确的细胞核形态学分类，与标准的细胞学试验相比，该方法无需人工检查材料，也无需存在可目测的异常细胞核。由于对肺肿瘤病理学理解的进展，也已经改善了细胞学样本的形态学评估。许多这样的工作已经集中在“生物标志物”的鉴别。生物标志物是指呼吸道粘膜的大范围进行性表型和遗传异常，其可用于确定支气管上皮完全地转变为恶性肿瘤的潜力。标志物被大致分为:形态学改变、差异表达的蛋白的免疫/组织化学标志物、基因组不稳定性的标志物、表观遗传改变(例如，异常的甲基化)的标志物和基因突变(Hirsh等人.1997，LungCancer 17:163-174)。现在，在从高危群体采集到的发育异常的和赘生性(neoplastic)细胞/组织学组织样品中评价这些标志物的表达水平。在这些样本中，目前作为探测性标志物分析的对象的是痰。对于痰样品用于生物标志物研究的兴趣源自长期持有的观点:由于肺癌最常见地发生于支气管上皮，因而在痰中回收的脱落细胞可以是初期癌症的最早的可能的指示。通过应用复杂的分子遗传学技术(例如，基于PCR的测定)，研究正在证实可在痰中检测出选定的生物标志物(Mao 等人.1994，Cancer Res54:1634-1637 ；Mao 等人.1994，Proc NatlAcad Sci USA91:9871-9875 ；Sidranskyl995, J Natl Cancer Inst87: 1201-1202 ；Tockman等人.1988，J Clin Oncol, 11:1685-1693 ；Tockman 等人.1994，Chest, 106:385s-390s)。商购可得的癌症筛选或检测服务依赖于经过培训的临床医师进行的基于细胞形态学诊断的试验，所述医师观察各个样品并确定异常细胞类型的程度和身份。该过程不仅昂贵和费时，它也引入人为判断，并因此在操作中引入误差。近年来，已经开发出了一种通过使用5，10，15，20-四(羧基苯基)-卟吩(TCPP)来检测肺癌细胞的方法(Cole等人的美国专利号5，162，231)。该方法依赖于癌细胞与非癌细胞相比以更大的量从它们的环境中累积TCPP的倾向。在用200 μ g/ml TCPP温育细胞样品6_24小时后，TCPP进入细胞内，并与赘生性细胞的核周膜及线粒体结合。TCPP在紫外线下会发荧光，因此单独凭借荧光强度即可诊断出癌细胞，而无需参考形态学。该化合物用于鉴定癌前组织状态(例如发育异常的细胞)的应用延伸，允许在高危群体中筛选以鉴别出其组织正向侵入性癌病症进展的那些个体，从而促进在最佳治疗时期发现癌症或发育异常。这种筛选方法的合乎需要的特点是:快速的过程、廉价和需要最低的技术性专门技能。由于上述原因，需要用于检测处于其最早阶段的发育异常细胞的技术和方法。另夕卜，需要可客观地提供高度可靠的诊断结果的技术，并且该技术不依赖于进行诊断的临床医师的主观分析。
技术实现思路
本专利技术的一个实施方案提供一种通过获得含有本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种确定痰样品是否含有发育异常的或癌性的细胞的方法，所述方法包括: 获得含有细胞的疲样品； 用TCPP标记所述痰样品，以将疑似为发育异常的或癌性的细胞染色； 用约475nm+/-30nm的激发波长的光激发所述标记的痰样品； 在所述痰样品内检测来自被鉴定为巨噬细胞的细胞的、在约560nm+/-30nm的发射； 将成像仪聚焦于一个或多个疑似为发育异常的或癌性的细胞的质膜上； 在聚焦于所述痰样品的细胞的质膜上以后，如果存在的话，检测所述痰样品的TCPP标记的细胞在约655nm+/-30nm的发射； 测量传感器的每个像素的光子通量，以获得成像的细胞的值；和 对测得的值评分，以确定细胞是否是癌性的或发育异常的。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述TCPP是中-四(4-羧基苯基)卟吩。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述激发波长是约475nm+/-5nm。4.根据权利要求1所述的方法，其中巨噬细胞的发射是约560nm+/-5nm。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述成像仪是荧光显微镜。6.根据权利要求1所述的方法，其中所述TCPP标记的细胞的发射是约655nm+/-5nm。7.根据权利要求1所述的方法，其中所述传感器是CCD照相机。8.根据权利要求1所述的方法，其中所述评分还包括:将所述测得的值与癌性的、发育异常的和非癌性的细胞的储存的值的数据库进行对比，以基于所述对比的结果来分配评分。9.根据权利要求1所述的方法，其中所述痰样品来自人。10.一种确定细胞的生物样品是否含有发育异常的或癌性的细胞的方法，所述方法包括: 获得疑似含有发育异常的或癌性的细胞的生物样品； 用TCPP标记所述生物样品，以将疑似为发育异常的或癌性的细胞染色； 用约475nm+/-30nm的激发波长的光激发所述样品； 将成像仪聚焦于一个或多个疑似为含有发育异常的或癌性的细胞的质膜上，以获得图像； 在聚焦于疑似含有发育异常的或...
【专利技术属性】
技术研发人员：康斯坦丝·多里安，约翰·卡曾斯，戈登·本内特，
申请(专利权)人：比奥莫达公司，
类型：
国别省市：
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