一种产生抗HIV活性物质的链霉菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及链霉菌(Streptomyces sp.)CPCC 201585及其应用。所述链霉菌(Streptomyces sp.)CPCC 201585发酵液的丙酮提取物可明显抑制HIV-1的复制，且从菌丝体的提取物中分离得到的Surfactin类化合物能够通过抑制Vif对hA3G降解的方式发挥抑制HIV-1的复制的作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物制药领域，具体地说，涉及一株产生的抗HIV-1活性物质的链霉菌(Streptomyces sp.)CPCC 201585及其用。
技术介绍
HIV(Human Immunodeficiency Virus)病毒，中文全称人类免疫缺陷病毒，属于逆转录病毒的一种。HIV病毒侵入宿主细胞后，会严重破坏宿主机体免疫功能，从而引起严重的机会性感染以致引起以恶性疾病为特征的继发性免疫缺陷综，即为获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)。首例艾滋病于1981年发现于美国，随后开始在全球蔓延，严重威胁着人类的健康。HIV病毒可分为HIV-1型和HIV-2型，两者基因组具有很大的差异，其中HIV-1是引起全球性艾滋病蔓延的主要病原体。化学治疗仍然是目前最重要的HIV-1治疗手段。从1987年齐多夫定应用与抗HIV-1治疗，至今已有25种药物进入临床应用。按药物的作用机制分类，这些已上市药物中主要是逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂。另外，还有1种整合酶抑制剂和2种病毒进入抑制剂。随着抗HIV药物的不断研发应用，特别是依靠联合药物治疗方式即高效联合抗逆转录病毒疗法(HAART)对艾滋病患者进行治疗，已可以有效降低病毒载量，显著延长患者生存时间，但是药物的耐药性、不良反应及患者的依从性等方面存在的问题常会引起临床治疗的失败。因此，仍需要坚持开发不同结构类型，特别是不同作用机制的新型抗HIV-1药物供临床应用。微生物种类庞大，具有丰富类型的代谢产物，是寻找高效低毒的新抗HIV活性化合物和先导化合物的重要来源。通过建立相应筛选模型快速筛选出抗HIV活性微生物菌株，继而从其代 谢产物中寻找活性化合物或具有一定活性的化合物为先导,进行结构简化和修饰,揭示作用机理和构效关系,是发现新抗HIV药物的有效途径。病毒的耐药性是目前艾滋病药物治疗中最亟需解决的问题。HIV-1之所以能够迅速产生针对现有临床应用的抗病毒药物的耐药性，其主要根源在于这些药物所针对的靶点都是病毒本身。而病原病毒天然就具有高变异的特点，在药物的选择压力下，很容易引起病毒的迅速变异从而产生耐药。因此，解决HIV-1的耐药性问题的关键之一在于必须突破传统的“以病原病毒本身为靶”的药物发展模式。在众多的潜在新靶点当中，HIV-1宿主限制因子(restriction factors)APOBEC3G(human protein apoliprotein B mRNA-editing enzyme-catalytic polypeptide-like-3G，简称hA3G)以其高效抑制HIV-1复制的能力、独特的抗病毒机制及广谱的抗病毒活性，而成为极具发展潜力的抗HIV-1药物的新靶点。hA3G是在人的淋巴细胞中表达的一种RNA/DNA编辑酶，归属于APOBEC蛋白超家族。该家族至少有11个成员，其中包括AID、APOBEC1、APOBEC2、APOBEC3A-H，以及APOBEC4。这些同源蛋白都含有高度保守的胞嘧啶脱氨基功能域(cytodine deaminating domain,简称CD)，而且具有比较高的序列及结构相似性。该家族的多数成员都具有编辑核酸的功能，可以使mRNA上的胞嘧啶残基脱氨形成尿嘧啶，或单链DNA上的脱氧胞嘧啶残基脱氨形成脱氧尿嘧啶。hA3G不仅可以抑制包括HIV-1在内的各种逆转录病毒的复制，而且对非逆转录病毒象乙肝病毒也有很好的抑制效果，具有广谱的抗病毒活性。随后的研究进一步发现，该家族的其他成员以及其他物种所编码同源蛋白对不同的逆转录病毒都具有不同程度的抑制能力，其中包括HIV-1、鼠白血病病毒(MuLV)、内源性逆转录病毒等。因此，hA3G和其他APOBEC3蛋白不仅仅是一类HIV-1限制因子，更是代表 了一种全新的宿主天然免疫系统。作为病毒的拮抗手段，HIV-1的Vif蛋白可以特异性地结合hA3G，并与细胞蛋白Cu15,elongins B and C,Rbx1相互作用，形成Skp1-cullin-F-box(SCF)复合物，通过泛素介导的降解途径，导致hA3G的降解，从而阻断了宿主细胞hA3G抗病毒系统对HIV-1病毒复制的抑制作用。鉴于HIV-1主要的靶细胞(外周血单核细胞、T-淋巴细胞、单核巨噬细胞)均为非允许性细胞，如果能特异而有效地阻断VIF介导的降解途径，宿主细胞就可以利用自身编码的hA3G抑制HIV-1的复制。因此，阻断Vif降解hA3G成为极具发展潜力的抗HIV-1药物的新靶点。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株链霉菌(Streptomyces sp.)CPCC201585，其发酵液的提取物可明显抑制HIV-1的复制；从其菌丝体的提取物中分离得到的Surfactin类化合物具有抑制HIV-1复制的活性。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一株链霉菌(Streptomyces sp.)CPCC 201585，其分离自云南省景洪勐海县的土壤样品中，已经于2014年12月30日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮政编码为100101，保藏号为CGMCC No.10265。所述链霉菌(Streptomyces sp.)CPCC 201585在ISP2培养基上生长良好，培养7天时，菌落多数呈白色至棕色，无可溶性色素生成。该菌株在培养基上形成高度分支的基内菌丝和气生菌丝，并产生松散的螺旋形孢子链，孢子表面多刺状突起。本专利技术还提供了所述链霉菌(Streptomyces sp.)CPCC 201585在制备抗HIV-1病毒药物中的应用。本专利技术还提供了所述链霉菌(Streptomyces sp.)CPCC 201585在制备Surfactin类化合物中的应用。本专利技术所述的链霉菌(Streptomyces sp.)CPCC 201585，其发酵液的提取物可明显抑制HIV-1的复制；从其菌丝体的提取物中分离得到的Surfactin类化合物具有抑制HIV-1复制的活性。本专利技术还提供含有权利要求1所述的链霉菌(Streptomyces sp.)CPCC 201585的菌剂。本专利技术还提供了一株链霉菌(Streptomyces sp.)CPCC 201585发酵液的提取方法，包括如下步骤：1)将上述链霉菌(Streptomyces sp.)CPCC 201585活化，接种到发酵培养基中进行发酵培养；其中，所述发酵培养采用本领域技术人员所掌握的常规培养基和培养条件；2)向步骤1)所得的发酵液中加入等体积的丙酮，超声提取，离心，回收丙酮，冷冻干燥后即得。本专利技术所述链霉菌(Streptomyces sp.)CPCC 201585发酵液的提取方法中，在步骤1)中，所述发酵培养条件为：温度26～32℃，摇床震荡培养4～8天。本专利技术所述链霉菌(Streptomyces sp.)CPCC 201585发酵液的提取方法中，在步骤2)中，所述超声提取条件为：室温，超声提取20～30min。本专利技术还提供了一种利用链霉菌(Streptomyces sp.)CPCC 201585产生Surfactin类化合物的方法。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种链霉菌(Streptomyces sp.)CPCC 201585，其特征在于，保藏号为CGMCC No.10265。

【技术特征摘要】
1.一种链霉菌(Streptomyces sp.)CPCC 201585，其特征在于，保藏号为CGMCC No.10265。2.权利要求1所述的链霉菌(Streptomyces sp.)CPCC 201585在制备抗HIV-1病毒药物中的应用。3.权利要求1所述的链霉菌(Streptomyces sp.)CPCC 201585在制备Surfactin类化合物中的应用。4.一种链霉菌(Streptomyces sp.)CPCC 201585发酵液的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将权利要求1所述的链霉菌(Streptomyces sp.)CPCC 201585活化，接种到发酵培养基中进行发酵培养；2)向步骤1)所得的发酵液中加入等体积的丙酮，超声提取，离心，回收丙酮，冷冻干燥后即得。5.一种Surfactin类化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将链霉菌(Streptomyces sp.)CPCC 201585活化，接种到发酵培养基中进行发酵培养；2)将步骤1)所得的发酵液离心处理，得上清...

【专利技术属性】
技术研发人员：余利岩，庞旭，岑山，马铃，方晓梅，魏玉珍，李晓宇，刘红宇，张玉琴，
申请(专利权)人：中国医学科学院医药生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11