抑制凝血的抗体及其使用方法技术

本发明专利技术包括能够通过与天然人ＴＦ以高亲和力和特异性地结合而提供超级抗凝血活性的抗体。本发明专利技术抗体能够有效抑制体内凝血。本发明专利技术抗体能够结合天然人ＴＦ，无论是单独的还是ＴＦ：Ⅶａ复合体，有效阻抑因子Ｘ与ＴＦ或该复合体结合，从而减少凝血。本发明专利技术的优选抗体能够特异性地结合天然人ＴＦ上的一个主要构象表位，该表位提供了一个极强的抗体结合位点。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本申请是申请日为1998年3月10日、申请号为98804169.3、专利技术名称为“”的专利技术专利申请的分案申请。
技术介绍
1.专利
本专利技术涉及新型抗体及使用该抗体抑制凝血的方法。特别地，本专利技术涉及能够与天然人组织因子高亲和力地特异结合的新型抗体。本专利技术抗体有多种应用，特别可用于降低体内凝血。 2.背景知识 凝血通过将血液流失减到最小而协助维持内环境稳定。一般说来，凝血需要血管损伤、血小板聚集、凝血因子和抑制纤维蛋白溶解。凝血因子通过一个包括由血管损伤到血块形成的级联反应起作用(主要参考L.Stryer著《生物化学》(Biochemistry)，第三版，W.H.Freeman公司，纽约；和A.G.Gilman著《治疗学的药理学基础》(The PharmacologicalBasis of Therapeutics)，第八版，McGraw Hill公司，纽约，第1311-1331页)。 众所周知，在凝血过程中，X因子(FX)激活为因子Xa(FXa)是一个关键性的步骤。一般说来，FX通过与一种具有催化活性的复合体结合而转变为FXa，该复合体中包括“组织因子”(TF)。TF是一种可被调控表达的细胞膜蛋白，它与VII/VIIa因子结合而产生具有催化活性的复合体(TF:VIIa)。血液凝块是在FXa介导的凝血酶原激活后形成的。通过使TF失活为不能理想地产生TF:VIIa复合体的非天然形式，就可以将凝血最小化。FXa的过量形成被认为有助于形成包括心瓣再狭窄在内的各种血栓。 血栓形成可能与一些侵入性的医学操作有关，例如心脏外科手术(如血管成形术)，腹胸外科手术，动脉外科手术，器具(如斯滕特固定模或导管)的安置，或动脉内膜切除术。血栓形成还可能会伴随各种血栓栓塞性失调和各种凝血病发生，分别例如肺栓塞(如房颤并发性栓塞)和弥散性血管内凝血。对体液的操作也会产生非预期性血栓，在输血或取液样以及涉及体外循环的操作(如心肺旁路外科手术)和透析中尤为如此。 抗凝剂常常被用来减轻或避免与血栓形成有关的血凝块。通过使用一种适当的抗凝剂或其混和物，包括一或多种香豆素衍生物(如华法林和双香豆素)，或带电聚合物(如肝素，水蛭素或hirulog)，常常可以使凝血降至最小甚或消除。例如，见Gilman等，见上；R.J.Beigering等，血液学年鉴(Ann.Hemathol.)，72177(1996)；J.D.Willerson，循环(Circulation)，94866(1996)。 然而，抗凝剂的使用经常伴随着副作用，如出血、重阻塞、“白凝块”综合症、刺激、出生缺陷、血小板减少和肝脏机能失常。长期使用抗凝剂特别会增加致命性疾病的危险性(例如见，Gilman等，见上)。 某些具有抗血小板活性的抗体也被用来减少各种血栓形成。例如，ReoProTM是一种治疗性抗体，它被常规性地施用，以缓解各种血栓栓塞性紊乱，如由血管成形术、心肌梗塞、不稳定性绞痛和冠状动脉狭窄导致的紊乱。另外，ReoProTM可被用作预防剂，以降低患心肌梗塞和绞痛的危险性(J.T.Willerson，循环，94866(1996)；M.L.Simmons等，循环，89596(1994))。 也已知某些抗凝血性抗体。特别地，已报道某些TF结合性抗体可用来抑制凝血，这可能是通过干预有催化活性的TF:VIIa复合体的组装而起作用的(例如见，Jeske等，SEM in THROM.and HEMO，22213(1996)；Ragni等，循环，931913(1996)；欧洲专利号No.0420937B1；W.Ruf等，Throm.Haemosp.，66529(1991)；M.M.Fiorie等，血液(Blood)，83127(1992))。 然而，现有的TF结合性抗体显示出一些明显的缺点，从而使其作为抗凝剂的适宜性减至最小。例如，现有的TF结合性抗体不具有作为理想抗凝剂的足够结合亲和力。相应地，对于许多血栓形成性疾病，为了弥补这种不太有效的结合亲和力，必须使用难以接受的高抗体水平才能够使凝血减至最小。进一步地，现有的TF结合性抗体不能有效地识别天然TF和非天然形式TF，也就是说，现有的抗体不具备足够的结合特异性。更进一步地，现有的TF结合性抗体不能阻止FX与TF和/或TF:VIIa复合体结合。 因此，人们希望有一种抗凝血抗体能够以高亲和力和选择性地结合天然人TF，从而抑制不希望的凝血和血凝块形成。人们更希望有能够阻止X因子与TF/VIIa复合体结合的这种抗凝血性抗体。 专利技术简述 我们目前已发现的抗体，它们通过与天然人TF高亲和力和高特异性地结合而具有较高的抗凝剂活性。本专利技术的抗体能够在体内有效抑制凝血。本专利技术的抗体能够结合单独的或者存在于TF:VIIa复合体中的天然人TF，有效阻止X因子结合TF或该复合体，从而减少凝血。 本专利技术的优选抗体是能特异性结合天然人TF的一个主要构象表位的单克隆抗体，该表位提供了一个极强的抗体结合位点。实际上，与前面提到的抗凝血性抗体相比，本专利技术的优选抗体与天然人TF的结合亲和力至少高约5倍以上，更通常是高至少约10倍以上。另外，本专利技术的优选抗体对天然人TF具有选择性，不会实质上结合非天然或变性TF。H36.D2.B7(由杂交瘤ATCC HB-12255分泌)为本专利技术的特别优选抗体。 本专利技术的优选抗体可结合TF，导致FX不能有效地结合TF/因子VIIa复合体，从而使得FX不能有效转变为其活化形式(FXa)。本专利技术的优选抗体通过有效阻止FX结合或靠近TF分子而能够抑制TF的功能。例如，见随后实施例3的结果。 本专利技术的优选抗体也不会显著抑制TF和VIIa因子的相互作用或结合，不会抑制TF:因子VIIa复合体相对于其它材料而非FX的活性。例如，见随后实施例4的结果。 本专利技术也提供了编码本专利技术抗体的核酸。H36.D2.B7可变区的核酸和氨基酸序列(SEQ ID NO1-4)示于附图中的附图说明图1A和1B。 优选地，本专利技术提供抑制了凝血和血凝块形成的方法，和降低人TF水平的方法。 一般说来，本专利技术抗体可用以调节实际上任何由FX结合到TF或TF:VIIa复合体所介导的生物反应，包括以上讨论的凝血，炎症和其他疾病。 本专利技术的抗体特别可用于减缓各种血栓形成，尤其是阻止或抑制再狭窄，或侵入性医疗操作例如动脉或心脏外科手术(如血管成形术)之后的其它血栓形成。本专利技术抗体也可用于减少或有效消除由于使用医疗器具(例如导管，斯滕特固定模或其它医疗器具)造成的凝血。本专利技术的优选抗体可与许多抗凝剂、抗血小板剂和溶栓性组合物相容，从而允许以“鸡尾酒”形式施用，以加强或延长对凝血的抑制。 本专利技术抗体也能在哺乳动物，特别是人体的体外循环中用作抗凝剂。在这些方法中，将本专利技术的一或多种抗体在体外循环(例如在心肺旁路外科手术、器官移植外科手术或其它长时间外科手术中可能发生)之前或过程中施用于哺乳动物，其用量足以抑制凝血。 本专利技术抗体也可用作药物的载体。相似地，通过将适当的毒素与抗体相缀合，可以将本专利技术抗体用作细胞毒性剂。通过给哺乳动物施用有效量的本专利技术抗体，还可以将本专利技术抗体的缀合物用于降低哺乳动物、尤其是人体中的组织因子水平，该抗体共价连接了一种细胞毒素或效应物因子，以提供本文档来自技高网...

【技术保护点】
能与天然人组织因子结合、而不与非天然组织因子实质性结合的抗体。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄庆祥，焦进安，EL尼维斯，L鲁普申，
申请(专利权)人：吉尼泰克公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]