高亲和力抗人类IgE抗体制造技术

本发明专利技术涉及高亲和力人类单克隆抗体，尤其那些针对免疫球蛋白Ｅ（ＩｇＥ）的同型决定子的高亲和力人类单克隆抗体，以及这些抗体的直接等效物及衍生物。这些抗体可以一比原始亲代抗体高至少１００倍的亲和力与其各自的靶相结合。这些抗体可用于诊断、预防和治疗疾病。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及高亲和力人类单克隆抗体，尤其那些针对免疫球蛋白E(IgE)的同型决定子的高亲和力人类单克隆抗体，以及这些抗体的直接等效物及衍生物。这些抗体可以一比原始亲代抗体高至少100倍的亲和力与其各自的靶相结合。这些抗体可用于诊断、预防和治疗疾病。
技术介绍
过敏为一种由对一异源物质(例如过敏原)的过度免疫反应引发的超敏状态。速发型(I型)超敏反应的特征为与过敏原接触后立即出现过敏反应，其通过B细胞介导并且是基于抗原-抗体反应。迟发型超敏反应通过T细胞介导并且是基于细胞免疫机理。近些年来，术语“过敏”变得越来越与I型超敏反应具有相同含义。速发型超敏反应这一反应是基于由B细胞产生免疫球蛋白E类的抗体(IgE抗体)这一现象，当B细胞与过敏原接触时其会分化成抗体分泌浆细胞。IgE引发反应是一发生在过敏原进入身体的位置(即粘膜表面及/或局部淋巴结)处的局部事件。局部产生的IgE将首先敏化局部肥大细胞，即IgE抗体的恒定区与肥大细胞表面上的Fcε受体结合，然后“溢出”的IgE进入循环系统并整个身体中的循环嗜碱性粒细胞及组织固定的肥大细胞二者上的受体结合。当所结合的IgE随后与过敏原接触时，Fcε受体通过过敏原的结合而被交联，造成细胞脱粒并释放许多过敏介体，例如组胺、前列腺素、白细胞三烯等。这些物质的释放导致速发型超敏反应的典型临床症状，即呼吸道或肠道平滑肌收缩，小血管扩张且其对水及血浆蛋白质的通透性增加，分泌粘液并从而导致例如过敏性鼻炎，变应性湿疹及哮喘，以及刺激皮肤神经末端从而导致瘙痒及疼痛。另外，当第二次与过敏原接触时反应加剧，这是因为某些B细胞在第一次与过敏原接触后通过在细胞表面上表达IgE而形成表面IgE阳性B细胞(sIgE+B细胞)的“记忆池”。有两大类IgE受体，即高亲和力受体FcεRI及低亲和力受体FcεRII。FcεRI主要在肥大细胞及嗜碱性粒细胞的表面上表达，但在人类朗格汉斯细胞、树突细胞及单核细胞上亦有少量表达，其中FcεRI在IgE介导的过敏原呈现中起作用。另外，已报导在人类嗜伊红细胞及血小板存在FcεRI(Hasegawa，S.等人，Hematopoiesis，1999，932543-2551)。在B细胞、T细胞或嗜中性粒细胞的表面上未发现FcεRI。The expression of FcεRI在朗格汉斯细胞及皮肤树突细胞上的表达在功能及生物学上对于过敏性个体中的IgE结合抗原的呈现均较为重要(KlubalR.等人，J.Invest.Dermatol.1997，108(3)336-42)。低亲和力受体FcεRII(CD23)为一凝集素样分子，其包含三个完全相同的亚单位，该些亚单位具有自细胞质膜的α螺旋卷曲柄延伸的头结构(Dierks，A.E.等人，J.Immunol.1993，1502372-2382)。当与IgE结合时，FcεeRII与B细胞上参与调节IgE合成的CD21联合(Sanon，A.等人，J.Allergy Clin.Immunol.1990，86333-344，Bonnefoy，J.等人，Eur.Resp.J.1996，963s-66s)。人们早已认识到FcεRII对于过敏原呈现的作用(Sutton及Gould，1993，Nature，366421-428)。与上皮细胞上的FcεRII结合的IgE负责特定及迅速的过敏原呈现(Yang，P.P.，J.Clin.Invest，2000，106879-886)。FceRII存在于数种细胞类型上，包括B细胞、嗜伊红细胞、血小板、天然杀伤细胞、T细胞、滤泡树突细胞及朗格汉斯细胞。已鉴别出IgE细胞上与FcεRI及FcεRII相互作用的结构实体。诱变研究已显示，CH3结构域同时介导IgE与FcεRI的相互作用(Presta等人，J.Biol.Chem.1994，26926368-26373；Henry A.J.等人，Biochemistry，1997，3615568-15578)及与FcεRII的相互作用(Sutton及Gould，Nature，1993，366421-428；Shi，J.等人，Biochemistry，1997，362112-2122)。这两种高及低亲和力受体的结合位点沿一穿过两个CH3结构域的中心旋转轴对称分布。FcεRI结合位点位于CH3结构域中接近CH2结构域接点的外侧上，而FcεRII结合位点位于CH3的羧基端上。一种前景良好的治疗过敏的概念涉及施用单克隆抗体，这些单克隆抗体具IgE同种型特异性，因此能结合IgE。该方法是基于通过减量调节IgE免疫反应来抑制过敏反应，而IgE免疫反应是引发过敏的最早事件并维持过敏状态。由于不影响其他类抗体的反应，因此可以对过敏症状达成一迅速并持久的影响。关于人类嗜碱性粒细胞密度的早期研究显示，患者血浆中IgE的水平与每一嗜碱性粒细胞上FcεeRI受体的数量之间有关联(Malveaux等人，J.Clin.Invest，1978，62176)。他们注意到，过敏性及非过敏性个体中的FcεRI密度介于每一嗜碱性粒细胞104至106个受体之间。后来证明，用抗IgE剂治疗过敏性疾病可将循环IgE的量降低至治疗前水平的1％(MacGlashan等人，J.Immunol.，1997，1581438-1445)。MacGlashan对从用全抗IgE抗体治疗的患者中获得的血清进行分析，其中全抗IgE抗体可结合在患者血清中循环的游离IgE。他们报导，降低患者体内循环IgE的水平可导致嗜碱性粒细胞表面上的受体数量减少。因此，他们猜测，嗜碱性粒细胞及肥大细胞表面上FcεRI的密度直接或间接由循环IgE抗体的水平调节。最近，WO 99/62550揭示使用IgE分子及片段，其结合至FcεRI及FcεRII IgE结合位点，从而阻断IgE与受体的结合。然而，对这些过敏性疾病的治疗不具有有害副作用的有效治疗方法仍极为有限。一种治疗过敏性疾病的方法涉及使用人源化抗IgE抗体来治疗过敏性鼻炎及哮喘(Corne，J.等人，J.Clin.Invest.1997，99879-887；Racine-Poon，A.等人，Clin.Pharmcol.Ther.1997，62675-690；Fahy，J.V.等人，Am.J.Resp.Crit.Care Med.1997，1551824-1834；Boulet，L.P.等人，Am.J.Resp.Crit.Care Med.，1997，1551835-1840；Milgrom，E.等人，N.Engl.J.Med.，1999，3411966-1973)。这些临床数据表明，抑制IgE与其受体的结合是一种治疗过敏性疾病的有效方法。适合作为抗过敏剂的抗体应与可分化成产生IgE的血浆细胞的表面IgE阳性B细胞反应，因此其可用于在功能上消除那些B细胞。然而，IgE抗体原则上亦可通过交联Fcε受体引发IgE敏化的肥大细胞释放介体，从而拮抗施加于血清IgE及slgE+B细胞水平上的有益作用。因此，适合于治疗过敏的抗体必须能与敏化肥大细胞及嗜碱性粒细胞上结合的IgE反应，但亦能保持识别slgE+B细胞的能力。此等IgE同种型特异性抗体已由Chang等人(Biotechnolog本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种可变轻链区，其包含一具有式ＦＲＬ１－ＣＤＲＬ１－ＦＲＬ２－ＣＤＲＬ２－ＦＲＬ３－ＣＤＲＬ３－ＦＲＬ４的氨基酸序列，其中ＦＲＬ１由ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：３０至３７中的任一个组成；ＣＤＲＬ１由ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：５至７中的任一个组成；ＦＲＬ２由ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：３８至３９中的任一个组成；ＣＤＲＬ２由ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：８至１２中的任一个组成；ＦＲＬ３由ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：４０至４３中的任一个组成；ＣＤＲＬ３由ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１３至１４中的任一个组成；而ＦＲＬ４由ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：４４组成。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：桑贾耶辛格，凯瑟琳福斯特，赫伦吴，
申请(专利权)人：唐纳士公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]