一种用气相色谱测定辅酶Q10中N,N-二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯的方法技术

本发明专利技术公开了一种用气相色谱测定辅酶Q10中N,N‑二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯的方法，属于药物分析技术领域。其包括如下步骤：(1)建立色谱系统；(2)检测分析：依次量取对照品溶液、混合干扰溶液、供试品溶液注入气相色谱仪，记录色谱图；(3)结果计算：依据步骤(2)记录的色谱图计算辅酶Q10中N,N‑二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯的含量。本发明专利技术的方法精密度好、分离度好、灵敏度高、线性相关性好，能有效分离和检测N,N‑二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯。

【技术实现步骤摘要】
一种用气相色谱测定辅酶Q10中N,N-二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯的方法
本专利技术属于药物分析
，具体涉及一种用气相色谱测定辅酶Q10中N,N-二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯的方法。
技术介绍
辅酶Q10(coenzymeQ10，结构如下式1)又称泛醌，在呼吸链中是一种与蛋白质结合不紧密的辅酶，是生物体内广泛存在的脂溶性醌类化合物，在人体呼吸链中质子移位及电子传递中起重要作用。辅酶Q10作为细胞代谢和细胞呼吸激活剂，也是重要的抗氧化剂和非特异性免疫增强剂，能抑制线粒体的过氧化，具有促进氧化磷酸化反应，保护生物膜结构完整性的作用。此外，辅酶Q10对免疫非特异性具有增强的作用，可以增强抗体产生的能力，改善T细胞功能。辅酶Q10能激活细胞呼吸，加速产生三磷酸腺苷(ATP)，并起到解毒急救的作用；它还可改变细胞和组织的缺氧状态，对肝、脑、心脏及神经系统均有较好的保护和改善作用，增强体内的非特异性免疫应答。经证实，其可以辅助治疗心血管疾病(如：病毒性心肌炎、慢性心功能不全)、肝炎(如：病毒性肝炎、亚急性肝坏死、慢性活动性肝炎)、癌症的综合治疗(能减轻放疗、化疗等引起的某些不良反应)。在对辅酶Q10胶囊仿制药研发的过程中，所使用的有机溶剂可能会残留在产品中，因此需要对辅酶Q10的残留溶剂进行研究，试验过程中发现乙酰乙酸乙酯高温易分解，且常规条件与N,N-二甲基甲酰胺分离不佳。而辅酶Q10在各国药典中均未规定残留溶剂的检测。中国专利申请201010607598.2公开了一种N，N-二甲基甲酰胺残留量的测定方法，其包括如下步骤：①将样品剪碎；②称取一定量的样品置于反应管中；③取萘-D8的甲醇溶液加入盛有样品的所述反应管中，并使所述样品与所述萘-D8的质量比为100±1：5；④将反应管置于萃取装置中进行萃取；⑤将萃取完成后的反应管冷却；⑥取部分萃取溶液装入注射器，经聚四氟乙烯过滤头过滤后装入进样小瓶中，通过气相色谱质谱联用仪对进样小瓶中的萃取溶液进行分析。该方法N，N-二甲基甲酰胺残留量的测定方法操作简单、快速及准确性高。张先俊等人提出了一种辅酶Q10残留溶剂顶空气相色谱分析方法研究，分别配制顶空空白样品、顶空对照品、顶空供试品，用醋酸丁酯稀释，进样。其色谱柱选用弹性石英毛细管柱，进样口温度：200℃；检测器温度：250℃；柱温：60℃保持5min，以8℃/min升温至200℃保持10min；顶空平衡温度：150℃；平衡时间60min，顶空进样时间：0.1min。该方法利用毛细管柱，分离度好，同时顶空进样，灵敏度高，干扰小。目前还没有针对辅酶Q10胶囊仿制药研发的过程中，对残留溶剂的精确检测技术，尤其是乙酰乙酸乙酯与N,N-二甲基甲酰胺残留的检测技术。有鉴于此，本专利技术为克服上述现有技术不足，提供一种用气相色谱测定辅酶Q10中N,N-二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯的方法。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种用气相色谱测定辅酶Q10中N,N-二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯的方法。本专利技术的目的是通过下述技术方案来实现的：一种用气相色谱测定辅酶Q10中N,N-二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯的方法，包括如下步骤：(1)建立色谱系统；(2)检测分析：依次量取对照品溶液、混合干扰溶液、供试品溶液注入气相色谱仪，记录色谱图；(3)结果计算：依据步骤(2)记录的色谱图计算辅酶Q10中N,N-二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯的含量。其中，步骤(2)中，所述对照品溶液为N,N-二甲基甲酰胺、乙酰乙酸乙酯的乙酸乙酯溶液；所述混合干扰溶液为甲醇、乙醇、乙醚、正己烷和四氢呋喃的乙酸乙酯溶液；所述供试品溶液为辅酶Q10的乙酸乙酯溶液。优选地，所述对照品溶液按以下步骤制作：a、分别称取N,N-二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯，加乙酸乙酯稀释，摇匀，作为N,N-二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯对照品贮备液；b、量取步骤a中所得N,N-二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯对照品贮备液，以乙酸乙酯稀释，摇匀，即得对照品溶液。优选地，步骤a中，所述对照品贮备液中N,N-二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯的总浓度为0.94-3.76g/L，优选为1.88g/L。优选地，步骤a中，所述对照品贮备液中N,N-二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯的质量比为88:100。优选地，步骤b中，所述稀释的倍数为5-20倍，优选为10倍。所述对照品溶液具体的可按照以下步骤制作：a、称取N,N-二甲基甲酰胺88mg、乙酰乙酸乙酯100mg，置于100mL量瓶中，加乙酸乙酯并稀释至刻度，摇匀，作为N,N-二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯对照品贮备液；b、量取N,N-二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯对照品贮备液1mL，置于10mL量瓶中，以乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，即得。所述混合干扰溶液按以下步骤制作：称取甲醇、乙醇、乙醚、正己烷和四氢呋喃，用乙酸乙酯稀释，摇匀，即得混合干扰溶液。优选地，所述混合干扰溶液中甲醇、乙醇、乙醚、正己烷和四氢呋喃的浓度均为20g/L。所述混合干扰溶液具体的可按照以下步骤制作：取甲醇、乙醇、乙醚、正己烷、四氢呋喃各20mg，置于10mL量瓶中，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，混合干扰溶液。所述供试品溶液按以下步骤制作：称取辅酶Q10，加入乙酸乙酯使溶解并稀释，摇匀，即得供试品溶液。优选地，所述供试品溶液中辅酶Q10的浓度为100g/L。所述供试品溶液具体的可按照以下步骤制作：称取1g辅酶Q10，置于量瓶中，加入乙酸乙酯使溶解并稀释至刻度，制成每1mL含辅酶Q10100mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液。优选地，步骤(1)所述色谱系统中，选用的色谱柱为硝基对苯二酸改性的聚乙二醇键合硅胶毛细管柱；进一步优选的，所述色谱系统的条件为：直接进样，进样口温度200℃，检测器温度250℃，柱流量0.8mL/min，分流比20:1，柱温为120℃，进样量为2μL。优选地，步骤(2)所述的检测分析具体为：量取对照品溶液2μL注入气相色谱仪，出峰顺序为N,N-二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯，两者分离度不小于5.0；量取混合干扰溶液注入气相色谱仪，不得干扰N,N-二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯检测；量取2μL供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。优选地，步骤(3)所述的结果计算具体为：依据步骤(2)记录的色谱图，用外标法计算辅酶Q10中N,N-二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯的含量，具体计算公式如下：本专利技术具有以下有益效果：(1)本专利技术可以定量测定辅酶Q10中N,N-二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯的含量，从而有效的控制辅酶Q10的质量。(2)本专利技术提供的方法可以使N,N-二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯能有效分离，精密度好、分离度好、灵敏度高，线性相关性好。附图说明图1为溶剂色谱图；图2为混合干扰溶液色谱图；<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用气相色谱测定辅酶Q10中N,N-二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)建立色谱系统；/n(2)检测分析：依次量取对照品溶液、混合干扰溶液、供试品溶液注入气相色谱仪，记录色谱图；/n(3)结果计算：依据步骤(2)记录的色谱图计算辅酶Q10中N,N-二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯的含量，/n其中，步骤(2)中，/n所述对照品溶液为N,N-二甲基甲酰胺、乙酰乙酸乙酯的乙酸乙酯溶液；/n所述混合干扰溶液为甲醇、乙醇、乙醚、正己烷和四氢呋喃的乙酸乙酯溶液；/n所述供试品溶液为辅酶Q10的乙酸乙酯溶液。/n

【技术特征摘要】
1.一种用气相色谱测定辅酶Q10中N,N-二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)建立色谱系统；
(2)检测分析：依次量取对照品溶液、混合干扰溶液、供试品溶液注入气相色谱仪，记录色谱图；
(3)结果计算：依据步骤(2)记录的色谱图计算辅酶Q10中N,N-二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯的含量，
其中，步骤(2)中，
所述对照品溶液为N,N-二甲基甲酰胺、乙酰乙酸乙酯的乙酸乙酯溶液；
所述混合干扰溶液为甲醇、乙醇、乙醚、正己烷和四氢呋喃的乙酸乙酯溶液；
所述供试品溶液为辅酶Q10的乙酸乙酯溶液。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述对照品溶液按以下步骤制作：
a、分别称取N,N-二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯，加乙酸乙酯稀释，摇匀，作为N,N-二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯对照品贮备液；
b、量取步骤a中所得N,N-二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯对照品贮备液，以乙酸乙酯稀释，摇匀，即得对照品溶液，
所述混合干扰溶液按以下步骤制作：
称取甲醇、乙醇、乙醚、正己烷和四氢呋喃，用乙酸乙酯稀释，摇匀，即得混合干扰溶液，
所述供试品溶液按以下步骤制作：
称取辅酶Q10，加入乙酸乙酯使溶解并稀释，摇匀，即得供试品溶液。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤a中，所述对照品贮备液中N,N-二甲基甲酰胺和乙酰乙酸乙酯的总浓...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘雪锋，
申请(专利权)人：上海普康药业有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31