方法技术

本发明专利技术提供了用于测定样品中金属标记物质的存在或含量的方法。在该方法中，使样品中金属标记物质的金属形成可溶性电化学活性复合物，然后用电化学方法测量该可溶性电化学活性复合物以提供金属标记物质的存在或含量的指示。可溶性电化学活性复合物相对于样品中存在的或可能存在的会与所述金属形成不溶性和／或无电化学活性复合物的部分是稳定的。可通过将待测分析物与金属标记结合配对体如抗体或其抗原结合片段结合形成金属标记物质。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于测定金属标记物质的存在或含量的和装置。特别地，然而并非唯一地，本专利技术涉及用于检测包括感兴趣的分析物的物质或特异性附着于感兴趣的分析物的物质的和装置。与标记结合的特异性结合物质如抗体在分析物检测中通常用作快速检测用试剂。这种检测法之一在EP-A-0291194中有述。在该检测法中，对横向流动多孔载体装备对感兴趣的分析物是特异性的可移动微粒标记抗体。其另外还装备有对分析物是特异性的但是固定在检测区域内的第二抗体。分析物结合可移动的标记抗体，形成第一复合物，第一复合物随后在检测区域内被固定的第二抗体捕获。检测区域中标记的存在程度提供了样品中分析物的含量的指示。标记可以是微粒物质如金，并且其在检测区域内的存在可通过目测法或光学法检测。另一种用于检测被标记的特异性结合物质的在美国专利申请No 20030186274中公开。在该中，金属标记结合物质的存在程度或存在通过在氧化剂如强酸存在下溶解标记以形成金属离子而进行检测。然后，所述离子在适当的负电位的存在下通过电化学还原沉积在电极表面上。然后改变电位以将金属再次氧化，然后使其返回溶液，产生电流响应。该电流响应的强度提供了在电极表面沉积的金属离子量的指示，和由此的最初存在的标记的量。这类电分析技术被称为溶出伏安法(stripping voltammetry)并且可用于测量较低量(例如百万分之一或较低)的金属离子。可使用该来检测对标记结合物质具有结合特异性的任何分析物的存在或程度。US2003018627中使用的标记的例子是金。然而，在许多方面，认为银是供电化学检测使用的更好标记，这主要是因为银比金更容易氧化，从而形成银离子。例如，从银形成银离子所需的氧化剂比从金形成金离子所需的氧化剂较弱，因此更适用于诊断试剂盒。虽然银在US2003018627中以可被检测到的金属粒子的形式被公开，但是其中所述的不能用于生物样品中的银和类似金属的电化学检测。这是因为这些金属的氧化形式将与生物样品如血液、血浆和尿中发现的物质反应，形成不可溶性的无电化学活性的复合物。例如，尿中氯离子的浓度通常为150mM，因此通过氧化形成的任何银离子将立即作为AgCl沉淀，并将因此阻碍银在电极表面被氧化。同样地，溴离子和含硫物质如半胱氨酸还存在于生物样品中，将与银离子形成不溶性的无电化学活性的复合物。在第一方面，本专利技术提供了用于测定样品中金属标记物质的存在或含量的，所述包括使所述样品中金属标记物质的金属形成可溶性电化学活性复合物，该可溶性电化学活性复合物相对于所述样品中存在的或可能存在的会与所述金属形成不溶性和/或无电化学活性复合物的部分是稳定的；和用电化学测量形成的可溶性电化学活性复合物以提供金属标记物质的存在或含量的指示。在本专利技术中，金属的电化学测量通过形成该金属的可溶性电化学活性复合物进行。用这种，防止金属与样品中的试剂或部分反应，所述的试剂或部分将导致形成不溶性和/或无电化学活性的复合物。因此，形成的复合物的电化学测量可方便地和容易地进行，而无需除去否则会使金属不能被电化学测量所利用的这些部分。虽然US2003018627公开了以其所公开生成的金属离子可以是复合形式，这样作的目的据称是将非电活性金属离子转变成可进行检测的电活性化合物，并从而形成可吸附到电极的更具疏水性的部分。这与本专利技术是相对立的，在本专利技术中，电活性金属离子被转变成复合物以防止所述金属离子与样品中存在的部分形成不溶性和/或无电化学活性的复合物。在一个方案中，通过氧化所述金属，然后使形成的金属离子与适当的复合剂反应而形成电化学活性复合物。这可通过在适当的复合剂的存在下氧化所述金属而实现。本专利技术中使用的金属标记可以是银，尽管也可使用其它金属如铅、镉、铜、铊、汞和锌。与金相比，选择常规的和有利的微粒金属-银-可容易地在铂或碳电极上形成可测量的电化学响应。这使得可使用以方便和廉价方式制备的碳电极。另外的优点是所述的或各个氧化剂，当使用时，与碳电极(当存在时)一起，用于提供可进行电位参考的稳定参考电位。这避免了构建单独电极的需要，诸如例如目前通常使用的银/氯化银电极。在一个方案中，金属标记是微粒标记，如银溶胶(silver sol)。提供微粒标记的优点是单一标记可被氧化以提供极大量的金属离子，如106个或更多，根据溶胶尺寸而定，并因此提供更大的灵敏性。金属溶胶是市售的并且可通过如EP291194中所述的已知与结合试剂相结合。使用银比使用金更方便之处在于银离子所需的氧化条件比较贵重金属如金所需的氧化条件的苛刻性更低。例如，金属金到离子金(AuCl4)的氧化要求浓硝酸和浓盐酸的混合物、或次氯酸钠和盐酸的混合物。相比之下，为了将银粒子氧化成银离子，可使用过氧化物、三价铁离子和铁氰化物作为氧化剂。该氧化还可在更有利的pH值如3和7之间进行。在本专利技术中，金属标记形成可通过电化学进行检测的电化学活性复合物。本文使用的“电化学活性”物质是指可经历一个或多个电子的获得或缺失的离子、中性化合物或复合物。电化学活性复合物的作用是防止金属与样品中的将形成不能通过电化学检测到的不溶性和/或无电化学活性复合物的物质发生反应。例如，银离子将与卤化物如氯化物反应以形成不溶性盐，或与含硫物质如半胱氨酸、谷胱甘肽、半胱氨酰基甘氨酸和其它氢硫基化合物反应以形成无电化学活性的银离子复合物。因此，电化学活性复合物在这些物质的存在下必须是稳定的。本领域的技术人员可以理解的是，电化学活性复合物与金属(或金属离子)和复合物质将处于动态平衡。金属或金属离子还与样品中存在的能形成无电化学活性和/或不溶性复合物的部分处于平衡状态。因此，原则上，以上全部物质将在某种程度上存在。然而，这些平衡的位置将至少在某种程度上根据能形成可溶性电化学活性复合物的复合物质的含量、样品中能与金属或金属离子形成不溶性和/或无电化学活性复合物的物质的含量和金属或金属离子的含量而定。因此，术语“稳定的”是指其中电化学活性复合物优先形成并且其中无电化学活性和/或不溶性复合物的含量相对于电化学活性复合物的量是微不足道的情况。无电化学活性和/或不溶性复合物的存在水平对测量结果具有无关紧要的作用。复合物质的初始含量越大，则平衡更倾向于向可溶性电化学活性复合物的形成方向移动，并因此将存在较低量的金属或金属离子。为此，提供过量的复合物质以确保优先形成电化学活性复合物，而无论样品中能与所述金属形成不溶性和/或无电化学活性复合物的部分的含量如何。本专利技术适用于生物样品，包括所有可得自哺乳动物体的液体，包括例如血液、血浆、尿液、淋巴液、胃液、胆汁、血清、唾液、汗液和脊髓液及脑液。另外，体液可经过处理(如血清)或未经过处理。从主体获得样品的是本领域技术人员已知的。生物样品可以得自己经过处理以提供液体样品的固体样品如组织。本专利技术还适于测量其它液体，包括工业或环境液体，如含有大量能与金属形成不溶性和/或无电化学活性复合物的物质的废水或海水。样品可以是植物来源。当待测样品含有蛋白质部分时，可添加碘代乙酰胺以与蛋白质中的硫醇反应形成硫酯。这防止了金属离子通过硫醇基团与蛋白质反应从而不能形成可溶性电化学活性复合物。如上所述，可通过氧化所述金属，然后使形成的金属离子与适当的复合剂反应而形成电化学活性复合物。可使用本文档来自技高网...

【技术保护点】
测定样品中金属标记物质的存在或含量的方法，该方法包括：　　　　使样品中金属标记物质的金属形成可溶性电化学活性复合物，该电化学活性复合物相对于样品中存在的或可能存在的会与所述金属形成不溶性和／或无电化学活性复合物的部分是稳定的；和　　　　用电化学方法测量形成的复合物以提供金属标记物质的存在或含量的指示。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：布赖恩杰弗里伯奇，卡米拉索非亚福斯滕，阿莱娜卡比尔，罗伯特安德鲁波特，
申请(专利权)人：因弗因斯医药瑞士股份有限公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]