本发明专利技术基于ζＰＫＣ在关节炎病人组织中的表达比正常个体中的表达增加这一发现。因此，基于关节炎组织中增加的ζＰＫＣ基因表达，本发明专利技术提供了在患者中诊断、预测和监测关节炎病程的方法。本发明专利技术还提供了用作治疗关节炎药物的抑制ζＰＫＣ表达的化合物，包括但不限于抑制性多核苷酸和多肽，小分子和肽抑制剂。另外，本发明专利技术提供了这样的药物的药物制剂和给药途径，以及评估其疗效的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本申请要求申请日为2003年5月8日的美国临时申请No.60/468,987和申请日为2003年7月31日的美国临时申请No.60/491,274的利益，两者全部引入本申请作为参考。 专利技术
技术介绍
领域本专利技术涉及在受试者中诊断、预测以及监测关节炎病程的方法，此些方法基于关节炎组织中增加的ζ蛋白质激酶C(ζPKC)基因表达。本专利技术还提供了抑制ζPKC表达的化合物，该化合物可用作治疗关节炎的药物。
技术介绍
ζ蛋白质激酶C(ζPKC)是作为一种重要的信号转导成分出现的。不断有文献表明ζPKC与NF-κB和AP-1途径有关。例如，一种ζPKC敲除小鼠完全可以存活，但是表现出使人联想到肿瘤坏死因子(TNF)受体和淋巴毒素受体敲除的表型，伴有NF-κB依赖性转录活性的严重损伤(Leitges等.(2001)Mol.Cell8771-80)。其他研究者(Lallena等.(1999)Mol.Cell.Biol.192180-88)已经证明ζPKC在活化IκB，并从而活化NF-κB中的作用。NF-κB活化与许多炎性疾病有关，包括哮喘，肠炎和关节炎(参见Roshak等.(2002)Curr.Opin.Pharmacol.2316-21)。已经表明，NF-κB在各种细胞类型分泌各种基质金属蛋白酶(MMPs)的过程中发挥重要作用(Bond等.(1998)FEBS Lett.43529-34；Bond等.(1999)Biochem.Biophys.Res.Commun.264561-67；Bond等.(2001)Cardiovasc.Res.50556-65)。在关节炎中，细胞因子例如TNF和白介素-1(IL-1)增加MMPs和其他降解酶的产生和合成，使其超过能够自然控制的水平从而引发疾病(参见Smith(1999)Front.Biosci.4D704；Mort和Billington(2001)Arthritis Res.3337-41；Catterall和Cawston(2003)Arthritis Res.Ther.512-24)。到目前为止，还没有直接的证据证明ζPKC与关节炎相关。然而如果ζPKC在受侵袭的组织中被表达，这可能有助于解释TNF和IL-1的降解作用，该作用是通过经NF-κB将这些因子的细胞外受体结合转化为降解酶合成的细胞内诱导而进行的。在这点上，ζPKC抑制剂可以阻断TNF和IL-1的作用，从而用于治疗关节炎和其他炎性疾病。这种ζPKC的抑制剂比传统的细胞因子和MMP抑制剂更有效，因为它们最终应当影响不止一个靶标(Roshak，同前；Smith，同前)。这种ζPKC抑制剂也应当比NF-κB抑制剂更安全，因为ζPKC只是NF-κB途径的众多效应物中的一个。专利技术概述本专利技术基于ζPKC在关节炎病人组织中的表达比正常个体中的表达增加这一发现。本专利技术提供了抑制ζPKC在关节炎组织中表达的化合物，包括但不限于抑制性多核苷酸和多肽、小分子和肽抑制剂。本专利技术还提供基于关节炎组织中异常的ζPKC基因表达，从而诊断、预测和监测关节炎病程的方法，以及使用治疗这种异常表达的药物的治疗方法。另外，本专利技术提供了这种药物的药物制剂和给药途径，以及评估这种药物的疗效的方法。在一个实施方案中，本专利技术提供了一种用于在受试者中诊断关节炎的方法，包括以下步骤检测取自受试者的样品中的ζPKC基因产物的测试量，然后将该测试量与对照样品中ζPKC基因产物的正常量进行比较，如果发现测试量高于正常量，则得到诊断关节炎的阳性指征。在一个优选实施方案中，样品包括软骨细胞。在其它一些优选实施方案中，ζPKC基因产物包括RNA或cDNA，或者是ζPKC多肽。在另外一个实施方案中，本专利技术提供了一种用于在受试者中预测关节炎的方法，包括以下步骤检测取自受试者的样品中的ζPKC基因产物的测试量，然后将该测试量与对照样品中ζPKC基因产物的预测量进行比较，测试量与预测量的比较提供了预测关节炎的指征。在一个优选实施方案中，样品包括软骨细胞。在其它一些优选实施方案中，ζPKC基因产物包括RNA或cDNA，或者是ζPKC多肽。在另外一个实施方案中，本专利技术提供了一种用于监测受试者关节炎病程的方法，包括以下步骤在第一时间检测取自受试者的样品中的ζPKC基因产物的第一测试量，在其后的第二时间检测取自受试者的样品中的ζPKC基因产物的第二测试量，比较第一测试量和第二测试量，如果与首次测试试相比，ζPKC基因产物的第二测试量增加，表明关节炎加重；如果与第一测试量相比，ζPKC基因产物的第二测试量降低，表明关节炎减轻。在一个优选实施方案中，样品包括软骨细胞。在其它一些优选实施方案中，ζPKC基因产物包括RNA或cDNA，或者是ζPKC多肽。在另外一个实施方案中，本专利技术提供了一种在受试者中评估关节炎治疗疗效的方法，包括以下步骤在治疗前检测取自受试者的样品中的ζPKC基因产物的第一测试量，在治疗后检测取自受试者的样品中的ζPKC基因产物的第二测试量，比较第一测试量和第二测试量，如果与第一测试量相比，ζPKC基因产物的第二测试量降低，表明关节炎的治疗是有效的。在一个优选实施方案中，样品包括软骨细胞。在其它一些优选实施方案中，ζPKC基因产物包括RNA或cDNA，或者是ζPKC多肽。在另外一个实施方案中，本专利技术提供了一种筛选能够在受试者中抑制关节炎的化合物的方法，包括以下步骤提供含有等量ζPKC的第一样品和第二样品，将第一样品和该化合物接触，然后相对于没有接触过该化合物的第二样品中ζPKC的活性，测定第一样品中ζPKC的活性是否降低，如果第一样品中ζPKC的活性比第二样品中的低，表明这种化合物能够在受试者中抑制关节炎。在一个优选实施方案中，这种化合物抑制软骨细胞中的ζPKC活性。在另外一个优选实施方案中，这种化合物是小分子。在其它优选实施方案中，通过使用酶促蛋白激酶测定法，软骨细胞沉淀测定法，测量蛋白聚糖降解的测定法，或者测量NF-κB活性的测定法来测定ζPKC的活性。在另外一个实施方案中，本专利技术提供了一种筛选能够在受试者中抑制关节炎的化合物的方法，包括以下步骤提供含有等量的表达ζPKC的细胞的第一样品和第二样品，将第一样品和该化合物接触，然后相对于没有接触过该化合物的第二样品中ζPKC基因产物的表达，测定第一样品中ζPKC基因产物的表达是否降低，如果第一样品中ζPKC基因产物的表达比第二样品中的低，表明这种化合物能够在受试者中抑制关节炎。在一个优选实施方案中，这种化合物抑制软骨细胞中ζPKC基因产物的表达。在另外一个优选实施方案中，这种化合物是小分子。在其它优选实施方案中，通过使用酶促蛋白激酶测定法，软骨细胞沉淀测定法，测量蛋白聚糖降解的测定法，或者测量NF-κB活性的测定法来测定ζPKC基因产物的表达。在另外一个实施方案中，本专利技术提供了一种治疗受试者关节炎的方法，包括给予受试者抑制受试者中的ζPKC活性的化合物。在一个优选实施方案中，这种化合物抑制软骨细胞中ζPKC的活性。在另外一个优选实施方案中，这种化合物是反义多核苷酸。在另外一个优选实施方案中，这种化合物是小分子。在另外一个优选实施方案中，这种化合物是siRNA分子。在一个更优选的实施方案中，siRNA分子选自如附图说明本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于在受试者中诊断关节炎的方法，包括以下步骤：检测取自受试者的样品中的ζＰＫＣ基因产物的测试量；和将该测试量与对照样品中ζＰＫＣ基因产物的正常量进行比较，其中，如果发现测试量高于正常量，则提供了诊断关节炎的阳性指征。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：ER拉瓦列，LA克林斯雷斯，M阿莱，
申请(专利权)人：WYETH公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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