心梗快速诊断盒制造技术

本发明专利技术公开了一种用于早期快速诊断心肌梗塞的测试片和试剂盒。该测试片包括：ａ）加样区，ｂ）与加样区侧邻的测试区；和ｃ）吸收区。吸收区使得加至加样区的样品层析通过测试区。在所述测试区有包被抗体点样区（固定有包被的第二单克隆抗体），且在测试片上设有金标抗体点样区（包含金标记的抗ＦＡＢＰ的第一单克隆抗体），所述的第一单克隆抗体和第二单克隆抗体可同时结合于ＦＡＢＰ。本发明专利技术的测试片和试剂盒可极其快速和很准确地诊断急性心肌梗塞。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及诊断
，更具体地涉及一种用于诊断急性心肌梗塞(急性心梗)的试剂盒。
技术介绍
心血管类疾病历来是人们健康的大敌。近年来，随着生活水平的提高及工作社会压力的不断加大，心血管疾病的发病率历年增加，心脏病已成为仅次于癌症的第二大死亡原因。在心脏病中尤其是心绞痛和心肌梗塞等缺血性心脏病的增加特别显著，大约占了因心脏病死亡的人数的4成。对于急性心梗患者，抢救生命必须分秒必争。目前最主要的抢救措施是溶栓治疗，而溶栓治疗者的存活率取决于坏死面积的大小，患者越快得到治疗，存活的机率就越高。如果能在发病的4-6小时治疗，患者康复的机会很大，如果过了6小时，往往再抢救也来不及了。早期治疗的成功关键取决于对急性心梗的早期快速诊断。目前临床上除根据临床症状、心电图分析外，还使用CK-MB、肌钙蛋白I和T、肌红蛋白这几个指标。这些手段各有优势，但也各有明显的缺限。部分病人的临床症状不典型，心电图变化不明显，单靠临床症状和心电图不能作出全面肯定的诊断。CK-MB阳性检出率太低；肌红蛋白虽可测出发病早期的病人，但不特异；肌钙蛋白I和T是目前临床上的金标准，以其高准确率见胜，但他们最大的缺点是只能在发病六小时以后测出，六小时之内基本无效，这就往往使病人失去了六小时之内最佳的治疗时间。肌红蛋白(Mb)是另一种小分子(18KDa)蛋白质，其血浆动力学与FABP相似，可在心梗后2-3h出现于血中，也是急性心肌梗塞(AMI)早期检测的有用指标，但由于Mb在骨胳肌中含量较高，因而缺乏特异性，其含量升高不能区分是来源于骨骼肌还是心肌。心脏肌钙蛋白I和T(cTnI和cTnT)和肌酸激酶同工酶-MB(CK-MB)对心肌损伤有较好的特异性，但对AMI早期诊断不佳，因其在AMI发生后6-8h才使血中浓度升高。心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)是一组至少由6种不同相对分子质量组成的蛋白质(14,000～15,000道尔顿)，存在不同脏器中，心脏中的FABP和肝、小肠中的有明显区别。它被认为是重要的脂肪酸载体蛋白，不仅在脂酸酸代谢中起作用，而且在心脏中的能量代谢中也起重要作用。心肌缺氧时，H-FABP释放至细胞外，进入血液循环，使血中FABP含量升高。特别由于其分子量小和心肌中含量很高(0.46mg/g湿重)因而其特异性相对高，在急性心肌梗塞(AMI)早期在血中就可查到其升高。美国专利申请20030100038公开了一种用抗心脏型和脑型脂肪酸结合蛋白(H-FABP，B-FABP)的单克隆抗体和多克隆抗体检测中风的方法。CN02117447公开了一种检测急性心肌梗塞的试剂盒，其中用特异性抗H-FABP的单克隆抗体和多克隆抗体通过ELISA检测H-FABP，但其缺点是Elisa法涉及的步骤多，需几步孵浴及洗脱后再显色，所以一般需两小时才能读到结果，故在临床上特别是对急性心梗这样的急症实用意义不大。总之，急性心梗的早期诊断目前尚缺乏良好的手段，新的心梗早期指标确定和诊断试剂盒的开发很有必要。
技术实现思路
本专利技术的目的就是提供一种早期快速检测急性心肌梗塞的方法和试剂盒。在本专利技术的第一方面，提供了一种检测心肌梗塞的测试片，该测试片含有以下结构加入样品的加样区；与加样区侧邻的测试区；吸收区，吸收区的位置与加样区相对而且吸收区相对测试片的其他区域而言具有吸收能力，从而使得加至加样区的样品层析通过测试区；其中，在所述测试区有包被抗体点样区，所述包被抗体点样区包含固定化的抗FABP的第二单克隆抗体， 在测试片上设有金标抗体点样区，所述的金标抗体点样区位置是沿样品扩散方向的在包被抗体点样区的上游，并且所述的金标抗体点样区包含金标记的抗FABP的第一单克隆抗体，并且所述的第一单克隆抗体和第二单克隆抗体可同时结合于FABP。在另一优选例中，所述的金标抗体点样区位于加样区。在另一优选例中，所述的金标抗体点样区位于加样区和测试区之间，或者位于测试区中。在另一优选例中，在检测区中还设有对照区。在另一优选例中，所述的包被抗体点样区、金标抗体点样区或对照区为线状、点状、长方形或其他任何形状。在另一优选例中，所述检测片还具有一基片，加样区、测试区和吸收区位于基片上，加样区、测试区和吸收区的厚度分别为0.05-5毫米(更佳地0.1-2毫米)，基片厚度为0.05-10毫米(更佳地0.1-2毫米)。在另一优选例中，加样区为玻璃纤维膜并且在玻璃纤维膜上覆盖有滤血膜；检测区为硝酸纤维素膜；吸收区为吸水材料；基片为塑料片、玻璃片、金属片、陶瓷片、纸板(如涂有粘胶的纸板)。在另一优选例中，所述第一单克隆抗体和第二单克隆抗体结合于FABP的不同表位，并且与FABP的相对亲合力为1×10-6-1×10-12M，较佳地，所述第一单克隆抗体和第二单克隆抗体与FABP的相对亲合力为1×10-7-1×10-11M。更佳地，所述第一单克隆抗体和第二单克隆抗体与FABP的相对亲合力为1×10-8-1×10-11M。在另一优选例中，所述包被抗体点样区中抗FABP的第二单克隆抗体的数量为0.01-50ug(更佳地为0.1-20ug，最佳地为0.2-10ug)；金标抗体点样区中抗FABP的第一单克隆抗体的数量为0.02-50ug(更佳地为0.1-20ug，最佳地为0.2-10ug)。在本专利技术的第二方面，提供了所述测试片的用途，它被用于制备检测急性心肌梗塞的试剂盒。在本专利技术的第三方面，提供了一种检测试剂盒，它含有本专利技术所述的测试片和说明书。附图说明图1显示了FABP表达质粒的酶切鉴定图(1％琼脂糖凝胶.)。其中各泳道如下泳道MDNA标准物，GeneRulerTM1kb ladder，MBI Fermentas公司；泳道1pET32a/Fabp，用Nco I/BamH I切割；泳道2pET32a/Fabp，无切割。图2显示了纯化后的FABP融合蛋白。其中各泳道如下泳道13ug纯化后的FABP；泳道26ug/ml纯化后的FABP；泳道39ug/ml纯化后的FABP；泳道412ug纯化后的FABP；泳道M蛋白质标准物。图3显示了Protein A纯化的抗FABP的单克隆抗体HF2和HF10。其中各泳道如下泳道1-3单克隆抗体HF2；泳道4-6单克隆抗体HF10；泳道M蛋白质标准物。图4显示了夹心ELISA测试中H-FABP的浓度曲线。其中，HF2为包被抗体，HF10为标记抗体。H-FABP标准液用阴性血清配制而成。图5显示了本专利技术一种测试片的结构，其中箭头方向为样品流动方向。图6显示了FABP金标快速诊断试剂盒对不同浓度FABP蛋白的检测结果。图片下方为检测样本中FABP的含量(ng/ml)。C处为质控线，T处为检测线。当血清中FABP浓度为2ng/ml(接近正常人平均值)时，结果呈阴性；6.5ng/ml(即正常人高限)时，在T处出现微弱条带；随着FABP浓度(10和20ng/ml)升高，T处红色加深。具体实施例方式本专利技术人经过多年广泛而深入的研究，针对临床上对急性心梗早期诊断的需求，以脂肪酸结合蛋白(FABP)为靶点，利用两个识别脂肪酸结合蛋白不同表位(抗原决定簇)的、高特异性FABP单克隆抗体，用双抗体夹心法为原理制备了金标快速诊断测试片和试剂盒。在此基础上完成了本专利技术。脂肪酸结合蛋白(FABP本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测心肌梗塞的测试片，其特征在于，该测试片含有以下结构：加入样品的加样区；与加样区侧邻的测试区；吸收区，吸收区的位置与加样区相对而且吸收区相对测试片的其他区域而言具有吸收能力，从而使得加至加样区的样品层析通过测试 区；其中，在所述测试区有包被抗体点样区，所述包被抗体点样区包含固定化的抗ＦＡＢＰ的第二单克隆抗体，在测试片上设有金标抗体点样区，所述的金标抗体点样区位置是沿样品扩散方向的在包被抗体点样区的上游，并且所述的金标抗体点样区包含金 标记的抗ＦＡＢＰ的第一单克隆抗体，并且所述的第一单克隆抗体和第二单克隆抗体可同时结合于ＦＡＢＰ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈克勤，包维丽，朱亚，郑建红，
申请(专利权)人：上海单抗制药技术有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]