其上固定了生理活性物质的支持物及用于分析样品成分的方法和试剂盒技术

本发明专利技术目的是提供一种表现出高固定效率的支持物，在它上面可以高密度地固定生理活性物质；一种利用该固定载体有效地分析生物成分的方法；以及一种用于该分析的试剂盒。本发明专利技术公开了固定生理活性物质的支持物，它包含在其表面形成的携带生理活性物质的碳或金属或半金属碳化合物层；制备用以固定生理活性物质的支持物的方法，其特征在于使具有带官能团的碳或金属或半金属碳化合物层的支持物同生理活性物质进行接触；利用该支持物分析样品中成分的方法；以及包含上面的支持物的用于分析样品中成分的试剂盒。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术提供了一种其上固定了生理活性物质的支持物、一种制备该支持物的方法、一种固定于支持物的生理活性物质、一种利用该支持物分析样品成分的方法、以及一种带有该支持物的用于分析样品成分的试剂盒。本文所称的生理活性物质是指对生物体具有特定作用的物质，或者生物蛋白或肽等。
技术介绍
大多数生理活性物质例如酶和抗体对特定物质具有高度的选择性，并且基于其这种特性，它们被用来精确地检测特定的生物成分。特别地，在免疫检测中常用免疫分析，并且它包含将一种与目的物质反应的抗体固定在合适的固相(支持物)上，然后使其接触标本并与可以特异性结合于目的物质的标记抗体进行反应。然而，将生理活性物质例如蛋白或糖牢固并有效地固定于支持物上极为困难，因为蛋白和糖具有不同的表面电荷。目前为止，Biotechniques，27，778-788(1999)；Biosensors &Bioelectronics，Vol.13，Nos.3-4，pp.407-415，1998；Clin.Chem.，449，2036-2043(1998)；Clin.Chem，Acta，(1990)194(1)；Anal.Chem.，1999，71，3845-3852；J.Immunol.Methods，136(1991)，239-246；Anal.Biochem.，278，123-131(2000)；J.Immunol.Methods，99(1987)107-112；Anal.Biochem.，250，203-211(1997)；Science，Vol.289，1760-1763等报道了将生理活性物质例如蛋白固定于支持物例如玻璃载片或聚丙烯酰胺凝胶上的方法、以及利用这种固定的支持物使样品中的抗原与支持物上面的抗体结合，从而高通量地检测抗原的方法。然而，按照这些报道中的方法，不可能高密度地在支持物上固定抗体，并且该方法的问题在于，虽然需要大量的抗体，但是其固定效率低。为鉴定过敏反应的诱因(过敏原)，实践当中使用的是检测IgE的方法。其利用了在过敏反应表达过程中与过敏反应的诱因过敏原特异性结合的IgE的产生。具体的，将某病例的血清IgE同过敏原反应，并用标记的抗-IgE抗体检测之。具体已知的是一种包括将样品中的IgE同固定于一个玻璃载片上的抗人IgE抗体反应，然后使其与酶标抗人IgE抗体反应，以产生抗人IgE抗体-IgE-酶标抗人IgE抗体复合体，并且检测该复合体中的标记的方法(Methods in Enzymology，Vol.184，501-507，1990)；一种包括结合过敏原到滤纸上、与血清样品反应、并由Cypridina来源的萤光素酶标记的抗IgE抗体检测它的方法(JP-A 5-113443)；一种利用亲合柱的方法(JP-T 5-508220-这里所用的术语“JP-T”是指PCT专利申请的公开了的日文译文)；一种用双官能试剂固定抗IgE抗体于固相支持物例如聚苯乙烯板或玻璃纤维过滤器上的方法(JP-T8-509064)等。然而，即便是这些报道中的方法，也仍然不可能高密度地在支持物上固定各种不同的过敏原或抗IgE抗体，而且该方法的问题仍在于，虽然需要大量的抗体，但是其固定效率低。本专利技术是考虑了上述情形后作出的，并且其目的是提供一种固定了生理活性物质的支持物，上面固定的生理活性物质的密度高而且固定效率高，一种制备该固定支持物的方法，一种利用该固定载体有效地分析样品成分的方法，以及一种分析用试剂盒。专利技术公开我们(本专利技术人)进行了不懈的研究以实现上面的目的，并且作为结果，发现当表面形成有碳或金属或半金属碳化合物层的支持物被用来在其上固定生理活性物质时，则有可能以高密度配位官能团到支持物上，因而生理活性物质的官能团可通过与该支持物上的官能团结合而被固定于该支持物上，并且，作为结果，固定效率得以提高，并且利用该固定了生理活性物质的支持物分析样品中成分的效率也因此得以提升。在这一发现的基础上，我们完成了本专利技术。具体地，权利要求1的专利技术提供了一种固定了生理活性物质的支持物，其表面形成有碳或金属或半金属碳化合物层，并且该层上固定有生理活性物质。为了将生理活性物质固定于支持物表面，可使用任何本身已知的固定方法，例如物理吸附固定或化学结合固定。优选地，该物质通过碳或金属或半金属碳化合物层的官能团固定于支持物表面，如同权利要求2所述。更优选的，它是通过生理活性物质的官能团与碳或金属或半金属碳化合物层的官能团结合而固定于支持物表面，如同权利要求3所述。在这种情况下，生理活性物质的官能团和/或碳或金属或半金属碳化合物层的官能团优选是选自由羟基、羧基、磺基(sulfo group)、氰基、硝基、硫醇基、氨基、氨基苯基以及环氧基组成的组中的一个或多个，如同权利要求4所述。更优选的，生理活性物质是如权利要求5中的对生物体具有特定作用的物质，或者是生物蛋白或肽，更加优选的是如权利要求6中的抗原和/或抗体。尤其，生理活性物质特别优选的是选自由肿瘤标志、激素、激素干扰性化学制品、微生物来源的蛋白或肽或糖链抗原、受体、配体、过敏原、免疫球蛋白、凝集素、糖链、脂类、脂多糖以及这些物质的抗体组成的组中的一个或多个，如同权利要求7所述。具体地，生理活性物质优选是选自由过敏原、免疫球蛋白以及这些物质的抗体组成的组中的一个或多个，如同权利要求8所述。并且优选的是，碳或金属或半金属碳化合物层包含结晶碳和/或非结晶碳(非晶性 素)，如同权利要求9和10所述。更具体的，结晶碳优选是如权利要求11中的金刚石或金刚石样的碳，而非结晶碳优选是如权利要求12中的石墨或无定形炭(非晶性カ一ボン)。其中，更优选的是结晶碳，而且更加优选的是金刚石。权利要求13的专利技术提供了一种制备固定了生理活性物质的支持物的方法，其包含使生理活性物质同其表面形成有带官能团的碳或金属或半金属碳化合物层的支持物接触。更具体的，将官能团引入其上形成有碳或金属或半金属碳化合物层的支持物中，然后同生理活性物质接触，如同权利要求14所述。在这种情况下，待引入支持物表面的官能团是选自由羟基、羧基、磺基、氰基、硝基、硫醇基、氨基、氨基苯基以及环氧基组成的组中的一个或多个，如同权利要求15所述。权利要求16的专利技术提供了一种固定于其上形成有碳或金属或半金属碳化合物层的支持物上的生理活性物质。权利要求17的专利技术提供了一种分析样品成分的方法，其中利用的是权利要求1至12任何一项的固定了生理活性物质的支持物。更具体的，固定了生理活性物质的支持物同含有待分析成分的样品进行接触，并对所生成的生理活性物质与该成分的复合体予以分析，如同权利要求17所述。优选的，固定于支持物表面的生理活性物质是任何的抗原或抗体，而所述成分是该生理活性物质的抗原或抗体，如同权利要求19所述；更优选的，抗原或抗体是选自由肿瘤标志、激素、激素干扰化学制品、微生物来源的蛋白或肽或糖链抗原、受体、配体、过敏原、免疫球蛋白、凝集素、糖链、脂类、脂多糖以及这些物质的抗体组成的组中的一个或多个，如同权利要求20所述。尤其，抗原或抗体更优选是选自由过敏原、免疫球蛋白、凝集素以及这些物质的抗体组成的组中的一个或多个，如同权利要求21所述。权利要求22的专利技术提供了一种分析成分的试剂盒，其本文档来自技高网...

【技术保护点】
固定了生理活性物质的支持物，其表面形成有碳或金属或半金属碳化合物层，并且该层上固定有生理活性物质。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：丹花通文，冈村浩，高木研一，天野诚，黑泽龙雄，
申请(专利权)人：东洋钢钣株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]