变性脂蛋白的定量方法及定量用试剂技术

本发明专利技术提供生物体试样中变性脂蛋白的定量方法，其特征在于使生物体试样与抗磷酸胆碱抗体接触，对生成的免疫复合物进行定量；循环系统疾病的检测方法，其特征在于使生物体试样与抗磷酸胆碱抗体接触，对生成的免疫复合物进行定量；含有抗磷酸胆碱抗体的变性脂蛋白定量用试剂和含有抗磷酸胆碱抗体的循环系统疾病检测试剂。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物体试样中变性脂蛋白的定量方法，其特征在于使用抗磷酸胆碱抗体对生物体试样中的变性脂蛋白进行定量；生物体试样中变性脂蛋白的定量方法，其特征在于使用抗磷酸胆碱抗体和抗脂蛋白抗体对生物体试样中的变性脂蛋白进行定量；循环系统疾病的检测方法，其特征在于使用抗磷酸胆碱抗体对生物体试样中的变性脂蛋白进行定量，由该定量值检测循环系统疾病；循环系统疾病的检测方法，其特征在于使用抗磷酸胆碱抗体和抗脂蛋白抗体对生物体试样中的变性脂蛋白进行定量，由该定量值检测循环系统疾病；含有抗磷酸胆碱抗体的变性脂蛋白定量用试剂；含有抗磷酸胆碱抗体和抗脂蛋白抗体的变性脂蛋白定量用试剂。
技术介绍
动脉硬化多在主动脉、冠状动脉、脑动脉和颈动脉等肌性动脉中发生，是心绞痛、心肌梗塞、脑梗塞等的主要原因疾病。虽有报道指出其原因是血清胆固醇上升、血小板凝集、内皮损伤等，但其成因基本上都未得到明确。血清脂质强烈显示出与心肌梗塞或心绞痛等冠状动脉疾病、脑梗塞或脑血管性痴呆等脑动脉疾病、或者肾病或糖尿病性肾病等肾动脉疾病以及末梢动脉闭塞症等末梢动脉疾病等各种循环系统疾病的关系，其测定被认为对于这些疾病的诊断、病态的阐明、治疗效果的检测等极为重要。但是，最近的研究指出对上述疾病患者组和健康人组的血清脂质的绝对量进行比较，结果发现两组之间并没有明显大的差异，倒是两组中，存在于血清中的变性的脂蛋白(以下称为变性脂蛋白)的量明显不同。Steinberg等人还指出了变性脂蛋白之一的氧化脂蛋白与动脉粥样硬化病灶的发展之间的相关性。已证实存在清除受体等变性脂蛋白的受体，因此有人提出了以下假说变性脂蛋白经由这些受体被摄入细胞内形成泡沫细胞，由此导致开始形成动脉粥样化；还有人提出由于变性脂蛋白损伤内皮细胞，引起血小板粘连凝集、白细胞集结、血细胞成分向血管内浸润，并以此为诱因引发平滑肌细胞游走和增殖的假说。有关变性脂蛋白在病灶部位蓄积，例如1988年Haberland等人报道了针对丙二醛改性的低密度脂蛋白(LDL)的抗体可对动脉硬化病灶部位染色、1989年Yla Herttuala等人报道了用抗MDA-ApoB抗体进行的免疫印迹法检测出由病灶部位提取的脱辅基B(apoB)等。但是上述抗MDA-ApoB抗体是将用丙二醛进行人工氧化改性的脂蛋白作为抗原而得到的抗体，具有不仅与氧化产物，也与其他变性蛋白例如氧化白蛋白等交叉反应的性质，因此不明确是否测定了变性脂蛋白。如上所述，已知变性的脂蛋白有乙酰基化脂蛋白、糖基化脂蛋白、丙二醛化脂蛋白、4-羟基-2-壬烯醛(HNE)改性脂蛋白、氧化脂蛋白等，但生物体内的变性脂蛋白实体如何尚不明确。已知脂蛋白凝集后性质发生变化，变得容易被巨噬细胞摄入，可以认为这也是脂蛋白变性的一种。已知这种变性由氧化、硫醇化、某种酶处理等引起，并且漩涡振荡处理等物理处理也会引起这样的变性。发生这样变性的脂蛋白容易被巨噬细胞摄入。因此，在巨噬细胞中引发胆固醇的蓄积，可认为与动脉硬化性病灶的发生、发展有着密切的关联。由此开发出变性脂蛋白的测定方法，用于以动脉硬化为主的循环系统疾病的诊断。具体地说，目前已报道有使用识别磷脂酰胆碱氧化物的抗体测定氧化脂蛋白的方法(特开平8-304395号、特开平9-288106号)；使用识别HDL氧化磷脂(特别是根磷脂酰胆碱(rhizophosphatidylcholine))的抗体-9F5-3a和抗apo-AI抗体测定氧化HDL的方法(特开平9-33525号)；将识别所有经乙酰基化、丙二醛化、氧化等化学处理的LDL的抗体和氧化剂组合来测定氧化LDL的方法(特开平9-5323号)；使用与纤溶酶原和LDL没有交叉反应性且能识别特定的肽的抗体测定变性或改性脂蛋白(a)的方法(特开平9-297137号)，所述特定的肽由于脂蛋白(a)的氧化、还原、水解等分解、加热或由于蛋白质变性剂等变性剂等使其一级结构、高级结构或立体结构受到改变、分解或化学改性，导致结构、组成或构型发生改变；将抗丙二醛化脂蛋白抗体与表面活性剂联合使用，测定变性脂蛋白类的方法(特开平8-101195号)等，但这些方法都未显示出充分的成果。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供生物体试样中变性脂蛋白的定量方法、循环系统疾病的检测方法、变性脂蛋白定量用试剂和循环系统疾病的检测试剂。本专利技术涉及下述(1)-(36)(1)生物体试样中变性脂蛋白的定量方法，其特征在于使生物体试样与抗磷酸胆碱抗体接触，对生成的免疫复合物进行定量。(2)生物体试样中变性脂蛋白的定量方法，其特征在于使生物体试样与抗磷酸胆碱抗体和抗脂蛋白抗体接触，对生成的免疫复合物进行定量。(3)生物体试样中变性低密度脂蛋白的定量方法，其特征在于使生物体试样与抗磷酸胆碱抗体和抗低密度脂蛋白抗体接触，对生成的免疫复合物进行定量。(4)上述(3)的方法，其中所述与低密度脂蛋白特异性结合的抗体是抗脱辅基B蛋白抗体。(5)生物体试样中变性高密度脂蛋白的定量方法，其特征在于使生物体试样与抗磷酸胆碱抗体和抗高密度脂蛋白抗体接触，对生成的免疫复合物进行定量。(6)上述(5)的方法，其中所述与高密度脂蛋白特异性结合的抗体是抗脱辅基A蛋白抗体。(7)生物体试样中脂蛋白(a)的定量方法，其特征在于使生物体试样与抗磷酸胆碱抗体和抗脱辅基蛋白质(a)抗体接触，对生成的免疫复合物进行定量。(8)生物体试样中变性高密度脂蛋白和变性低密度脂蛋白的定量方法，其特征在于使生物体试样与抗磷酸胆碱抗体、抗高密度脂蛋白抗体和抗低密度脂蛋白抗体接触，对生成的免疫复合物进行定量。(9)上述(8)的方法，其中所述与高密度脂蛋白特异性结合的抗体是抗脱辅基A蛋白抗体。(10)上述(8)的方法，其中所述与低密度脂蛋白特异性结合的抗体是抗脱辅基B蛋白抗体。(11)循环系统疾病的检测方法，其特征在于使生物体试样与抗磷酸胆碱抗体接触，对生成的免疫复合物进行定量。(12)循环系统疾病的检测方法，其特征在于使生物体试样与抗磷酸胆碱抗体和抗脂蛋白抗体接触，对生成的免疫复合物进行定量。(13)循环系统疾病的检测方法，其特征在于使生物体试样与抗磷酸胆碱抗体和抗低密度脂蛋白抗体接触，对生成的免疫复合物进行定量。(14)上述(13)的方法，其中所述与低密度脂蛋白特异性结合的抗体是抗脱辅基B蛋白抗体。(15)循环系统疾病的检测方法，其特征在于使生物体试样与抗磷酸胆碱抗体和抗高密度脂蛋白抗体接触，对生成的免疫复合物进行定量。(16)上述(15)的方法，其中所述与高密度脂蛋白特异性结合的抗体是抗脱辅基A蛋白抗体。(17)循环系统疾病的检测方法，其特征在于使生物体试样与抗磷酸胆碱抗体和抗脱辅基蛋白质(a)抗体接触，对生成的免疫复合物进行定量。(18)循环系统疾病的检测方法，其特征在于使生物体试样与抗磷酸胆碱抗体、抗高密度脂蛋白抗体和抗低密度脂蛋白抗体接触，对生成的免疫复合物进行定量。(19)上述(18)的方法，其中所述与高密度脂蛋白特异性结合的抗体是抗脱辅基A蛋白抗体。(20)上述(18)的方法，其中所述与低密度脂蛋白特异性结合的抗体是抗脱辅基B蛋白抗体。(21)变性脂蛋白定量用试剂，该试剂含有抗磷酸胆碱抗体。(22)变性脂蛋白定量用试剂，该试剂含有抗磷酸胆碱抗体和抗脂蛋白抗体。(23本文档来自技高网...

【技术保护点】
生物体试样中变性脂蛋白的定量方法，其特征在于：使生物体试样与抗磷酸胆碱抗体接触，对生成的免疫复合物进行定量。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：河野弘明，柳泽卓，益成利幸，
申请(专利权)人：协和美帝克斯股份有限公司，
类型：发明
国别省市：JP[日本]