头部创伤诱导的胞质钙结合蛋白制造技术

本文公开了ＡＮＩＣ－ＢＰ多肽和多聚核苷酸以及通过重组技术产生这样的多肽的方法，也公开了在诊断试验中利用ＡＮＩＣ－ＢＰ多肽和多聚核苷酸的方法。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及人类急性神经元的诱导的钙结合蛋白和鉴定及编码该蛋白质的多聚核苷酸(ANIC-BP)。本专利技术还提供了表达载体，宿主细胞和抗体。此外，本专利技术提供了用于产生该蛋白质的方法及治疗和预防与该蛋白质的表达有关的疾病。本专利技术还涉及抑制或者激活这种多聚核苷酸和多肽的作用。
技术介绍
中风和急性头部创伤，多发性硬化以及脊髓伤害是迄今为止没有任何现成疗法的疾病。中风是第三大死亡原因，对患者以及社会负担巨大。如果发生占中风大部分的局部中风的话，脑部血管堵塞是初发事件。头创伤事故是西方世界年青人的主要疾病，很少数量的病人受由机械撞击和动脉破裂引起的出血性中风的影响，一个共有的特征是批准的药物很少可供使用。当前可供使用的治疗方法是建立在病理生理概念之上的，该概念来源于病灶性大脑局部缺血的实验工作。这些方法包括动脉再造管术，对炎症过程的抑制和神经保护的药理学策略。用动脉再灌注策略的进一步研究正在进行之中。正在完成用依赖于多形核白细胞的内皮粘连受体拮抗药的早期临床研究，但尚需提出策略。然而，只解决局部缺血级联过程中单一步骤的任何策略可能仅仅产生一个不大的疗效。因此，未来的疗法最适当地将基于结合疗法。低剂量的乙酰水杨酸和释放改进的双嘧达氨醇的结合在中风的次级预防中已表明具有累加效应。(Tijssen等.国际临床学业者杂志增刊。91，14-16，1997)。目前提出的供临床评价的另一组合是tPA加上一种有效的神经保护因子。然而，这些研究的结果还远远不是非常有效的。因此，急需了解更多的病理生理机制以便提供药物目标，该目标可被用来研制新的药物和建立更通用的治疗患有急性神经损伤和疾病如多发性硬化的患者的方法。本专利技术确实是集中于Ca2+钙结合蛋白质，因为对Ca2+结合蛋白质在神经保护中的作用有大量的证据。虽然钙结合蛋白质(CaBPs)的精确功能还不肯定，但已提出了钙结合蛋白的作用是可缓冲细胞间Ca2+的水平(浓度)。由于钙离子的过度负荷激活了导致蛋白水解作用和线粒体功能紊乱的生化过程，钙结合蛋白的这一缓冲能力对兴奋中毒的神经元损伤可能有保护效果(Heizmann等TINS，15，259-64，1992)。存在各种各样的证据，支持钙结合蛋白的这一假设的、在钙水平的调节中和神经保护中的作用。在中枢神经系统中表达的(小白蛋白(pavalbumin)，钙结合蛋白-D28K，和钙视网膜蛋白)主要Ca2+结合蛋白(CaBPs)在各种神经元群体中具有十分不寻常的和选择性的表达模式。在确实表达CaBPs的神经元中，大部分只表达一种类型，虽然少量的神经元表达不止一种的主要钙结合蛋白。有不断增加的证据表明，在特殊的细胞类型中，存在或者缺乏钙结合蛋白(CaBPs)是构成被称为选择易受伤性这一现象的基础。选择易受伤性是一种特殊类型的神经元对中枢神经系统(CNS)损伤反应而死亡的性质。例如，CA1海马神经元是有选择地易受球面局部缺血的损伤，小脑浦肯野氏(purkinje)细胞有选择地易受头部创伤，中风，胎儿酒精暴露的损伤，同时在黑质中的神经元在帕金森疾病中是有选择地易受损伤的。已经努力地把选择性的神经元易受伤性与各种CaBPs表达模式联系起来，有些作者报告在选择性地易受损伤的神经元的群体中发现了高浓度的CaBPs，而其它则报告对损伤选择性抵抗的神经元群体中有较高浓度的CaBP。例如，据报导，高水平表达的小白蛋白(parvalbumin)的神经元选择性地易受AMPA-诱导的毒性的损伤(Weiss等.神经学，40，1288-1292，1990)，而表达高水平的钙结合蛋白-D28K的培养的海马神经元据报导对谷氨酸诱导的毒性有选择性的抵抗性(Baimbridge等.TINS，15，303-8，1992)。类似地，表达高水平的钙视网膜蛋白的海马神经元能抵抗有毒性剂量的兴奋毒素谷氨酸，NMDA，红藻酸和使君子氨酸((Winsky等，在《新的钙结合蛋白质》中，277-300，1991)。CaBPs也被发现在各种CNS疾病状态下的表达被改变，但是，关于CaBP的表达是否与选择性的易受伤性或对伤害的选择性的抵抗性有关，结果也不一致。表达钙结合蛋白-D28K的神经元据报导在阿尔茨海默(Alzheimers)病中(lacopino等，PNAS，87，4078-82，1990，Hof等，实验神经学，111，293-301，1991)和亨廷顿舞蹈(Huntington)病中(Kiyama等.大脑研究，526，303-07，1990)是有选择地易受损伤的，虽然在帕金森病中，在黑质中的表达钙结合蛋白-D28K的神经元不是有选择地易受损伤的(Yamada等.大脑研究，526，303-07，1990)。在球面局部缺血的沙土鼠模型中，一定的海马细胞类型中小白蛋白的存在表明了与存活呈正相关(Tortosa等.神经科学.1，33-43，1993)，虽然其它的研究提出表达海马神经元的小白蛋白在阿尔茨海默(Alzheimer)病中是有选择地易受损伤的(Brady等.神经科学，80，1113-25，1997)。钙结合蛋白基因失效的小鼠表现出功能缺陷(例如共济失调)，表明正常表达这一CaBP的神经元中的严重功能失调(例如，小脑浦肯野细胞)，尽管这些神经元在形态上似乎是正常的。这一发现表明CaBPs对细胞活动模式是至关重要的(Airaksinen等，PNAS，94，1488-93，1997)。此外，具有钙结合蛋白-D28k的运动神经元的逆转病毒侵染表明对由肌萎缩的侧硬化病人的IgG诱导的毒性具有神经保护作用(Ho等，PNAS，93，6796-801)，用钙结合蛋白-D28k进行的转染表明可保护PC12细胞免于因血清提取，谷氨酸暴露和神经毒素MPP+而产生的毒性作用(McMahon等，分子大脑研究，526，303-07，1998)。总之，关于钙结合蛋白质在神经退化中的作用有大量的信息。可以肯定的是某些CaBPs提供保护，其它的CaBPs则造成选择性的易受伤性，然而，尚不清楚的是，在不同神经元群体中，一定的CaBPs的表达是否导致一种给定的CaBP的不同功能反应。另一种观察后的意见认为不同类型的CNS伤害的严重度可以影响CaBPs的明显的神经保护功效，即在包括温和损伤的损伤模型中，CaBP可以赋予抵抗力，但在更严重的CNS损伤中，不能缓冲Ca2+的增加。因此，有相当的证据表明，在CNS损伤过程中，CaBPs既可赋予抵抗力，也可赋予易受伤性，但这种复杂情况的机制和反应的调节还需要研究。最近从小鼠来源的cDNA文库中分离了包含功能尚未鉴定的基因(MO25)的一个基因家族(Miyamoto等.分子繁殖发育，34，1-7，1993)。该文库是由从一种早期胚胎小鼠中分离的RNA进行构建的。对MO25预测的氨基酸序列揭示MO25基因与钙结合蛋白具有结构上的同源性，缺乏跨膜结构域，表明该蛋白可能参与了未受精卵的胞液发育。然而，该蛋白质的真正的功能仍然是未知的。另一种类似于Mo25的基因已经从果蝇的cDNA文库中克隆出来(Nozaki等，DNA细胞生物学，15，505-09，1996)。其推导的Mo25 cDNA的氨基酸序列与鼠MO25的同系物有69.3％的同源性。酿酒酵母中的一种同源染色体在钙调磷酸酶B亚本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种选自下组的分离的多肽：（ａ）一种由包含ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１序列的多聚核苷酸编码的分离多肽；（ｂ）一种包含与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２的多肽序列具有至少９５％的等同性的多肽序列的分离多肽；（ｃ）一种与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２的多肽 序列具有至少９５％的等同性的分离多肽；（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２的多肽序列，和（ｅ）（ａ）至（ｄ）中这些多肽的片段或变异体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：I丹达阿斯，V费施尔，C赛费尔德，L温枚尔啻尼尔，
申请(专利权)人：默克专利股份有限公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]