降低血浆胆固醇水平的方法和组合物技术

本发明专利技术公开了测定一种化合物是否可以以降低血浆胆固醇的方式同脂蛋白例如ＬＤＬ或ＶＬＤＬ结合的方法，该方法包括评估化合物与脂蛋白例如ＬＤＬ或ＶＬＤＬ形成复合物的能力，然后测定新形成的复合物是否引起导致对ＬＤＬ受体的结合亲和性增加的ａｐｏＢ－１００的结构改变。本发明专利技术还公开了在宿主，包括人中降低胆固醇的方法，该方法包括，施用有效量的能够以改变脂蛋白三维结构并增加ａｐｏＢ－１００蛋白对ＬＤＬ受体，包括在肝细胞表面上的受体的结合亲和性的方式与携带胆固醇的脂蛋白（例如ＬＤＬ或ＶＬＤＬ）结合的化合物。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及通过降低循环的低密度脂蛋白(LDL)和极低密度脂蛋白(VLDL)水平来降低血浆胆固醇水平的方法和组合物。现在普遍认为动脉粥样硬化可能是从动脉内皮的局部损伤开始的，随后是动脉平滑肌细胞从中层增殖到内膜层并伴有脂质的沉积和泡沫细胞在损伤处的聚集。随着动脉粥样硬化斑的生长，它逐渐闭合越来越多的受损血管并可以最终导致局部缺血或梗塞。由于循环脂类如胆固醇的沉积在动脉粥样硬化的开始和发展中起主要作用，因此，确定降低循环胆固醇水平的方法和组合物是非常重要的。循环脂蛋白作为载体在血浆的含水环境中运送不溶性的脂类如胆固醇酯、甘油三酯和极性更强的磷脂以及未酯化的胆固醇(Bradely，W.A.和Gotto，A.M.《美国生理学学会》(American Physiological Society)，Bethesda，MD，(1978)117-137页)。这些脂类通过与称为载脂蛋白的蛋白质发生物理缔合而溶解，该脂类-蛋白质配合物称为脂蛋白(Dolphin，P.J.《加拿大生物化学细胞生物学杂志》(Can.J.Biochem.Cell.Biol.)(1985)63，850-869)。已经从人类血浆中分离出了5种不同类型的脂蛋白乳糜微粒、极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)和LP(a)(Alaupovic，P.《电泳手册》(Handbook ofElectrophoresis)(1980)Vol.1，27-46页，Havel，R.J.，Eder，H.A.和Bragdon，J.H.《临床研究杂志》(J.Clin.Invest.)(1955)34，1343-1353)。LDL是人类血浆中胆固醇的主要载体。食物中的甘油三酯和胆固醇由肠细胞聚集在乳糜微粒颗粒内，该颗粒通过淋巴系统进入循环(Brown，M.S.和Goldstein，J.L Sci.American(1984)251，58-66)。乳糜微粒向外周细胞提供脂肪酸并向肝脏提供胆固醇。然后，肝脏将胆固醇与甘油三酯一起重新包装在另一种称为VLDL的脂蛋白中。VLDL的功能与乳糜微粒类似，即，向肌肉和脂肪组织提供游离的脂肪酸并向外周细胞提供胆固醇(Brown，M.S.和Goldstein，J.L Sci.American(1984)251，58-66)。在循环系统中，VLDL颗粒中的甘油三酯通过称为脂蛋白脂酶(LPL)的酶水解并通过肝脂肪酶进一步加工，最后将其转变成LDL(Dolphin，P.J.《加拿大生物化学细胞生物学杂志》(Can.J.Biochem.Cell.Biol.)(1985)63，850-869)。因此，肝脏产生VLDL，LDL的前体。由于VLDL是LDL的前体，VLDL生产的减少将会转变成LDL水平的降低。高浓度的循环LDL与冠心病的发生呈正相关。虽然LDL胆固醇无疑是一个独立的阳性危险因素，但HDL胆固醇却被认为是阴性的危险因素(D.L.Tribble，R.M.Krauss.《内科医学的进展》(Advances inInternal Medicine)(1993)381-29)。脱辅蛋白质B脱辅蛋白质B-100(apoB)是LDL以及LDL受体的配体的主要脱辅蛋白质。ApoB-100是一种分子量(MW)为549,000的大蛋白质。该蛋白质是高度疏水性的，在没有脂类的情况下是不溶性的。已用针对蛋白质上的特定区域(抗原区域或抗原表位)产生的单克隆抗体对apoB-100的结构进行了研究。这些单克隆抗体被用来对apoB-100上与LDL受体结合的位点“作图”。用单克隆抗体对VLDL和LDL中apoB上的各种抗原表位作图是一种了解该蛋白质的各部分在脂蛋白摄取中的作用的有效方法。apoB上的抗原表位对单克隆抗体的免疫反应性的改变与培养物中细胞对LDL的摄取相关(N.F.Galeano等，《生物化学杂志》(J.Biol.Chem.)269卷，no.1，511-519页，1994)。用单克隆抗体同apoB的已知区域的抗原表位结合来确定对LDL受体的结合区域(Milne，R.等，《生物化学杂志》(J.Biol.Chem.)264卷，no.33，1988，10754-60页；Milne，R.等，《动脉硬化》(Arteriosclerosis)，3卷，no.1，1983，2330页)。对封闭单克隆抗体的受体的抗原表位估计可用来预测apoB的LDL受体结合区域的范围(Pease，R.等，《生物化学杂志》(J.Biol.Chem.)266卷，no.1，1990，553-68页)。载脂蛋白E载脂蛋白E(apoE)与apoB一样，可与LDL受体结合并能够在整个系统中运输胆固醇。ApoE通过其对LDL受体的高结合亲和性调节胆固醇和脂类的运输和摄取。LDL受体以彼此相当的亲和性识别apoB和apoE(Wilson，C.等，《科学》(Science)252卷，1817-1822页，1991)。ApoE蛋白的受体结合区域已通过使用单克隆抗体的抑制研究进行了鉴定(Weisgraber，K.H.等，《生物化学杂志》(J.Biol.Chem.)258卷，No.20，10月25日，1983，12348-12354页)。此外，已通过x-射线晶体照相术对apoE的LDL受体结合区域的三维结构进行了测定(Wilson，C.等，《科学》(Science)252卷，1817-1822页，1991)。从循环中清除LDLLDL通过存在于外周和肝细胞的细胞表面上的称为LDL受体的高亲和性受体从血浆中除去(Goldstein，J.L.和Brown，M.S.《生物化学年评》(Ann.Rev.Biochem.)(1977)46，897-930)。该受体调节的途径说明了细胞对LDL的摄取和降解，在该过程中，胆固醇被传送到这些细胞中。因此，通过受体调节的过程摄取LDL使得细胞可以从脂蛋白获得胆固醇，然后在各组织合成膜以及在肾上腺、卵巢和睾丸合成甾体激素时提供胆固醇。通过LDL受体途径摄取是从血浆清除LDL的主要机制。该脂蛋白的摄取过程是一个受载脂蛋白组成和脂蛋白的脂类含量调控的高度协调并且和谐的过程。LDL上的载脂蛋白(称为apoB-100)调节LDL与LDL受体的相互作用。ApoB上的特定氨基酸序列形成了apoB与LDL受体细胞表面的结合位点(Knott等，《自然》(Nature)(1986)323734-738)。除LDL外，VLDL也可以与LDL受体结合，因为它含有apoB-100和apoE(另一种载脂蛋白)，所述apoE含有可被LDL-受体识别的氨基酸序列。已知就大小和组成而言VLDL是由不同成分形成的，VLDL的各种亚型在其与LDL受体相互作用的能力上有所不同。例如，体积大的VLDL通常不与LDL受体结合，尽管它们含有apoB-100和apoE。仅有较小的VLDL可与受体结合。据推测大VLDL中的apoB-100和apoE均不具有可被受体识别的适宜三维结构。同样，某些类型的LDL，例如糖尿病患者的血浆中的LDL(糖基化的LDL)和氧化的LDL，因为apoB-100的结构不正确也不能与LDL受体结合(Wang X，Bucala R，Milne R.，Pro本文档来自技高网...

【技术保护点】
评估一种化合物是否是ＬＤＬ清除促进药的方法，该方法包括将药物与含胆固醇的脂蛋白在体内或体外混合；分离复合物，然后测定化合物与复合物的结合是否引起增强蛋白对ＬＤＬ受体的结合亲和性的脂蛋白中ａｐｏＢ－１００的三维构象的改变；其中的ＬＤＬ清除促进药不是丙丁酚或丙丁酚的单酯或二酯，不是ＷＯ９８／０９７７３中描述的化合物，并且不是美国专利号５，１５５，２５０或５，６０８，０９５中描述的硅烷基化合物。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：拉塞尔M梅德福，乌黛萨克塞纳，
申请(专利权)人：埃瑟若詹尼克斯公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]