本发明专利技术是一种化学发光试剂的制备新方法，特别是４－甲氧基－４－（３－磷酸酰苯基）螺［１，２－二氧环乙烷－３，２’－金刚烷］，二钠盐（以下简称ＡＭＰＰＤ）的合成新方法。该方法以３－二甲基叔丁基硅氧基－１－（１’－磷酸二乙酯基）－苄甲醚及２－金刚烷酮为原料，通过Ｗｉｔｔｉｇ反应，制备得到［（３－二甲基叔丁基硅氧基苯基）甲氧基甲叉烷］金刚烷，在通过光氧化得到［（３－磷酸苯基）］甲氧基甲叉烷］金刚烷（ＡＭＰＰＤ），可广泛用作化学发光免疫分析的发光底物。
【技术实现步骤摘要】
,2－二氧环乙烷－3,2'－金刚烷 ...的制作方法
本专利技术涉及化学发光试剂的制备新方法，特别是4-甲氧基-4-(3-磷酸酰苯基)螺，二钠盐(以下简称AMPPD)的合成新方法。AMPPD是碱性磷酸酶的化学发光底物，在适宜的缓冲液中，随着酶的催化水解作用，AMPPD分解成AMP-D，后者发出强度很高的光信号，其发光的速度取决于碱磷酶的浓度。当碱磷酶偶合到杂交的探针时，便可以通过此系统检测到杂交分子的存在量。目前已广泛用作化学发光免疫分析的发光底物，具有最高的检测灵敏度、适用于检测各种分子量的物质、稳定的发光底物、检测结果稳定，重复性好、检测线性范围宽、不需要特殊的发光底物-抗原/抗体连接物、方便，容易使用、可应用多种分析模式(夹心，竟争，抗体检测等)等优点，已在医学上推广使用。但由于其价格较高，限制了其大规模的发展使用。价格高的主要原因是该物质制备较为困难，合成工艺复杂。目前其制备主要有两条路线，第一种是通过2-金刚烷酮与3-羟基苯甲酸甲酯在金属化合物的催化下形成双键而得到关键中间体取代苯基甲氧基甲叉基金刚烷，然后通过常规的光氧化反应得到AMPPD(见式一)(美国专利，专利号5582980；中国专利，专利号CN 1040980A)，该方法收率较低，分离纯化较为困难。第二种方法是通过金刚烷的氰化物与取代苯的格式试剂形成双键而得到关键中间体取代苯基甲氧基甲叉基金刚烷，然后通过常规的光氧化反应得到AMPPD(见式二)(美国专利，专利号4956477；美国专利，专利号6417380；美国专利，专利号6124478；欧洲专利，专利号0582317等)，该方法流程太长，要用到剧毒的氰化物。 (式一) (式二)本专利技术的目的是提供一种化学发光试剂AMPPD的合成新方法。通过Wittig反应来形成双键而得到关键中间体取代苯基甲氧基甲叉基金刚烷，然后通过常规的光氧化反应得到AMPPD。本专利技术是以3-二甲基叔丁基硅氧基-1-(1’-磷酸二乙酯基)-苄甲醚及2-金刚烷酮为原料，通过Wittig反应，制备得到金刚烷，在通过光氧化得到AMPPD，反应流程如下(式三)本专利技术的实施例如下一、3-二甲基叔丁基硅氧基-1-(1’-磷酸二乙酯基)-苄甲醚的制备将374克(1mol)上述产物溶解再500毫升乙醇和50水的混合溶剂中，搅拌溶解，加入80克(1.43mol)氢氧化钾，搅拌溶解得到澄清溶液。0-5摄氏度下滴加172.8克(1.2mol)碘甲烷，室温下搅拌2小时后，再60摄氏度下反应12小时，反应完后，加水1000毫升，用甲乙醚萃取，合并有机相，依次用3N的氢氧化钠溶液500毫升，水洗到PH7，干燥过滤、浓缩、重结晶得到产物310克，产率为80％，1H NMR((300MHz，CDCl3)δ0.08(s，6H)，0.9(s，9H)，1.1(t，6H)，3.3(s，3H)，4.1(q，4H)，4.1(s，1H)，6.6-7.1(m，4H).)。二、金刚烷的制备将388克(1mol)上述产物和150克(1mol)的金刚烷酮依次加入到2000毫升的三口圆底烧瓶中，加入1000毫升的干燥的四氢呋喃，再加入51克的三乙胺，搅拌溶解，升温回流24小时后，TLC检测反应结束，将反应液转移到圆底烧瓶中，减压浓缩除去三乙胺和溶剂得到产物234克，产率为61％，1H NMR(300MHz，CDCl3)(δ0.08(s，6H)，0.9(s，9H)，3.5(s，3H)，4.1(s，1H)，6.6-7.1(m，4H).)。 (式三)三、金刚烷的制备将38.4克(0.1mol)第二步产物溶解在500毫升的干燥的四氢呋喃中，然后滴加1M的四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液100毫升，整个体系在室温下搅拌30分钟，然后倒入饱和的碳酸氢钠溶液1000毫升中，溶液用二氯甲烷500毫升萃取，有机相再用水500毫升洗，无水硫酸钠干燥后减压浓缩得到产品21.6克，产率为80％，1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.64-1.96(M，12H)，2.65(S，1H)，3.24(S，1H)，3.32(S，3H)，6.7-7.3(M，4H)。四、金刚烷二钠盐的制备将第三步产物(500g，1.58mol)溶解在5ml无水吡啶(用碱性氧化铝干燥)中，将该溶液慢慢加到由三氯氧磷(1什，10.7mol)和5什吡啶组成的冷却混合物，其加料速度应将反应温度维持在5℃下，三十分钟后，终止反应，并将二氯磷酰化产物倒在由20kg冰和1什10N氢氧化钠组成的混合物上，将该混合物移至分液漏斗中，用5×30什CH2Cl2进行洗涤，在冰箱内过夜冷却后，从水溶液中沉淀出产物，先用3×10什冷水洗涤固体产物，然后将该白色固体在减压下干燥，得到360g产品，1HNMRδ1.67-1.83(m，12H)，2.50(s，1H)，3.04(s，1H)，3.19(s.3H)，6.7-7.2(m，4H)。五、4-甲氧基-4-(3-磷酸酰苯基)螺，二钠盐(AMPPD)盐的制备采用1000瓦的高压钠灯，在300ml H2O/P-二噁烷(1∶1V/V)中，于10℃，将第三步产物20g溶解，通氧气进行光氧化反应，反应完后蒸出溶剂得初产品，重结晶后得产品16g。1HNMRδ0.91-1.70(m，12H)，2.08(s，1H)，2.80(s，1H)，3.07(s，3H)，7.00-7.26(m，4H)。权利要求1.一种化学发光试剂的制备新方法，特别是4-甲氧基-4-(3-磷酸酰苯基)螺，二钠盐(以下简称AMPPD)的合成新方法。该方法通过Wittig反应来形成双键而得到关键中间体取代苯基甲氧基甲叉基金刚烷，然后通过常规的光氧化反应得到AMPPD。2.根据权利要求1所述的化学发光试剂AMPPD的制备新方法，其特征在于以3-二甲基叔丁基硅氧基-1-(1’-磷酸二乙酯基)-苄甲醚及2-金刚烷酮为原料，通过Wittig反应，制备得到金刚烷，在通过光氧化得到甲氧基甲叉烷]金刚烷(AMPPD)，其制备技术路线如下全文摘要本专利技术是一种化学发光试剂的制备新方法，特别是4－甲氧基－4－(3－磷酸酰苯基)螺，二钠盐(以下简称AMPPD)的合成新方法。该方法以3－二甲基叔丁基硅氧基－1－(1’－磷酸二乙酯基)－苄甲醚及2－金刚烷酮为原料，通过Wittig反应，制备得到金刚烷，在通过光氧化得到甲氧基甲叉烷]金刚烷(AMPPD)，可广泛用作化学发光免疫分析的发光底物。文档编号G01N33/53GK1876663SQ20051002105公开日2006年12月13日 申请日期2005年6月9日 优先权日2005年6月9日专利技术者袁明龙, 杜碧林, 朱延新, 郑玲 申请人:四川琢新生物材料研究有限公司本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种化学发光试剂的制备新方法，特别是４－甲氧基－４－（３－磷酸酰苯基）螺［１，２－二氧环乙烷－３，２’－金刚烷］，二钠盐（以下简称ＡＭＰＰＤ）的合成新方法。该方法通过Ｗｉｔｔｉｇ反应来形成双键而得到关键中间体取代苯基甲氧基甲叉基金刚烷，然后通过常规的光氧化反应得到ＡＭＰＰＤ。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：袁明龙，杜碧林，朱延新，郑玲，
申请(专利权)人：四川琢新生物材料研究有限公司，
类型：发明
国别省市：90[中国|成都]
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