新型冠状病毒优势表位融合蛋白、诊断试剂及应用制造技术

本发明专利技术涉及新型冠状病毒优势表位融合蛋白、诊断试剂及应用，属于病毒诊断试剂。本发明专利技术所述新型冠状病毒优势表位融合蛋白包括通过连接臂连接的N蛋白优势表位肽和S蛋白优势表位肽、E蛋白优势表位肽，所述N蛋白优势表位肽包括优势表位肽N1、优势表位肽N2、优势表位肽N3和优势表位肽N4中的一个或两个以上。本发明专利技术所述新型冠状病毒优势表位融合蛋白特异性更高，灵敏度更高(阳性检出率更高)，生物相容性、溶解度高，稳定性好，更有利于制备相应的检测试剂；基于本发明专利技术所述融合蛋白制备的检测试剂，灵敏度高，特异性好，可实现新型冠状病毒的早期筛查。

【技术实现步骤摘要】
新型冠状病毒优势表位融合蛋白、诊断试剂及应用
本专利技术涉及病毒诊断试剂
，具体涉及新型冠状病毒优势表位融合蛋白、诊断试剂及应用。
技术介绍
冠状病毒是一个大型病毒家族，已知可引起感冒、中东呼吸综合征(MERS)和严重急性呼吸综合征(SARS)等较严重疾病。新型冠状病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株，2019-nCoV是人类分离的第七类冠状病毒。相关疾病监测，发现多起病毒性肺炎病例，均诊断为病毒性肺炎/肺部感染。新型冠状病毒感染人体后一般有3～14天(有个别案例报道最长24天)的潜伏期，潜伏期内可无临床症状，不易发现。目前的证据表明，潜伏期感染者也有传染性，增大了阻断病毒传播的难度。新型冠状病毒感染临床症状主要表现为发热、咳嗽、乏力等非特异症状，与普通感冒难以区分，其确诊依赖实验室诊断技术。目前新型冠状病毒感染诊断主要依赖基于聚合酶链式反应(PCR)或核酸测序检测病毒特异性基因序列来进行。但是核酸诊断需要有特殊的实验室(要求有4个在物理空间上完全相互独立的区域)和数十种配套设备以及专业操作人员(需认证)才能完成，且检测过程操作复杂，需要数小时才能完成；极易产生气溶胶污染，造成假阳性，也存在因为取样不合适造成漏检的情况，因此核酸检测不适合现场大规模开展。免疫学诊断主要是通过抗原抗体免疫反应检测人体感染病毒以后产生的特异性抗体来诊断。免疫学诊断方法具有操作简单、检测速度快、无需特殊场地及(复杂)仪器设备，且敏感性高等优点，适用于现场大规模开展新型冠状病毒感染筛查及诊断工作。为实现快速，特异性高，灵敏度高的免疫学诊断手段，诊断原料尤为重要，主要体现在抗原稳定性和特异性检出率方面。病毒在感染人体后，释放大量的棘突蛋白(Spikeprotein，S蛋白)和核蛋白(Nucleoprotein，N蛋白)刺激机体产生免疫反应，产生针对这两种蛋白的抗体，单一采用N蛋白或S蛋白包被生产诊断试剂会造成捕获不完全，存在漏检灵敏度不高的情况。采用两种蛋白混合包被会使生产工艺复杂，批间控制难度大。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供新型冠状病毒优势表位融合蛋白、诊断试剂及应用。本专利技术所述新型冠状病毒优势表位融合蛋白去除了非表位相关的氨基酸序列，减少了融合蛋白同检测样本的非特异性反应，相应制备的检测试剂特异性更高；同时表位丰富度高，暴露更好，相应制备的检测试剂灵敏度更高(阳性检出率更高)；通过亲水及柔性的连接臂连接多个抗原表位，有效的改善了融合蛋白的生物相容性，溶解度高，稳定性好，更有利于制备相应的检测试剂；基于上述的多种优势表位融合蛋白制备的检测试剂，灵敏度高，特异性好，可实现新型冠状病毒的早期筛查。本专利技术提供了新型冠状病毒优势表位融合蛋白，所述优势表位融合蛋白包括通过连接臂连接的N蛋白优势表位肽、S蛋白优势表位肽和E蛋白优势表位肽；所述N蛋白优势表位肽包括优势表位肽N1、优势表位肽N2、优势表位肽N3和优势表位肽N4中的一个或两个以上，两个以上优势表位肽之间通过连接臂连接；所述优势表位肽N1的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，所述优势表位肽N2的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示，所述优势表位肽N3的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示，所述优势表位肽N4的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示；所述S蛋白优势表位肽的氨基酸序列如SEQIDNO.5所示；所述E蛋白优势表位肽的氨基酸序列如SEQIDNO.6所示；所述连接臂氨基酸序列如SEQIDNO.7所示。优选的是，所述N蛋白优势表位肽由优势表位肽N1和优势表位肽N4通过连接臂连接得到。优选的是，所述优势表位融合蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.8所示。优选的是，所述N蛋白优势表位肽由优势表位肽N1、优势表位肽N2和优势表位肽N4通过连接臂连接得到。优选的是，所述优势表位融合蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.9所示。优选的是，所述N蛋白优势表位肽由优势表位肽N1、优势表位肽N2、优势表位肽N3和优势表位肽N4通过连接臂连接得到。优选的是，所述优势表位融合蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.10所示。本专利技术还提供了上述技术方案所述优势表位融合蛋白在制备新型冠状病毒诊断用试剂中的应用。本专利技术还提供了一种新型冠状病毒诊断试剂，所述诊断试剂包括上述技术方案所述新型冠状病毒优势表位融合蛋白。本专利技术还提供了一种双抗夹心体外诊断试剂，所述双抗夹心体外诊断试剂包括上述技术方案所述新型冠状病毒优势表位融合蛋白。本专利技术提供了新型冠状病毒优势表位融合蛋白。本专利技术提供的新型冠状病毒优势表位融合蛋白(含不同融合表位的重组蛋白)，能够提高试剂生产工艺可控性、灵敏度高、特异性好，可获得高稳定性抗原，免疫产生高亲和度抗体。本专利技术所述新型冠状病毒优势表位融合蛋白是基于2019-nCoV病毒N、S蛋白和E蛋白的多种优势表位融合蛋白，相比于常规的N蛋白、S蛋白、或者N+S蛋白，本专利技术融合蛋白去除了非表位相关的氨基酸序列，减少了融合蛋白同检测样本的非特异性反应，相应制备的检测试剂特异性更高；同时表位丰富度高，暴露更好，相应制备的检测试剂灵敏度更高(阳性检出率更高)；通过亲水及柔性的连接臂连接多个抗原表位，有效的改善了融合蛋白的生物相容性，溶解度高，稳定性好，更有利于制备相应的检测试剂。因此，基于本专利技术新型冠状病毒优势表位融合蛋白制备的检测试剂，灵敏度高，特异性好，可实现新型冠状病毒的早期筛查。对比单独的N蛋白或者S蛋白作为捕获/检测抗原，本专利技术的新型冠状病毒优势表位融合蛋白具备更丰富的表位，能够检测到样本中更多的病毒抗体，可以更早期的检出感染人群；同时融合蛋白生物稳定性好，溶解度相比于全长的蛋白更好，制备的检测试剂性能更好。对比混合的N蛋白和S蛋白作为捕获/检测抗原，本专利技术的新型冠状病毒优势表位融合蛋白通过特殊的亲水柔性连接臂把N蛋白和S蛋白的优势表位串联在一起，使用更简单(不需要摸索N蛋白和S蛋白混合的比例)，捕获密度更高(如包被在NC膜上时，同样大小的空间，融合蛋白可以包被更多数量的表位)从而灵敏度提高，生物相容性更好，有利于试剂性能提高(低等电点和亲水性的柔性连接臂，有效降低原N蛋白的高等电点，并提高水溶性，避免蛋白聚集)。另外，试剂生产工艺更为简单，易于控制批间差。对比新冠病毒裂解液作为捕获/检测抗原，本专利技术的新型冠状病毒优势表位融合蛋白特异性高(新冠病毒裂解液存在多种其他病毒类似表位，造成交叉反应高)，生产批间差小(病毒裂解液批次之间差异较大，控制难度大，均一性差)，生物安全性高(病毒裂解液即使灭活也存在潜在的生物危害性)。具体实施方式本专利技术提供了新型冠状病毒优势表位融合蛋白，所述优势表位融合蛋白包括通过连接臂连接的N蛋白优势表位肽、S蛋白优势表位肽和E蛋白优势表位肽；所述N蛋白优势表位肽包括优势表位肽N1(N蛋白21-43)、优势表位肽N2(N蛋白65-86)、优势表位肽N3(N蛋白248-271)和优势表位肽N4(本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.新型冠状病毒优势表位融合蛋白，其特征在于，所述优势表位融合蛋白包括通过连接臂连接的N蛋白优势表位肽、S蛋白优势表位肽和E蛋白优势表位肽；/n所述N蛋白优势表位肽包括优势表位肽N1、优势表位肽N2、优势表位肽N3和优势表位肽N4中的一个或两个以上，两个以上优势表位肽之间通过连接臂连接；所述优势表位肽N1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述优势表位肽N2的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述优势表位肽N3的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述优势表位肽N4的氨基酸序列如SEQID NO.4所示；/n所述S蛋白优势表位肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；/n所述E蛋白优势表位肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示；/n所述连接臂氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。/n

【技术特征摘要】
1.新型冠状病毒优势表位融合蛋白，其特征在于，所述优势表位融合蛋白包括通过连接臂连接的N蛋白优势表位肽、S蛋白优势表位肽和E蛋白优势表位肽；
所述N蛋白优势表位肽包括优势表位肽N1、优势表位肽N2、优势表位肽N3和优势表位肽N4中的一个或两个以上，两个以上优势表位肽之间通过连接臂连接；所述优势表位肽N1的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，所述优势表位肽N2的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示，所述优势表位肽N3的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示，所述优势表位肽N4的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示；
所述S蛋白优势表位肽的氨基酸序列如SEQIDNO.5所示；
所述E蛋白优势表位肽的氨基酸序列如SEQIDNO.6所示；
所述连接臂氨基酸序列如SEQIDNO.7所示。


2.根据权利要求1所述的优势表位融合蛋白，其特征在于，所述N蛋白优势表位肽由优势表位肽N1和优势表位肽N4通过连接臂连接得到。


3.根据权利要求2所述的优势表位融合蛋白，其特征在于，所述优势表位融合蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.8所示。

【专利技术属性】
技术研发人员：周建平，周裕军，许秀丽，张望，吴鸣月，王艳新，常缘荣，
申请(专利权)人：北京丹大生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11