免疫学的定量方法和试剂技术

本发明专利技术提供将配体以固相复合物形式固定，通过免疫学的定量方法对固相复合物中配体的浓度进行测定的方法，该方法包括下面（１）、（２）步骤：（１）使配体、针对配体的第１标记的特异性结合物质和针对配体的第２标记的特异性结合物质在溶剂中接触，使第１标记的特异性结合物质－配体－第２标记的特异性结合物质复合物生成，以及（２）使上述复合物与担载了与第１标记的特异性结合物质的该第１标记物质特异性结合的物质的担载固相粒子接触，使上述复合物和上述担载固相粒子通过第１标记物质结合的固相复合物生成。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及到免疫学的定量方法和试剂。更详细讲涉及到可在短的反应时间内实施的高灵敏度的免疫学定量方法和试剂。
技术介绍
作为现有不均一体系免疫学的测定方法，特开平7-306204号公报中公开了使结合了配体的微粒分散于液体中，滴到多孔基质上，被基质捕捉，将含有测定对象的检体滴到捕捉了上述微粒的多孔基质上，再向上面滴下结合了标记物的标记配体，形成免疫复合物，然后对该免疫复合物中的该标记物进行测定的方法免疫测定方法。该方法，如上所述包括于多孔基质上进行2次形成免疫复合物的不均一反应的步骤，由于免疫复合物的形成不充分，存在着灵敏度不能提高的难点。特开昭60-250257号公报公开了将针对配体特异的结合物质固定于固相，使它与供试验的样品反应，反应生成生物素-标记配体-特异的结合物质，再与进行了标记的抗生物素反应，将未反应试剂分离，然后测定固相或未反应试剂中存在的标记，检测存在于供试验的样品中配体量的免疫学的测定方法。在上述方法中，由于针对配体的特异性结合物质被固定于固相，以下的2个反应，即与对生物素标记的配体的特异性结合物质的反应和与进行了标记的抗生物素的反应无论那一个反应都是在不均一体系进行的，所以与特开平7-306204号公报记载的方法同样也存在着免疫复合物的形成不充分、灵敏度提高不充分的难点。另外，特开平4-318462号公报公开了在玻璃纤维膜过滤器上准备与被测定物质特异反应的第1物质结合的多孔基质，然后在其上面依次供给含有被测定物质的样品、结合了可检测的信号发生物质的与被测定物质或第1物质特异反应的第2物质以及洗涤液，对于残存在多孔基质上的免疫复合物测定信号发生物质，求被测定物质的量的固相生物学的特异反应测定方法。上述方法也包括于玻璃纤维过滤器上进行2次形成免疫复合物的不均一反应的步骤，所以也存在着与特开平7-306204号公报的方法同样的难点。另外在特开2001-235471号公报中也公开了虽然反应步骤与特开平4-318462号公报不同，但也包括在多孔过滤器上进行用于形成免疫复合物的不均一反应的步骤的免疫学测定方法。另外，上述方法中的玻璃纤维过滤器等多孔基质在使用时，为了抑制非特异反应，预先用封闭液进行了处理，由于目前已知的封闭液是以磷酸缓冲生理盐水为基础做成的，所以对于某一种类的免疫学的定量方法容易引起非特异反应，由于这个原因，再现性也变差。还有，为了在象玻璃纤维过滤器那样的过滤器上捕捉免疫复合物，要实施由过滤器的下方进行强制性抽滤的方法(参照特开平6-148184号公报、特开平6-258322号公报、日本专利第2935965号公报和日本专利第3134231号公报)。然而，如果使用现有的抽滤方法，由于液体急速通过过滤器，免疫复合物难于被过滤器确实捕捉或要想防止液体急速通过，需要额外设置压力传感器等。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供在短的反应时间内可高灵敏度地进行免疫学的定量方法。本专利技术的另外目的在于提供如下的定量方法通过于均一体系中使配体和针对配体特异的结合物质反应，使作为配体和特异的结合物质的反应生成物的复合物生成，然后通过特异的结合物质固定于固相粒子，使上述反应在短时间内充分进行，可以达到充分灵敏度的免疫学的定量方法。本专利技术的另外目的在于提供如下的定量方法通过用多孔纤维基质捕捉用上述方法被固定于固相粒子的配体，提供可以以确实捕捉、而且容易检测配体存在量的状态进行的免疫学的定量方法。本专利技术的另外目的在于提供可以不依赖于测定对象的配体的种类，预先制备用于固定上述复合物的固相粒子，因此可适用于各种配体的定量的免疫学的定量方法。本专利技术的另外目的在于提供含有不需要压力传感器等复杂的机构或抽滤压力的微调整的抽滤结构的免疫学的定量方法。本专利技术的另外目的在于提供含有使液体平稳地滤过基质，可确实捕捉固相免疫复合物的抽滤机构的免疫学的定量方法。本专利技术的另外目的在于提供即使在过滤基质的下方不设置吸水层，也可以顺利地进行过滤，因此可防止由于吸水层含有免疫反应残余物引起的误检测的含有抽滤结构的免疫学的定量方法。本专利技术的另外目的在于提供不在过滤基质上进行免疫反应，因此可防止免疫反应成分对过滤基质的非特异吸附的免疫学的定量方法。本专利技术的另外目的在于提供可在本专利技术的上述免疫学的定量方法中使用的免疫学的定量试剂。本专利技术的另外目的在于提供适合本专利技术的免疫学的定量方法的免疫学的封闭液。本专利技术的其它目的和优点通过以下说明可以阐明。根据本专利技术，本专利技术的上述目的和优点，第1可以通过将配体以固相配体复合物形式固定，通过免疫学的定量方法对固相复合物中的配体浓度进行测定的方法(以下有时称为第1方法)达到，其特征是在该方法中，(1)使配体、针对配体的第1标记的特异性结合物质和针对配体的第2标记的特异性结合物质在溶剂中接触，使第1标记的特异性结合物质-配体-第2标记的特异性结合物质复合物生成，(2)使上述复合物与担载了与第1标记的特异性结合物质的该第1标记物质特异性结合的物质的担载固相粒子接触，使上述复合物和上述担载固相粒子通过第1标记物质结合的固相复合物生成，以及 (3)在配体的浓度测定中使用上述步骤(2)生成的固相复合物。根据本专利技术，本专利技术的上述目的和优点，第2可以通过免疫学的定量方法(以下有时称为第2方法)达到，作为用于配体的测定的免疫学的定量方法，其特征是(1)使配体、针对配体的第1标记的特异性结合物质和针对配体的第2标记的特异性结合物质在溶剂中接触，使第1标记的特异性结合物质-配体-第2标记的特异性结合物质复合物生成，(2)使上述复合物与担载了与第1标记的特异性结合物质的该第1标记物质特异性结合的物质的担载固相粒子接触，使上述复合物和上述担载固相粒子通过第1标记物质结合的固相复合物生成，以及(3)将上述固相复合物捕捉到多孔纤维基质中，生成固相复合物捕捉基质，以及(4)对于上述固相复合物捕捉基质，测定第2标记的特异性结合物质的该第2标记物质的存在量。根据本专利技术，本专利技术的上述目的和优点，第3可以通过将配体以固相配体复合物形式固定，通过免疫学的定量方法测定该固相复合物中的配体浓度的方法(以下有时称为第3方法)，其特征是在该方法中包括(1)使配体、针对配体的第1标记的特异性结合物质和对第1标记的特异性结合物质的第2标记的特异性结合物质在溶剂中接触，使第1标记的特异性结合物质-配体复合物和第1标记的特异性结合物质-第2标记的特异性结合物质复合物的混合物生成，(2)使上述复合物混合物与担载了与第1标记的特异性结合物质的该第1标记物质特异性结合的物质的担载固相粒子接触，使上述各个复合物和上述担载固相粒子通过第1标记物质结合的固相复合物混合物生成，以及(3)在配体的浓度测定中使用上述步骤(2)生成的固相复合物混合物。另外，根据本专利技术，本专利技术的上述目的和优点，第4可以通过免疫学的定量方法(以下有时称为第4方法)达到，作为用于配体测定的免疫学的定量方法，其特征是(1)使配体、针对配体的第1标记的特异性结合物质和对第1标记的特异性结合物质的第2标记的特异性结合物质在溶剂中接触，使第1标记的特异性结合物质-配体复合物和第1标记的特异性结合物质-第2标记的特异性结合物质复合物的混合物生成，(2)使上述复合物混合物与担载了与第1标记的特异性结合物质本文档来自技高网...

【技术保护点】
测定方法，是将配体以固相复合物形式固定，通过免疫学的定量方法测定该固相复合物中配体的浓度的方法，其特征是：在该方法中，　　　　（１）使配体、针对配体的第１标记的特异性结合物质和针对配体的第２标记的特异性结合物质在溶剂中接触，使第１标记的特异性结合物质－配体－第２标记的特异性结合物质复合物生成，　　　　（２）使上述复合物与担载了与第１标记的特异性结合物质的该第１标记物质特异性结合的物质的担载固相粒子接触，使上述复合物和上述担载固相粒子通过第１标记物质结合的固相复合物生成，以及　　　　（３）在配体的浓度测定中使用上述步骤（２）生成的固相复合物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：川野充康，岩本久彦，
申请(专利权)人：AT株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]