VEGFR-抗体轻链融合蛋白制造技术

本申请提供了抗体融合蛋白，其包含与抗体轻链的C‑末端融合的血管内皮生长因子受体(VEGFR)。还提供了制备和使用这些抗体融合蛋白的方法。

VEGFR antibody light chain fusion protein

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】VEGFR-抗体轻链融合蛋白相关专利申请的交叉引用本申请要求2017年10月12日提交的美国专利申请62/571,773的优先权权益，该申请的内容全文以引用方式并入本文。提交序列表的ASCII文本文件将以下以ASCII文本文件提交的内容全文以引用方式并入本文：序列表的计算机可读形式(CRF)(文件名称：754392000240SEQLIST.TXT，记录日期：2018年9月24日，大小：105KB)。
本专利技术涉及包含与抗体轻链的C-末端融合的血管内皮生长因子受体(VEGFR)组分的抗体融合蛋白，以及它们的制备和使用方法。
技术介绍
血管内皮生长因子(VEGF)在血管生成中起到重要作用。VEGF与其在血管内皮细胞上表达的酪氨酸激酶受体(VEGFR)的结合触发了参与血管内皮细胞增殖和新生血管生长的细胞反应。然而，VEGF的过表达导致疾病。肿瘤组织趋于具有较高的VEGF表达水平，这刺激肿瘤血管生成以为生长的实体肿瘤提供营养。血管生成还允许肿瘤与宿主的血管床接触，这可提供肿瘤细胞转移的途径。VEGF的过表达还可导致非肿瘤性病症，诸如类风湿性关节炎、牛皮癣、动脉粥样硬化、血管瘤、移植的角膜组织和其他组织的免疫排斥、慢性炎症和眼部新生血管障碍(例如，糖尿病性视网膜病、晶体后纤维增生症、新生血管性青光眼和年龄相关性黄斑变性(AMD))。因此，用于有效治疗肿瘤性肿瘤和非肿瘤性障碍(诸如眼部新生血管障碍)的一种可能的机制是抑制或基本上降低VEGF蛋白的内皮增生和血管生成活性。配体与其受体之间的相互作用通常具有高亲和力，从而达到纳摩尔至皮摩尔的范围。受体的细胞外结构域(ECD)或ECD的功能部分已成功用作“配体陷阱”以用于治疗目的(Claesson-WelshL.,NatMed.2008年11月；14(11)：1147-1148；WiesmannC.等人，Cell.1997年11月28日；91(5):695-704；HardingTC等人，SciTranslMed.2013年3月27日；5(178):178ra39)。已经开发了包含VEGFR组分的重组融合蛋白来治疗与VEGF表达相关联的疾病，诸如癌症和AMD。这些融合蛋白通过将VEGFR片段与免疫球蛋白Fc片段的N-末端或免疫球蛋白Fc片段的一部分融合来产生，并且被认为是“VEGF陷阱”。参见，例如US6100071、US7087411和US7521049。VEGFR片段将与内源性VEGF结合并且灭活内源性VEGF，从而提供用于降低或抑制内源性VEGF活性，并且继而降低或抑制内皮细胞增殖和血管生成的手段。VEGF陷阱(阿柏西普(Aflibercept))可以比贝伐单抗(VEGF中和抗体，50pM)更高的亲和力(0.5pM)捕获VEGF。本文提及的所有出版物、专利、专利申请和公布的专利申请的公开内容据此全文以引用方式并入本文。
技术实现思路
本专利技术涉及抗体融合蛋白，其包含与抗体轻链的C-末端(诸如，抗体轻链恒定结构域(CL结构域)的C-末端)融合的VEGFR组分，及其制备和使用方法。本申请的一个方面提供抗体融合蛋白，其包含：1)包含轻链的抗体，和2)VEGFR组分，其中所述VEGFR组分与抗体轻链的C-末端(诸如抗体VL-CL结构域的C-末端)融合。在一些实施方案中，抗体融合蛋白包含与第一抗体轻链的C-末端融合的第一VEGFR组分，以及与第二抗体轻链的C-末端融合的第二VEGFR组分。在一些实施方案中，第一VEGFR组分和第二VEGFR组分相同。在一些实施方案中，第一VEGFR组分和第二VEGFR组分不同。在根据上述抗体融合蛋白中任一者的一些实施方案中，VEGFR组分包含第一VEGFRFlt1的免疫球蛋白样(Ig-样)结构域2(Flt1d2)。在一些实施方案中，VEGFR组分还包含第二VEGFRFlk1的Ig-样结构域3(Flk1d3)。在一些实施方案中，VEGFR组分包含SEQIDNO:8的氨基酸序列。在一些实施方案中，VEGFR组分还包含第三VEGFRFlk1的Ig-样结构域4(Flk1d4)。在根据上述抗体融合蛋白中任一者的一些实施方案中，VEGFR组分为至少约4kDa(诸如至少约下列中的任一者：4kDa、8kDa、12kDa、17kDa、20kDa、25kDa、27kDa或30kDa)。在根据上述抗体融合蛋白中任一者的一些实施方案中，VEGFR组分和VEGF之间的结合的KD为约10-8M至约10-13M(诸如约10-8M至约10-13M、约10-8M至约10-12M、约10-9M至约10-12M、约10-10M至约10-12M)。在根据上述抗体融合蛋白中任一者的一些实施方案中，VEGFR组分和抗体轻链的C-末端通过接头连接。在一些实施方案中，接头为肽接头，诸如包含SEQIDNO:6或7的氨基酸序列的肽接头。在根据上述抗体融合蛋白中任一者的一些实施方案中，抗体选自IgA、IgD、IgE、IgG、IgM、IgG-来源分子、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fab-scFv、F(ab’)2-scFv2、Fab-scFv-Fc、对接和锁定(DockandLock)、scFv、二-scFv、双体抗体、双体抗体-Fc、双体抗体-CH3、和细胞内抗体。在一些实施方案中，抗体包含轻链恒定结构域(CL结构域)、并且VEGFR组分与抗体CL结构域的C-末端(例如抗体VL-CL结构域的C-末端)融合。在一些实施方案中，抗体为全长抗体。在一些实施方案中，抗体为IgG抗体，诸如IgG1或IgG4抗体，或其变体。在根据上述抗体融合蛋白中任一者的一些实施方案中，所述抗体是单特异性的。在根据上述抗体融合蛋白中任一者的一些实施方案中，所述抗体是多特异性的(例如，双特异性的)。在根据上述抗体融合蛋白中任一者的一些实施方案中，所述抗体特异性识别免疫检查点分子。在一些实施方案中，免疫检查点分子是刺激性免疫检查点分子。在一些实施方案中，免疫检查点分子是抑制性免疫检查点分子。在一些实施方案中，所述抑制性免疫检查点分子选自PD-1、PD-L1、PD-L2、CD47、CXCR4、CSF1R、LAG-3、TIM-3、HHLA2、BTLA、CTLA-4、TIGIT、VISTA、B7-H4、CD160、2B4和CD73。在一些实施方案中，抑制性免疫检查点分子为PD-1。在一些实施方案中，所述抗体包括：包含SEQIDNO:12的氨基酸序列的重链的重链-CDR1(HC-CDR1)、HC-CDR2和HC-CDR3；和/或包含SEQIDNO:13的氨基酸序列的轻链的轻链-CDR1(LC-CDR1)、LC-CDR2和LC-CDR3。在一些实施方案中，抗体包含重链，所述重链包含SEQIDNO:12的氨基酸序列，和轻链，所述轻链包含SEQIDNO:13的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体为派姆单抗(例如，)或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗体融合蛋白包含重链，所述重链包含SEQIDNO:12的氨基酸序列，和轻链融合多肽，所述轻链本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗体融合蛋白，其包含1)包含轻链的抗体，和2)血管内皮生长因子受体(VEGFR)组分，其中所述VEGFR组分与所述抗体轻链的C-末端融合。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171012 US 62/571,7731.一种抗体融合蛋白，其包含1)包含轻链的抗体，和2)血管内皮生长因子受体(VEGFR)组分，其中所述VEGFR组分与所述抗体轻链的C-末端融合。


2.根据权利要求1所述的抗体融合蛋白，其包含与第一抗体轻链的C-末端融合的第一VEGFR组分，以及与第二抗体轻链的C-末端融合的第二VEGFR组分。


3.根据权利要求2所述的抗体融合蛋白，其中所述第一VEGFR组分和所述第二VEGFR组分相同。


4.根据权利要求2所述的抗体融合蛋白，其中所述第一VEGFR组分和所述第二VEGFR组分不同。


5.根据权利要求1-4中任一项所述的抗体融合蛋白，其中所述VEGFR组分包含第一VEGFRFlt1的免疫球蛋白样(Ig-样)结构域2(Flt1d2)。


6.根据权利要求5所述的抗体融合蛋白，其中所述VEGFR组分还包含第二VEGFRFlk1的Ig-样结构域3(Flk1d3)。


7.根据权利要求6所述的抗体融合蛋白，其中所述VEGFR组分包含SEQIDNO:8的氨基酸序列。


8.根据权利要求1-7中任一项所述的抗体融合蛋白，其中所述VEGFR组分和所述抗体轻链的C-末端通过接头连接。


9.根据权利要求8所述的抗体融合蛋白，其中所述接头包含SEQIDNO：6或7的氨基酸序列。


10.根据权利要求1-9中任一项所述的抗体融合蛋白，其中所述抗体包含轻链恒定结构域(CL结构域)，并且所述VEGFR组分与所述抗体CL结构域的C-末端融合。


11.根据权利要求1-10中任一项所述的抗体融合蛋白，其中所述抗体为全长抗体。


12.根据权利要求1-11中任一项所述的抗体融合蛋白，其中所述抗体特异性识别免疫检查点分子。


13.根据权利要求12所述的抗体融合蛋白，其中所述免疫检查点分子为PD-1。


14.根据权利要求13所述的抗体融合蛋白，其中所述抗体包括：包含SEQIDNO:12的氨基酸序列的重链的重链-CDR1(HC-CDR1)、HC-CDR2和HC-CDR3；和/或包含SEQIDNO:13的氨基酸序列的轻链的轻链-CDR1(LC-CDR1)、LC-CDR2和LC-CDR3。


15.根据权利要求13所述的抗体融合蛋白，其中所述抗体包括：包含SEQIDNO:15的氨基酸序列的重链的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；和/或包含SEQIDNO:16的氨基酸序列的轻链的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。


16.根据权利要求12所述的抗体融合蛋白，其中所述免疫检查点分子为PD-L1。


17.根据权利要求16所述的抗体融合蛋白，其中所述抗体包括：包含SEQIDNO:18的氨基酸序列的重链的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；和/或包含SEQIDNO:19的氨基酸序列的轻链的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。


18.根据权利要求16所述的抗体融合蛋白，其中所述抗体包括：包含SEQIDNO:21的氨基酸序列的重链的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR3；和/或包含SEQIDNO:22的氨基酸序列的轻链的LC-CDR1、LC-CDR2和LC-CDR3。


19.根据权利要求12所述的抗体融合蛋白，其中所述免疫检查点分子为CTLA-4。


20.根据权利要求19所述的抗体融合蛋白，其中所述抗体包括：包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的重链的HC-CDR1、HC-CDR2和HC-CDR...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴晓云，
申请(专利权)人：免疫苏醒公司，
类型：发明
国别省市：美国;US