本发明专利技术涉及为了新孢子虫病的诊断和预防其的接种的目的的ＮｃＳＡＧ４基因、所述基因的信使ＲＮＡ、基于其核苷酸序列或其任何片段设计的寡核苷酸、和由此编码的ＮｃＳＡＧ４蛋白、或其任何重组形式、含有其的表达载体和宿主细胞。本发明专利技术还涉及其作为犬新孢子虫慢殖子阶段特异性标志、用于分析发病机理或抗中间宿主中慢性感染确立的疫苗有效性的用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术立足于动物健康及其相关领域，如这个描述性报道的标题所表示，涉及由原虫寄生虫犬新孢子虫(Neospora caninum)引起的疾病的诊断、发病机理分析和预防。更具体而言，本专利技术涉及对应于犬新孢子虫NcSAG4基因的多核苷酸分子、其信使RNA和由其编码的抗原NcSAG4，它是慢殖子阶段的一种特异性蛋白质，以及寡核苷酸、重组载体、转化的宿主细胞和重组表达的蛋白、它作为该疾病诊断试剂的用途、除了其生产疫苗的价值之外，它在用于研究该疾病发病机理的分子技术发展中的应用。
技术介绍
新孢子虫病(Neosporosis)犬新孢子虫是属于顶复(Apicomplexa)门的一种原虫寄生虫，顶复门包括其它值得注意的寄生虫病原体如与它密切相关的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)。自1989年以来犬新孢子虫已被描述为引起牛流产和新生仔畜死亡的媒介(Thilsted and Dubey.1989.J.Vet.Diagn.Invest.1，205-209)，尽管它可以感染各种各样的哺乳动物物种(Buxton等人2002，Trends Parasitol.18，546-552)。牛新孢子虫病被认为是一种全世界分布的寄生虫病且是研究它的各个国家中繁殖失败的最常见原因之一(Trees等人1999.Int.J.Parasitol.29，1195-1200；Anderson等人2000，Anim，Reprod.Sci.60-61，417-431)，包括西班牙(González等人1999.Vet.Rec.144，145-150；Pereira-Bueno等人2003.Vet.Parasitol.111，143-152)。妊娠雌性中感染的最重要临床表现是流产，通常发生在妊娠第三和第九个月之间，且最常见大约在5-6个月。出生活着的受侵袭小牛会表现出神经肌肉问题，第一个临床征兆出现在分娩后4-5天，尽管它们可以延迟直至两周。然而最常见，尽管受到慢性感染，但仍生出健康小牛(Dubey and Lindsay，1999.Vet.Parasitol.67，1-59)。此外，新孢子虫病可以侵袭犬，它们的终宿主，在那里它引起多肌炎、脑炎、麻痹并可以引起死亡(Lindsay and Dubey，1989.J.Parasitol.75，163-165；Buxton等人2002.Trends Parasitol.18，546-552)。如同刚地弓形虫一样，犬新孢子虫的生活史包括三个阶段。通过卵囊摄取感染中间宿主的子孢子被终宿主除去。另一方面，速殖子-快速复制型负责感染急性期，具有通过宿主组织传播的作用。当宿主产生免疫时，这个过程结束，然后确立慢性期，寄生虫缓慢增殖，内部含有慢殖子的组织囊肿形成，这在自然和实验感染的几个物种的神经组织(Dubey等人，1988，J.Am.Vet.Med.Assoc.193，1259-1263；Dubey等人1990.J.Am.Vet.Med.Assoc.1971043-1044；Barr等人1992.J.Vet Diagn.Invest.4，365-367；Kobayashi等人2001.J.Parasitol.87434-436)和自然感染的犬和母牛的骨骼肌组织(Peters等人2001.Int.J.Parasitol.31，1144-1148)中已经观察到。这些慢殖子潜伏在组织囊肿中直至再活化(Antony and Williamson.2001.New Zeal.Vet.J.49，42-47；Buxton等人2002.Trends Parasitol.18，546-552)。迄今未知顶复门寄生虫，如刚地弓形虫或犬新孢子虫中速殖子转变为慢殖子和反过来的机制基础，但是已经提示免疫反应可以影响慢性感染动物中感染的潜伏期和再活化(Lyons，等人，2002，Trends Parasitol.18，198-201)。关于该疾病的传播，大多数近来研究提示出生后传播的重要性相对低并提到先天性感染的持久性贯穿一生(Davison等人1999.Int.J.Parasitol.29，1683-1689；Hietala and Thurmond.1999.Int.J.Parasitol.29.1669-1676)。先天性传播起着50％至95％的重要作用(Wouda等人1998.Theriogenology 49，1311-1316；Pereira-Bueno等人2000.inHemphill and Gottstein(Eds.)Int.J.Parasitol.30，906-909)并且看来在该疾病的传播和维持中起着非常重要的作用(Bjrkman等人1996.J.Am.Vet.Med.Assoc.208，1441-1444；Paré等人1996 Can.J.Vet.Res.60，133-139；Anderson等人1997.J.Am.Vet.Med.Assoc.210，1169-1172；Schares等人1998.Vet.Parasitol.80，87-98)。犬新孢子虫抗原关于在犬新孢子虫速殖子与慢殖子之间的抗原组成比较，迄今可以得到的信息非常有限，因为仅进行了一项研究，鉴定了速殖子或两个阶段共有的特异性抗原(Fuchs等人1998.J.Parasitol.84，753-78)，它与在刚地弓形虫中进行的研究形成对照，其中鉴定和表征了几个特异性阶段抗原。犬新孢子虫抗原包括两种表面蛋白，NcSAG1(Hemphill等人1997，Parasitology，115，371-380)-速殖子特异性的，其基因已经被Howe等人克隆(1998.Infect.Immun，66，5322-5328)和NcSRS2(Hemphill等人1996，Parasitol.Res.82，497-504)-在速殖子和慢殖子中共同表达。犬新孢子虫的两种表面蛋白最近在鼠模型中作为亚单位疫苗被试验(Canna s等人2003a.Parasitology 126(Pt.4)，303-312)。近来已鉴定了在该寄生虫两个阶段中都表达的两种微丝蛋白-NcMIC3(Sonda等人2000.Mol.Biochem.Parasitol 108，39-51)和NcMIC1(Keller等人2002.Infect.Immun.70，3187-3198)。此外，称作NcMIC10和NcMIC11的新孢子虫的两个序列已经包括在基因库中，可能编码微丝的两种蛋白，因为它们的序列分别与编码刚地弓形虫TgMIC10和TgMIC11的蛋白的序列具有高度可比性。已经被克隆的其它基因是NcGRA6和NcGRA7，它们编码犬新孢子虫速殖子的致密颗粒的蛋白，基于此开发了ELISA用于该疾病的诊断(Lally等人1996.Clin.Diagn.Lab.Immunol.3，275-279)。除了这些蛋白之外，已经鉴定和表征了来自致密颗粒的29和67kDa的分别被称作NcNTP酶-I(Asai等人1998Exp.Parasitol.90，277-285)和NcGRA2(Ellis等人2000.Parasitology 120(Pt 4)，383-390)的其它蛋白。另一方面本文档来自技高网...
【技术保护点】
分离自犬新孢子虫（Ｎｅａｓｐｏｒａｃａｎｉｎｕｍ）且以ＳＥＱＩＤＮＯ：９表征的６０１个核苷酸的多核苷酸分子，相应于ＮｃＳＡＧ４基因，包含编码１７３个氨基酸和以ＳＥＱＩＤＮＯ：１０表征的ＮｃＳＡＧ４抗原性蛋白的５２２个核苷酸的ＯＲＦ。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：LM奥尔特加莫拉，A费尔南德斯加西亚，
申请(专利权)人：马德里孔普卢屯大学，
类型：发明
国别省市：ES[西班牙]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。