一种高信息量免疫检测方法及其专用检测板技术

本发明专利技术公开了一种新型的抗体或抗原的免疫检测方法及其专用检测板。这是一种简捷灵敏、快速及时、可一次同时检测多种不同的抗原或抗体的检测方法。技术方案的特征在于，将两种或两种以上的不同特异性抗体和／或抗原，按照一定顺序和孔的排列格式，加入并固相化在同一块微孔板上，获得免疫微孔板，然后将待检患者的标本加入该微孔板中进行反应、分析。本方法通过一次免疫微孔板检测，可获得被检标本的多种信息。解决了一种疾病多致病因素时，需做多次检测诊断，延误治疗的问题。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种新型的与疾病检测，医学诊断有关的，也可以是与各种生物学、动植物学、农牧业有关的抗原或抗体的检测方法，特别是生物医学中抗原或抗体的免疫检测方法及其专用检测板。在免疫学诊断中，一个实验系统，如酶联免疫吸附试验，放射免疫实验和免疫荧光检测技术等，通常一次只能检测一种抗原或抗体(抗体，也称免疫球蛋白)。而一种疾病或临床症状可由多种致病因素引起，如病毒性肝炎，但具有许多相同的临床表现。一种疾病亦可表现出不同的临床症状，即不同的疾病或临床症状也可由同一种致病因素引起。因此，即使一种疾病有时也必须同时用不同的抗原抗体检测系统分别检测。所以现有检测技术费时、费力、操作繁琐、成本高。然而，检测到一种抗原或抗体时，只能证明该抗原或抗体与该疾病有关，但不能排除其它有关致病因素的存在。特别是在获得阴性检测结果时，医生因无法判断该病为何种致病因素所致，而无法确定治疗方案。为了明确诊断，还必须做进一步的检查，直到获得的检测结果可以确诊，以致因诊断不及时而延误治疗。病人则因得不到及时、正确的治疗，延误或坐失治疗时机，而遗恨终生，甚至丧失生命。对于非常见病，由于发病率低，检测标本少，故医院为降低成本，常需要将标本积累到一定的数量后集中进行检测。而中、小级医院甚至常见病亦是如此。因而，现有检测技术成本高，检测结果报告不及时。有些偏远地区的部分中小型医院则根本放弃开展此类检测项目。本专利技术的目的是要提供一种简便灵敏、快速及时、可一次同时检测多种抗原和/或抗体的检测方法及其专用检测板。为了达到本专利技术的目的所采取的技术方案包括包被、标记、加待检样品、流洗或浸洗、加入标记物、流洗或浸洗、加入底物显示结果、分析等步骤，其特征在于，其包被步骤是将两种或两种以上不同特异性的抗体和/或抗原分别包被在同一块微孔板的不同微孔中或其他固相基质上，以便同时检测抗原和抗体。本专利技术的特征还在于包被是采用生物大分子固相化处理技术，将抗原、抗体分别固相化在由玻璃，或硅，或金属，或塑料等高分子有机化合物等固相基质材料制成的微孔板上来完成的(生物大分子固相化处理技术在化学出版社1998年出版的蒋中华著的《生物大分子固定化技术及应用》中有详细介绍)，其具体操作步骤是1)对微孔板进行改善其吸附性能的常规预处理2)加包被物将两种或两种以上不同特异性的抗体和/或抗原分别溶解在缓冲液中，用人工或全自动微阵列点样制备系统，分别加到不同的微孔中，1个孔只包被1种抗原或抗体，在同一块微孔板上可包被有抗原也可同时包被有抗体，包被相同抗原或抗体的孔可有多个(称它们为重复孔，或复孔)，其排列可以是连续的、也可以不连续；3)缓冲液流洗或浸洗，以去除未固相化的抗原或抗体；4)加入封闭液，常温孵育20-360分钟，以封闭非特异性结合位点；若采用现有的96孔或384孔等塑料微孔板实施，可将抗原和抗体分别溶解在pH8.5以上的碳酸盐缓冲液中直接用于包被。本专利技术的特征还在于在同一检测系统中，同时进行对应的抗原和抗体的共检测时，可采用下述任一种方案以避免检测误差1)将抗原和抗体包被在高密度微孔板上(见附图说明图1、2、3)，用酶、荧光素和生物素等直接标记待检物的方法。2)利用一个抗原分子有多个相同和不同的特异性抗原决定簇的特性，在标记物中选取抗原分子的不同肽段与识别同一抗原分子的不同抗原决定簇或不同肽段的抗体配对使用。3)用简易分区微孔板(可无盖，见图4)，分别将抗原包被在抗原包被区，将抗体包被在抗体包被区；在加标记物时，根据分区向抗原包被区(Ag区)加入标记的抗抗体，向抗体包被区(Ab区)加入特异性抗原的抗体标记物；但操作中封闭、浸洗、加入待检测标本、加入底物和终止液等操作步骤两个包被区可共同进行。4)用专用分区微孔板(见图3、图5、图6)，分别将抗原包被在抗原包被区，将抗体包被在抗体包被区，每一包被区均有完整独立的微流路，按分区分别加待检样品、流洗、加标记物、底物和终止液等；在加入标记物时，向抗原包被区(Ag区)加入标记的抗抗体，向抗体包被区(Ab区)加入特异性抗原的抗体标记物。5)使用专用检测板(见图7、图8、图9、图10、图11、图12、图13)，将抗原和抗体分区包被，通过专用检测板上的多通路分流阀，在抗原包被区(Ag区)和抗体包被区(Ab区)之间形成即可连通又可相互独立流动的可调变的微流路，在加入标记物时，使加入的抗抗体标记物只能沿微流路进入抗原包被区；特异性抗原的抗体标记物只能进入抗体包被区。6)方案2可分别与方案3或方案4、方案5合并使用。本专利技术的特征还在于在使用带微槽的微孔检测板时，可采用下述方法进行定性、定量分析因在同一块微孔板上，同一抗原或抗体的包被孔的数量可有两个或两个以上，当待检标本中的对应物在带槽微孔板上，逐孔流过各重复包被的微孔时，被不断结合，并被不断地从标本液中去除，因此，各复孔的结合量，将按照各重复孔排列的前后顺序，逐渐减少。根据各孔反应的有无，即可进行定性分析；在进行定量分析时，增加重复包被的微孔数量，根据前后各重复孔生成物颜色的深浅、荧光强度、放射强度、生物或化学发光强弱的变化与有无，借助计算机分析可绘出待检物浓度-反应孔数量及强弱变化曲线，对照标本体积，即可获得定量分析结果。本专利技术的特征还在于所用微孔板为中国专利申请号为00209973.X所述的微孔板，即高密度微孔板，每平方厘米有4孔或4孔以上，孔深0-2毫米，孔间有或无微槽相连。微孔板可有盖或无盖，在微孔板体1或板盖2上分别设有与微槽5相通的进液孔6、出液孔7。本专利技术所述的专用检测板，包括板体1、微孔板盖2、微孔4、与微孔4相连的微槽5，其特征在于，在微孔板盖2上分别设有与微槽5相通的进液孔6、出液孔7和多通道分流阀8，该多通道分流阀8的阀孔17被阀芯18沿周向分为两个区A区和B区，阀芯18中心有一个下部带有管道15的样品孔14，阀孔17的侧壁设有与抗原包被区Ag区相通的管道11、与抗体包被区Ab区相通的管道12和16、与出液孔7相通的管道13。上面两款所述的微孔板和专用检测板，其特征在于，在板体1与微孔板盖2之间可加有密封垫3。本专利技术的专用微孔板的进液孔6、出液孔7和样品孔14的开口也可以是在板体1上。本方法具有以下优点1信息量大。现有的ELISA法通常是在同一块微孔板(如96或384孔板)的所有微孔中均只加入同一种特异性的抗原或抗体，故一块板一次只能检测一种抗原或抗体。本专利技术与酶联免疫吸附试验(简称ELISA)法不同的是，待检标本通过一次免疫微孔检测，可获得免疫微孔板中的所有抗原(或抗体)是否存在的结果。解决了一种疾病多致病因素时，需做多次或多种检测诊断，延误治疗的问题；2．可同时检测对应抗原抗体。在同一块微孔板中，可同时进行对应的抗原和抗体(如检测乙肝表面抗原和抗乙肝表抗原的抗体)的共检测。本专利技术通过六种不同的方案，解决了上述酶联免疫吸附实验和免疫斑点杂交法无法同时检测对应抗原抗体的问题3．快速及时，成本低。一个病人只需要一块免疫微孔阵列板，可随到随检，检测报告及时。因此，解决了为节约试剂，降低成本需等待积累一定数量的标本再做检测，以至检测结果报告时间延后的问题；4．灵敏度高。本技术方法采用专用的微孔板或检测板作固相基质，每个微孔，相当于固化了抗原或抗体的亲和层析基质，而免本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高信息量免疫检测方法，包括包被、标记、加待检样品、流洗或浸洗、加入标记物、流洗或浸洗、加入底物、显示结果、分析等步骤，其特征在于，其包被步骤是将两种或两种以上不同特异性的抗体和／或抗原分别包被在同一块微孔板的不同微孔中或其他固相基质上，以便同时检测抗原和抗体。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：赵翀，
申请(专利权)人：赵翀，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]