新缀合物及其用途制造技术

本发明专利技术提供了新缀合物和包含本文所述新缀合物的药物组合物。还提供了所述新缀合物在使用或不使用抗癌剂的情况下在需要癌症治疗的受试者中抑制癌细胞生长并诱导抗体产生的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新缀合物及其用途相关申请的交叉引用本申请要求2017年9月29日提交的美国临时申请号62/565,509的优先权的权益，其全部内容通过引用并入本文。专利技术背景表皮生长因子受体(EGFR)是酪氨酸激酶受体ErbB家族的成员，其将生长诱导信号传递至已被表皮生长因子(EGF)配体刺激的细胞。它是上皮恶性肿瘤的关键因素，占所有癌细胞死亡的50％以上。由于在肿瘤微环境中持续产生EGF或者由于EGFR自身的突变(将受体锁定在持续激活状态)的结果，EGFR活性增强了肿瘤生长、侵袭和转移。EGFR拮抗剂和酪氨酸激酶抑制剂已被美国食品和药品管理局批准用于治疗上皮癌。尽管EGFR拮抗剂在商业上取得了成功，但其用于治疗癌症的特征是通过酪氨酸激酶结构域的突变或其他癌蛋白的上调而产生的发育抗性。为了有效地治疗癌症，如果身体开始针对这些癌症的正免疫应答，则将是优选的。粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)是一种细胞因子，其激活树突细胞进行抗原呈递并增强T淋巴细胞和B淋巴细胞的抗肿瘤功能。然而，由于临床证据表明GM-CSF可能诱导负调节免疫反应，因此关于GM-CSF作为免疫增强剂或治疗剂的作用的研究存在冲突。例如，与热休克蛋白疫苗一起施用的GM-CSF与黑色素瘤患者中骨髓来源的抑制细胞的诱导有关(FilipazziP等，Identificationofanewsubsetofmyeloidsuppressorcellsinperipheralbloodofmelanomapatientswithmodulationbyagranulocyte-macrophagecolony-stimulationfactor-basedantitumorvaccineJClinOncol2007；25:2546–53)。在鼠模型中，高剂量的GM-CSF可能会增加骨髓来源的抑制细胞(Serafini等，Highdosegranulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactor-producingvaccinesimpairtheimmuneresponsethroughtherecruitmentofmyeloidsuppressorcells.CancerRes2004；64:6337–43)。一项针对局部施用的GM-CSF作为疫苗佐剂的作用的随机多中心研究表明，在疫苗中包括GM-CSF的患者中，循环T细胞对多肽疫苗的应答显著更低。其原因尚待确定，但发现导致对GM-CSF蛋白作为局部佐剂的益处产生怀疑。(CLSlingluffJr等，Effectofgranulocyte/macrophagecolony-stimulatingfactoroncirculatingCD8+andCD4+T-cellresponsestoamultipeptidemelanomavaccine:outcomeofamulticenterrandomizedtrial.ClinCancerRes.2009；15(22):7036-7044)因此，需要更有效的基于免疫的癌症治疗。本专利技术解决了该需求和其他需求。专利技术简述本专利技术的实施方案提供了包含粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)多肽和配体的缀合物。本专利技术还提供了药物组合物，其包含本文所述的缀合物和药学上可接受的赋形剂。根据本专利技术的一个实施方案，提供了用于在受试者中抑制癌细胞生长的方法。该方法包括施用有效量的本文所述的缀合物，其中所述有效量的缀合物抑制所述受试者中的癌细胞生长。根据本专利技术的另一个实施方案，提供了在受试者中诱导抗EGF抗体的方法。该方法包括在需要癌症治疗的受试者中施用有效量的包含GM-CSF多肽和EGF的缀合物的步骤，其中在所述受试者中诱导了有效量的抗EGF抗体。根据本专利技术的又一个实施方案，提供了在受试者中诱导抗血管内皮生长因子(VEGF)抗体的方法。该方法包括以下步骤：向需要癌症治疗的受试者施用有效量的包含GM-CSF多肽和VEGF的缀合物，其中在所述受试者中诱导了有效量的抗VEGF抗体。还提供了本文所述的缀合物在制备用于癌症的治疗性和/或预防性治疗的药物中的用途。还提供了用于抑制癌细胞的治疗剂，其包含治疗有效量的本文所述的缀合物。在本专利中使用的术语“专利技术”，“该专利技术”，“这个专利技术”和“本专利技术”旨在广泛地指代本专利和以下专利权利要求的所有主题。含有这些术语的陈述应理解为不是限制本文所述主题或不是限制以下专利权利要求的含义或范围。本专利所涵盖的专利技术的实施方案由以下权利要求书而非本专利技术简述所限定。本简述是本专利技术各个方面的高级概述，并介绍了一些概念，这些概念将在下面的详细描述部分中进一步描述。本简述并不旨在鉴别所要求保护的主题的关键或必要特征，也不旨在单独用于确定所要求保护的主题的范围。应当参考整个说明书，任何或所有附图以及每个权利要求的适当部分来理解所述主题。通过参考说明书的其余部分和附图，可以进一步理解本专利技术的本质和优点。附图简述本专利或专利申请含有至少一个彩色附图。根据要求并支付必要费用，专利局将提供带有彩色附图的本专利或专利申请的副本。图1A显示了本专利技术的缀合物mGM-CSF-hEGF的一个实施方案的氨基酸序列(SEQIDNO：1)。图1B显示了本专利技术的缀合物mGM-CSF-mVEGFa的另一个实施方案的氨基酸序列(SEQIDNO：2)。图1C显示了本专利技术的缀合物mGM-CSF-mPDGFA的第三实施方案的氨基酸序列(SEQIDNO：3)。图1D显示了本专利技术的缀合物mGM-CSF-mbFGF的第四实施方案的氨基酸序列(SEQIDNO：4)。图2A与图2B示意性地示出了本专利技术的缀合物的作用机制。图3是说明使用镍离子柱纯化mGM-CSF-hEGF的色谱图。图4是在不同纯化步骤的纯化蛋白的SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色。图5是线图，示出了注射有如下的小鼠中的肿瘤大小：(a)仅鼠肾细胞癌(RENCA)细胞(亲代)，(b)与表达mGM-CSF的细胞(mGM-CSF)混合的RENCA细胞，(c)与表达mGM-CSF-hEGF的细胞(mGM-CSF-hEGF)混合的RENCA细胞或(d)与表达mGM-CSF-mVEGF的细胞(mGM-CSF-mVEGF)混合的RENCA细胞。图6A是示出了用PBS缓冲液或GM-CSF-EGF缀合物处理的小鼠中的肿瘤负荷的照片图像。图6B是柱状图，说明了用PBS缓冲液或GM-CSF-EGF缀合物处理的小鼠中来自荧光素酶的生物发光强度。图7A和图7B是荧光激活细胞分选(FACS)图像，分别示出了实施例1的GM-CSF-EGF缀合物、EGF和PBS与乳腺癌细胞(MDA468)和肾细胞癌(RENCA)上的EGF受体的结合。图8显示了mGM-CSF-EGF对GM-CSF依赖性NFS60白血病细胞增殖的作用。图9是说明实施例1的hEGF和GM-CSF-hEGF缀合物对EGF受体的结合亲和力的线图。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种缀合物，其包含/n粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)多肽；和/n配体。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170929 US 62/565,5091.一种缀合物，其包含
粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)多肽；和
配体。


2.权利要求1的缀合物，其中所述GM-CSF通过接头可操作地连接至所述配体或共价连接至所述配体。


3.权利要求1的缀合物，其中所述配体是肿瘤相关配体。


4.权利要求3的缀合物，其中所述肿瘤相关配体选自表皮生长因子(EGF)、C-X-C基序趋化因子12(CXCL12)、肝细胞生长因子-1(HGF)和胰岛素样生长因子(IGF)。


5.权利要求3的缀合物，其中所述肿瘤相关配体选自集落刺激因子(CSF-1)、巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)。


6.权利要求3的缀合物，其中所述肿瘤相关配体选自血管内皮生长因子(VEGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)和成纤维细胞生长因子(FGF)。


7.权利要求1的缀合物，其中所述配体不是白介素、抗体或肿瘤细胞上的受体。


8.权利要求1的缀合物，其中所述缀合物与SEQIDNO：1、SEQIDNO：2、SEQIDNO：3或SEQIDNO：4至少90％同源。


9.一种药物组合物，其包含
权利要求1的结合物；和
药学上可接受的赋形剂。


10.权利要求9的药物组合物，其还包含抗癌剂。


11.权利要求10的药物组合物，其中所述抗癌剂选自细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)抗体、EGFR抗体或酪氨酸激酶抑制剂。


12.一种在受试者中抑...

【专利技术属性】
技术研发人员：蓝耿立，蔡政良，
申请(专利权)人：蓝耿立，蔡政良，
类型：发明
国别省市：中国台湾;71