胶体金层析法检测血液HIV1/2抗体的试纸条及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种胶体金层析法检测血液ＨＩＶ１／２抗体的试纸条及其制备方法。本发明专利技术所述的胶体金层析法检测血液ＨＩＶ１／２抗体的试纸条，是在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫、涂覆金标抗原的玻璃纤维膜、包被膜以及吸水纸而形成的膜条，包被膜有检测区和控制区，检测区包被ＨＩＶ１／２抗原，控制区包被抗鼠抗体。本发明专利技术将艾滋病的特异性抗原ｇｐ３６，ｇｐ４１以及ｇｐ２４引入到ＨＩＶ１／２抗体快速检测试纸条中，并改进了样品垫的处理，能实现ＨＩＶ１／２抗体的血液、血浆以及血清检测，提高检测的窗口期，节约样本，减少操作人员劳动强度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医学检验领域，特别是涉及一种利用胶体金免疫层析技术检测HIV1/2抗体的试纸条。
技术介绍
艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome，AIDS)，又称获得性免疫缺陷综合症，是一类世界范围内严重危害人类健康和生命的病毒性传染性疾病。在不到20年中，已使3000万人受到感染，1000万人失去生命。目前，世界上每天有万余人新感染艾滋病病毒。据统计，至2001年底，我国艾滋病的感染人数为100万左右，现进入快速增长期，根据卫生部的资料，2001年上半年报告的艾滋病病毒感染者数量与上一年相比上升了67.4％。全球的研究结果表明HIV1/2是通过被污染的血液、血液制品、输血或密切个体间接触而传播传染的，在特殊的人群中甚至出现交叉感染的迹象。不但医学界在竭尽全力研究诊断预防治疗艾滋病，各国政府，社会各阶层都纷纷投入到抗击艾滋的运动。但到目前为止，人类还没有找到一种治疗此病的方法。因而早期诊断及时发现感染病人，控制其进一步传播仍然是艾滋病防治的重要手段之一。近年来，国内外主要采用酶联免疫吸附法(ELISA)、PCR、细胞培养等方法检测HIV1/2抗体或病毒。这些方法都不同程度的存在一些缺点。如ELISA法操作程序较复杂，易造成假阳性和假阴性，并易造成操作者受害和环境污染，试验时间较长，需要两个小时以上才能得出检测结果。同时必须具备酶标仪和洗板机，这在基层实验室和小型门诊较难达到，且试验受温度等条件限制，给检测带来不便。分子测试(简称PCR法)其检测时间长，试验步骤繁琐，同时需要使用特殊的仪器和设备，试剂需要冷藏，同时检测费用昂贵，限制了试剂的普及应用。IFA(荧光免疫检测法)必须具备荧光免疫显微镜和暗室条件，为获得良好的荧光观察效果必须配合合适的滤光片，实验时间需要两个小时，结果检测在荧光显微镜下进行，必须由有经验的专业技术人员判定检测结果。阴性的抗体测试结果不能排除是否感染，需要在超过21天后仍然阴性才能确定没有受到HIV1/2感染。细胞培养是一种无菌操作技术，要求具备很高的实验工作环境和条件(无菌操作间、超净工作台、操作间等)，需要大量的仪器设备(培养箱、离心机、显微镜等)，需要大量的专业实验器材，实验技术复杂，需要有经验的技术人员操作，且实验周期很长，不适宜疾病的快速检测。凝聚试验包括明胶颗粒(PA)和乳胶颗粒(LAT)属半定量测定，须多次倍比稀释测定费试剂，且结果重复性差，且灵敏度低。而免疫金标法技术(Immunochromatography Assay)是上世纪九十年代中期发展起来的，因其快速、操作简便、试剂稳定、可室温储运、不易污染的特点得到广泛的应用。它是免疫亲和技术、印迹技术、免疫标记技术和层析技术的组合。将包被抗体，胶体金标记抗体固相化，与样本吸附材料等组合在一起，制备为免疫层析诊断试条/板，使用时只需要把试纸条下插入样本溶液，数分钟就可以判断结果。与免疫渗滤法比较，稳定性好，操作更简便、快速，且由于为干试条/试板形式，无需低温保存，储运方便。目前，免疫胶体金技术在检测HIV1/2抗体的应用上具有如下缺点(1)检测局限于血清样本，不是同时实现血液或者血浆的检测。因此对于某些样本溶血或者样本量不够的情况下，由于灵敏度的限制，会出现错检或者漏检。(2)特异性抗原仅能采用gp36和gp41，检测窗口期长。(3)检测血清时需要对样本进行处理，整个检测时间长，费时费力。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种胶体金层析法检测血液HIV1/2抗体的试纸条，将艾滋病的特异性抗原gp36，gp41以及gp24引入到HIV1/2抗体快速检测试纸条中，能实现HIV1/2抗体的血液、血浆以及血清检测，提高检测的窗口期，节约样本，减少操作人员劳动强度，省时省力。本专利技术所述的胶体金层析法检测血液HIV1/2抗体的试纸条，是在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫、涂覆金标抗原的玻璃纤维膜、包被膜以及吸水纸而形成的膜条，包被膜有检测区和控制区，检测区包被HIV1/2抗原，控制区包被抗鼠抗体。所述的样品垫是经过样品垫处理溶液浸制处理的玻璃纤维膜，所述的样品垫处理液为含1％～5％BSA的0.01M PBS溶液，并含0.01％～0.5％PEG和0.01％～0.05％TWEEN-20表面活性剂。所述的包被膜上，检测区所包被的HIV1/2抗原为HIV1/2的特异性抗原gp36，gp41以及gp24，其来源于商品化的纯化基因工程重组抗原，或者自行制备；控制区所包被的抗鼠抗体，是用纯化的IgG免疫小鼠得到的。本专利技术的另一目的在于提供一种胶体金层析法检测血液HIV1/2抗体的试纸条的制备方法。本专利技术所述的胶体金层析法检测血液HIV1/2抗体的试纸条的制备方法，包括以下步骤A.抗原的制备选用纯化的基因工程表达的HIV1/2病毒重组抗原；B.包被膜的制备用包被膜缓冲液稀释抗原至浓度为5～20μg/ml，喷印在包被膜上，凉干后在25℃～37℃封闭液中浸泡60分钟，取出后于25℃～37℃烘干2小时，封袋备试纸板贴板用；C.金标抗原的制备用0.1M碳酸钾调节胶体金pH值至7.0～8.0，按9～15μg蛋白/ml胶体金加入HIV1/2gp36，gp41和gp24重组抗原，混匀后静置，离心处理，弃去上清，将沉淀用标记洗涤液洗涤，将沉淀用十分之一初始胶体金的金标抗原保存液溶解，置2℃～8℃备涂覆玻璃纤维膜用；D.将制备好的金标抗原涂覆在玻璃纤维膜上；E.样品垫的处理将样品垫的材料玻璃纤维膜放入样品垫处理溶液中处理；样品垫处理液中含1％～5％BSA的0.01M PBS溶液，并含0.01％～0.5％PEG和0.01％～0.05％TWEEN-20表面活性剂；F.在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫、涂覆金标抗原的玻璃纤维膜、包被膜以及吸水纸，得到试纸板，按照要求切割成不同宽度的试纸条。其中，所述的步骤D中，金标抗原的涂覆方法是将制备好的金标抗原均匀的铺在玻璃纤维膜上，每毫升溶液铺4～8平方厘米，25℃～40℃干燥16小时，封袋，置2℃～8℃备试纸板贴板用。将本专利技术所述的试纸条固定在试剂盒的底板上，合上上盖板，使上盖的加样窗对应试纸条的样品垫，结果显示窗对应检测区和控制区，就成为可检测血液HIV1/2抗体的试剂盒。与现有的检测试纸条相比较，本专利技术具有以下优点(1)通过对试纸条的改进，首次将艾滋病的特异性抗原gp36，gp41以及gp24引入到检测试纸条中，能实现HIV1/2抗体的快速检测。(2)对样品垫进行了特殊的预处理，因此在加样血液或血浆时，样品垫能够将样本中血清和血红细胞分离，血红细胞被吸附在样品垫上，血清在毛细作用下继续移动，从而实现检测血液和血浆的功能。(3)本专利技术所述的试纸条提高了HIV1/2检测的窗口期，具有高度特异性、灵敏度、检测速度快等优点，节约样本，减少了操作人员劳动强度。本专利技术成本低廉，操作简便，在检测时不需要特殊的仪器设备，因此能广泛应用于医院、血站、防疫站、卫生检疫部门、大专院校和科研机构的疾病诊断、流行病学调查和科学研究，特别适用于现场、农村和基层单位使用。这对于控制上述病毒性疾病的流行和传播有着极为重要的意义。附图说明图1为本专利技术的结构示意图；图2为本专利技术的检测结果示意图。具体实施例方式本本文档来自技高网...

【技术保护点】
胶体金层析法检测血液ＨＩＶ１／２抗体的试纸条，其特征在于：该试纸条是在底衬（１）上顺次相互搭接地粘贴样品垫（２）、涂覆金标抗原的玻璃纤维膜（３）、包被膜（４）以及吸水纸（５）而形成的膜条，包被膜（４）有检测区（６）和控制区（７），检测区（６）包被ＨＩＶ１／２抗原，控制区（７）包被抗鼠抗体。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王继华，李文美，
申请(专利权)人：王继华，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]