本发明专利技术涉及ＧＰＲ９１－一种嘌呤受体样多肽、其于肥大细胞中的表达、和其于诊断和／或治疗由肥大细胞介导的疾病中的用途，所述疾病包括过敏性和非过敏性哮喘、慢性阻塞性肺病（ＣＯＰＤ）、过敏性鼻炎、过敏症、过敏性肠胃疾病、特应性皮炎、风湿性关节炎和其它过敏性、自体免疫性与炎性疾病。本发明专利技术也包括筛选ＧＰＲ９１受体激动剂和／或拮抗剂的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
无
技术介绍
已报导过多种接收细胞外核苷酸的嘌呤型受体。这些P2嘌呤型受体是一类主要由ATP、ADP、UTP和UDP激活的G蛋白偶联受体。P2受体可分为两类P2X受体(离子通道)及P2Y受体(G-蛋白偶联受体)。在P2Y家族内，已经鉴别了五种功能性人类受体(P2Y1、2、4、6和8)。此外，基于特异性药理学已假定多种非克隆嘌呤型受体，其中最熟知的为在人类血小板中所发现的P2T受体(通常归类为P2Y家族)。基于蛋白质同源同样已假定类嘌呤型孤儿受体(P2Y5、9和10)，但是到目前为止这些受体仍然对广泛范围的嘌呤型配体无反应。P2Y受体为大小范围在328至379个氨基酸之间并且糖基化作用后分子量介于41与53KD之间的7-膜-跨度蛋白质。氨基端朝向细胞外部环境而羧基端位于质膜的细胞质面上。已知嘌呤型受体与神经递送、ADP诱导血小板形变与聚集、肺黏膜纤毛清除和平滑肌松弛有关。同样已认为嘌呤型受体在心脏血管系统、胃-肠(GI)道、免疫系统和内分泌系统中具有作用。哮喘是一种特征为气管发炎、过度反应和变形的疾病。用于治疗哮喘的主要治疗药物为p2-激动剂(使气管狭窄所引起的症状减轻)和皮质类固醇(旨在缩减肺中的发炎过程和改善或减少肺功能的进一步恶化)。尽管有这些和其它形式的治疗，但是哮喘发病率仍伴随着其在世界范围的流行而上升。人类肥大细胞通过释放细胞因子、趋化因子、蛋白酶和小分子介质在哮喘、过敏和炎性疾病的发展中起重要作用(Nechushtan，H.和Razin，E.1996Critical Review Oncology/Hematology 23131-150；Bradding，P.和Halgate，S.1999 Critical Review Oncology/Hematology 31119-133；Wedemeyer等人，2000 Cur.Opinion In Immunol.12624-631；Hart，PH，2000 Immunol.CellBiol.79149-153；Lee，DM等人，2002 Science 2971689；Boyce，J.2003 J.Allergy Clin.Immunol.，，11124-32)。例如，在哮喘患者中，症状的恶化伴随着来自肥大细胞中的细胞因子与趋化因子的基因活化、从头合成和释放，其导致过度的支气管收缩，引起人类气管平滑肌细胞增殖，并且募集和激活炎性细胞。此外，与位于非哮喘患者气管平滑肌上的肥大细胞数目相比，存在于气喘患者气管平滑肌上的肥大细胞的数目增加。导致肥大细胞活化与哮喘的刺激(例如过敏原诱导的IgE交联)与细胞内钙浓度的增加和钙介导的信号通路有关，其增强细胞因子、趋化因子和蛋白酶的表达与从头合成(Nature 1999，402B24；Immunity 2002，16441)。活化T-细胞核因子(NFAT)与活化蛋白-1(AP-1)是在肥大细胞的信号串联中起重要作用的转录因子(J.Biol.Chem.1995，27016333；Annu.Rev.Immunol.1997，15707；PNAS 2003，1001169)。因此，可使用钙介导的通路，转录因子(NFAT与AP-1)和与哮喘有关的细胞因子、趋化因子和蛋白酶基因的活化作为在肥大细胞中鉴别治疗靶点的一个代替物。
技术实现思路
本专利技术是关于一种筛选一种调节GPR91受体活性化合物的方法，其包含(a)制备包含一个编码SEQ ID NO 2氨基酸序列的核酸序列的一转染细胞；(b)使这(些)转染细胞与至少一种其调节GPR91受体活性的能力待设法测定的化合物接触；和(c)监测所述细胞受体活性的改变。可稳定或瞬时转染细胞。所述细胞可为肥大细胞、从GPR91-基因剔除小鼠(GPR917GPR91″)中分离的基因剔除细胞、CHO、COS-7，293细胞、HELA或由肥大细胞或白血病肥大细胞建立的细胞系。可通过测量细胞内钙流动、测量报告基因(如NFAT-Luc报告质粒)的表达水平、测量细胞因子表达水平和其它常用的测量受体活性或抑制作用的方法来监测GPR91活性的调节。报告基因可操作性地连接于GPR91应答转录元件，例如NFAT(活化T-细胞核因子)结合基序元件。本专利技术也包括一种筛选GPR91活性激动剂和拮抗剂的方法，其包含(a)使表达GPR91受体的细胞与候选化合物接触，(b)分析细胞反应并c)将所述细胞反应与在没有候选化合物存在下完成的标准细胞反应进行比较；借此，细胞反应较标准有所增加表明所述化合物为激动剂而细胞反应较标准有所降低表明所述化合物为拮抗剂。本专利技术是关于激动剂和拮抗剂，包括那些在治疗免疫疾病中提供治疗利益的激动剂和拮抗剂，所述疾病包括过敏性疾病(例如哮喘)以及炎症性疾病。在一个实施例中，拮抗剂为可溶形式的GPR91受体及源于GPR91受体的细胞外结构域能够结合GPR91受体的可溶性多肽。拮抗剂可为选自SEQID NO2的细胞外结构域的肽或其拮抗剂片段。这些肽通过结合GPR91的自然配体并阻止配体结合天然受体来阻断所述配体与GPR91的结合。本专利技术包括特异性结合GPR91的抗体，其包括激动剂抗体、拮抗剂抗体、具有Fc介导的细胞毒性(如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC))的抗体、抗体结合体和阻断与GPR91结合的抗体。这些抗体可为中和性、激动剂、拮抗剂或结合于GPR91而用于供诊断之目的。这些抗体可为多克隆的或单克隆的和其功能性结合片段。单克隆抗体可为人源化的、人的、嵌合的、双特异性的或结合的。本专利技术同样包括单链抗体。结合体可包括霉素或凋亡诱导部分，例如选自Bax-α、Bak、Bcl-Xs、Bad、Bid、Bik、Erk和Bok的Bcl-2家族的促进凋亡成员。抗体结合体可用于消耗肥大细胞或诱导肥大细胞凋亡。本专利技术包括用于诊断与/或治疗的这些抗-GPR91抗体的组合物。组合物包括与适当的载剂、佐剂、稀释剂、赋形剂与/或添加剂结合的抗体。本专利技术另一方面是关于结合(例如配体)并/或调整GPR91蛋白质生物活性的有关鉴别试剂的筛选方法。因为GPR91蛋白质在肥大细胞中表达，所以这些试剂可与调节肥大细胞或其它免疫细胞的成熟、迁移、活化或与其它细胞通讯有关。因此，结合并调整GPR91蛋白质生物活性的试剂可有效于减轻哮喘和其它过敏性疾病、白血病的某些症状或减轻发炎。本专利技术也包括通过使用抗-GPR91抗体对肥大细胞介导的疾病及病症进行诊断的方法。GPR91对肥大细胞为高度特异性的，因此可用针对GPR91的抗体在既定的样品(如组织活体切片)中检测肥大细胞的存在和频率。在肺部平滑肌组织中的肥大细胞水平增加的患者中，样品中GPR91的相对增加可预示(例如)哮喘。抗-GPR91抗体也可用于检测表达GPR91的细胞的存在或增加/减少。具体实施例方式术语“纯多肽”意思是从至少一种在其天然环境中通常与纯多肽有关的杂质多肽中鉴别并分离出来的多肽，尤其是从其细胞环境中分离出的多肽。术语“经分离的多核苷酸”意思是从至少一种在其天然环境中通常与经分离的多核苷酸有关的杂质多核苷酸中鉴别并分离出来的多核苷酸，尤其是从其细胞环境中分离的多核苷酸。用于描述多核苷酸、多肽序列或其它分子时，术语“天然的”意思是在自然中所发现的多肽、多核苷本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种筛选一调节ＧＰＲ９１受体活性的化合物的方法，其包含：ａ．制备一包含编码ＳＥＱＩＤＮＯ２氨基酸序列的核酸序列的经转染细胞；ｂ．使经转染的细胞与至少一种其调节ＧＰＲ９１受体活性的能力待设法测定的化合物接触； ｃ．监测所述细胞以获得调节所述受体活性的化合物。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：李康，王申戊，胡光辉，姚正彬，
申请(专利权)人：唐纳士公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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