检测阴道分泌物中羊水的装置和方法制造方法及图纸

本发明专利技术涉及通过ＰＡＭＧ－１检测抗体来检测阴道中少量羊水的诊断方法和装置。如图１所示，该装置包括含有已标记的Ｍ２７１抗体区（１０）的衬垫（１２），测试区（１４）和对照区（１６）。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及准确检测阴道中少量羊水的诊断方法。具体地，本专利技术涉及采用特异选择的能与胎盘α1-微球蛋白特异性结合的单克隆抗体。更为具体的是，本专利技术涉及选择一对抗-PAMG-1抗体(“基础对”)，该对抗体为检测孕妇阴道分泌物中最低背景浓度的PAMG-1提供了足够的灵敏性。此外，本专利技术涉及包含PAMG-1抗体的固相免疫检测系统，其中将两种或更多种抗-PAMG-1抗体的组合固定在装置的固相支持物上，从而精确建立预定的灵敏度阈值水平。
技术介绍
在大约10％的孕妇中会发生胎膜(羊膜囊)过早破裂，如果得不到及时治疗，将造成大约10％的围产期死亡。术语PROM(胎膜早破)涉及在足月或不足月分娩开始的24小时前或更多小时前发生的膜自发破裂。PPROM指的是早产膜早破。大约有30-50％这样的过早破裂发生在怀孕37周之前。在这样的情况下，由于PROM与胎儿肺系统发育障碍和子宫内感染风险的显著增加相关，胎膜破裂的确切诊断是非常重要的。这样的感染在子宫内渗透会使产妇和围产期发病率及死亡率上升大约10个百分点。在怀孕38至40周及时诊断破裂是极为重要的，因为一旦检测出PROM，就应该尽可能快地诱发分娩。破裂诊断在怀孕37周前也很重要，因为它使得能够防止羊膜内感染和对胎儿肺发育进行刺激。目前诊断膜破裂没有“金标准”。PROM是一个动态过程，因此膜破裂和诊断状态的实施之间的间隔、“高”渗漏的出现、间歇渗漏、与种群相关的PROM发生率的变化以及能干扰检测结果的材料都是如不解决将造成不准确的报道的因素。这些不准确性可能在解释旨在揭示用于鉴别PROM的最佳手段的研究时导致错误。PROM的诊断传统上依赖于患者报告液体从阴道流出。物理检查能够给出明确的诊断；然而，在检查中有时候也存在结果的内在不一致或者摸棱两可。这种情况造成对验证性诊断试验的需要(Lockwood C.J.et al.，Am.J.Obstet.Gynecol.，1994，v.171，No 1，pp.146-150)。目前所采用的一些用于检测阴道中羊水的方法都存在不足，例如羊齿试验(fern test)(M.L.Friedman and T.W.McElin，“破裂胎膜的诊断”，American Journalof Obstetrics and Gynecology 1969，Vol.100，pp.544-550)。该方法基于观察羊水在载玻片上干燥后形成的所谓树状图形而进行羊水检测。然而，该方法不够准确，因为它是以阴道中羊水高度挥发的特性为基础的。其产生的错误结果可达30％之多。也有人提出通过采用一些染料尼罗蓝，丫啶橙，溴百里酚蓝，硝嗪(Nitrazine)等来检测胎膜的破裂(M.L.Friedman and T.W.McElin，见上文)。该方法不够便捷，而且由于阴道中羊水的易挥发的化学性质及对其的某些可能混合而具有缺点。例如，阴道感染可能会影响上述检测的结果。对目前流行的Nitrazine和Ferning检测的早期研究表明，这些检测具有很高的不准确率，自膜破裂后一个小时以上这种不准确率随时间延长愈发增高，且在24小时后变成不确定的。该研究表明，在PROM延长的情况下，这些检测并未比简单的临床评估提供了更好的诊断信息(Gorodeski I.G，Haimovitz L.，Bahari C.M.，Journal Perinat.Med，1982，v.10，No6，pp286-292)。更近一些的检测数据为(Trovo S.et al.，Minerve Ginecol.1998，v.50，No12，pp.519-512)Nitrazine检测显示的灵敏度为70％，特异性为97％，准确度90％； Ferning检测显示的灵敏度为70％，准确度为93％。近来有人提出基于羊水中蛋白质的免疫化学分析来检测胎膜的破裂。停泊式免疫化学分析(Docked immunochemical analysis)利用以下羊水蛋白质来检测膜破裂α-胎蛋白，催乳素，纤连蛋白，以及胰岛素样生长因子结合蛋白1，见B.L.Rochelson等“快速检测——可能应用于膜的早熟破裂诊断中”，Obstetrics and Gynecology，1983，v.62，pp.414-418；P.R.Koninckx等“阴道液中催乳素的浓度一种诊断膜破裂的新方法”，British J.Obstetr.Gynecol.，1981，v.88，pp.607-610；P.Hellemans等“在羊膜破裂早期检测中应用ROM Check免疫测定的初步结果”，Eur.J.Obstet.Gynecol.Reprod.Biol.，1992，v.43(3)，pp.173-179；Rutanen，E.M.等“宫颈/阴道分泌物中胰岛素样生长因子结合蛋白-1的检测在胎膜破裂诊断中与ROM Check膜免疫检测相比较”，Clin.Chim.Acta.，1993，v.214，pp.73-81。Rutanen，E.M.，等后来研发了一种采用倒置色谱膜的色谱检测(FI-84863；美国专利US5554504)。这些基于α-胎蛋白(AFP)和催乳素(PRL)的方法是不可靠的，因为AFP和PRL蛋白的血液/羊水比率很容易发生明显变化。AFP和PRL仅仅在怀孕的第二个三个月期在羊水中以高浓度存在。足月时两种蛋白的羊水/血清蛋白浓度比率均仅为大约3至4。另一种基于阴道分泌物中胎儿纤连蛋白检测的方法也不令人满意。例如即使在胎膜不破裂的情况下，胎儿纤连蛋白也可能存在(P.Hellemans，等“在羊膜破裂早期检测中利用ROM Check免疫检测的初步结果”，Eur.J.Obstet.Gynecol.Reprod.Biol.，1992，v.43(3)，pp.173-179；C.Lockwood，等“在宫颈和阴道分泌物中胎儿纤连蛋白可作为早产的预报物”，NewEngland Journal of Medicine，1991，v.325，pp.669-674)，因此产生了假阳性结果。所有这些以检测α-胎蛋白、催乳素和纤连蛋白为基础的胎膜破裂检测方法是不准确的，因为在这些蛋白质的羊水浓度以及这些蛋白的羊水与血清相对浓度的调控上存在可变的因素。对于最新的IGFBP-1检测，关于其特异性和准确度，存在矛盾数据。一种快速试条检测(strip test)(OY Medix Biochemica的PROM检测，Finland，也称为Amni-check，MAST Diagnostica，Germany)，已经被研发出来用于检测阴道分泌物中IGFBP-1的存在(Rutanen EM，KarkkainenTH，Lehtovirta J.，Uotila JT，Hinkula MK，Hartikainen AL.“在胎膜破裂诊断中胰岛素样生长因子结合蛋白-1的快速试条检测的评价”，Clin ChimActa 1996，Sep30；v.253(1-2)，pp.91-101)。E.Rutanen报道了该测定法的检测限度的设定应该使宫颈分泌物中低于400ng/ml(低于孕妇血清中IGFBP-1水平的95％)的IGFBP-1浓度保持阴性。然而，在出血的情况下，要对检测结果进行本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在检测孕妇阴道分泌物中少量羊水时使假阳性和假阴性结果的可能性最小化的方法，以及基于该方法的试条装置，其中所述方法包括：（ｉ）选择用于测定阴道分泌物中胎盘α１－微球蛋白（ＰＡＭＧ－１）的最低背景浓度的高度特异性单克隆抗体对；以及（ｉｉ）选择其它抗－ＰＡＭＧ－１单克隆抗体，所述抗体旨在和所述抗体对组合用于试条检测装置中以准确设立该试条检测装置的规定灵敏度阈值。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：DD彼得鲁宁，BB富克斯，EI扎赖斯基，MN博尔托夫斯卡亚，SV纳济莫娃，NA斯塔罗维斯塔亚，AB康斯坦丁诺夫，MI马尔什斯卡亚，
申请(专利权)人：NDIA公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]