禽呼肠孤病毒新型基因工程疫苗制造技术

本发明专利技术揭示了一种禽呼肠孤病毒新型基因工程疫苗，其包含编码基因序列如SEQ ID NO:1所示的融合蛋白。该疫苗的抗原性、免疫原性和功能与天然蛋白质相似，表达水平较高，免疫原性强，对禽类没有致病性，并且该疫苗可以通过生物反应器大规模无血清悬浮培养制备，大大降低了疫苗生产成本。

【技术实现步骤摘要】
禽呼肠孤病毒新型基因工程疫苗
本专利技术涉及一种基因工程疫苗，具体涉及一种禽呼肠孤病毒新型基因工程疫苗，其制备方法与应用，属于动物免疫药物

技术介绍
禽呼肠孤病毒（AvianReovirus，ARV）是禽病毒性关节炎（AvianViralArthritis）和腱鞘炎的主要病原之一，属于呼肠孤病毒科，正呼肠孤病毒属的一种，该毒株自1954年首次分离得到。ARV可引起鸡的运动障碍性传染病，该病呈全球性分布，病鸡主要表现为跛行或不愿运动，部分鸡生长受阻，增重明显下降；ARV还可引起除病毒性关节炎和腱鞘炎以外的疾病，如吸收不良、肠道紊乱、心肝病损、蓝翅病和呼吸道病等，各年龄的鸡均易感，感染时鸡龄越小，发病几率越高。ARV的感染常常引起其他疾病的继发感染，造成巨大的经济损失。ARV属于呼肠孤病毒科、正呼肠孤病毒属的成员，无囊膜，由双层核衣壳包裹，其基因组为双股RNA(dsRNA)，由大(L1、L2、L3)、中(M1、M2、M3)和小(S1、S2、S3、S4)3组共10个节段基因组成，其中σB蛋白为S3基因所编码，拥有367个氨基酸，是病毒外衣壳蛋白重要成分（Martinez-CostasJ,Gonzalez-LopezC,VakhariaVN,BenaventeJ.Possibleinvolvementofthedouble-strandedRNA-bindingcoreproteinsigmaAintheresistanceofavianreovirustointerferon.Journalofvirology,2000,74(3):1124-1131.），σB蛋白携带有群特异型中和抗原决定簇，能够诱导宿主细胞融合，并使宿主产生群特异性中和抗体。σC蛋白为S1基因的第三个开放阅读框(ORF)所编码，是病毒外衣壳蛋白中最小的一个蛋白，它是一种病毒吸附蛋白，分子量为34.9kDa，以单体和三聚体的形式存在。σC蛋白目前已知的主要功能是携带有ARV的特异性中和反应的表面抗原和具有细胞吸附的功能（NiY，KempMC.Acomparativestudyofavianreoviruspathogenicity：virusSpreadandreplicationandinductionorlesion[J]．AvianDisease,1995,39:554-566.;MeangerJ,WickramasingheR．Associationbetweentheproteinofavianreovirusandvirusinducedfusionofcell[J].ArchivesofVirology,1999,144:193-197），σC蛋白对宿主细胞的吸附作用会被纯化的病毒粒子竞争性抑制，并且病毒粒子的吸附作用也会被预先加入的σC蛋白竞争性抑制（GrandeA,BenaventeJ.Optimalconditionsforthegrowth,purificationandstorageoftheavianreovirusS1133.JournalofVirologicalMethods,2000,85(1-2):43-54）。因此，σC蛋白在ARV感染和致病中有重要作用。尽管如CN103642758A、CN107384942A等文献也提出了一些禽呼肠孤病毒基因工程亚单位疫苗，但其中大多为单独表达σB蛋白或σC蛋白以及混合表达σB/σC蛋白作为疫苗，虽然σB、σC等蛋白具有很好的保护效果，然而使用的都是某一个血清型病毒的结构蛋白作为疫苗抗原，由于σC蛋白容易突变，交叉保护不好，往往导致免疫失败。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于提供一种禽呼肠孤病毒新型基因工程疫苗，其制备方法与应用，以克服现有技术中的不足。为实现前述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案包括：本专利技术实施例提供了一种融合蛋白，包含SEQIDNO:2所示的氨基酸序列或者与SEQIDNO:2的全长氨基酸序列95％以上相同的氨基酸序列。本专利技术实施例还提供了所述融合蛋白的编码基因。进一步的，所述编码基因包括序列如SEQIDNO:1所示的核酸分子或者与SEQIDNO:1的核苷酸序列95％以上相同的核酸分子。本专利技术实施例还提供了包含所述编码基因的重组基因载体、重组杆状病毒或昆虫细胞。本专利技术实施例还提供了一种免疫组合物，其包括：所述的融合蛋白；以及，药学上可接受的载体。本专利技术实施例还提供了一种制备所述融合蛋白的方法，其包括：S1、将所述融合蛋白的编码基因克隆到杆状病毒表达系统转移载体上，获得重组表达载体；S2、将所述重组杆状病毒转移载体与杆状病毒基因组质粒共转染昆虫细胞，筛选获得重组杆状病毒；S3、将所述重组杆状病毒接种昆虫细胞，获得所述融合蛋白。本专利技术实施例还提供了所述融合蛋白或所述免疫组合物在制备禽呼肠孤病毒的检测试剂中的用途。本专利技术实施例还提供了所述融合蛋白或所述免疫组合物在生产用于在受试动物中诱导针对禽呼肠孤病毒抗原的免疫反应的药剂中的用途。本专利技术实施例还提供了所述融合蛋白或所述免疫组合物在生产用于预防动物受禽呼肠孤病毒感染的药剂中的用途。本专利技术实施例还提供了所述融合蛋白或所述免疫组合物在制备禽呼肠孤病毒新型基因工程疫苗中的用途。相应的，本专利技术实施例提供了一种禽呼肠孤病毒基因工程疫苗，其包含前述的任一种免疫组合物。进一步的，所述疫苗还可包含药学上可接受的载体。本专利技术实施例还提供了包含所述融合蛋白编码基因的重组基因载体、重组杆状病毒或昆虫细胞在生产用于检测动物受禽呼肠孤病毒感染的试剂的用途。本专利技术实施例还提供了包含所述融合蛋白编码基因的重组基因载体、重组杆状病毒或昆虫细胞在生产用于在受试动物中诱导针对禽呼肠孤病毒抗原的免疫反应的药剂的用途。本专利技术实施例还提供了包含所述融合蛋白编码基因的重组基因载体、重组杆状病毒或昆虫细胞在生产用于预防动物受禽呼肠孤病毒感染的药剂的用途。较之现有技术，本专利技术实施例基于禽呼肠孤病毒σC蛋白的主要保护性抗原表位，通过将其与σB蛋白抗原表位串联，构建了一种新型融合蛋白（可命名为SBC融合蛋白），该融合蛋白具有广泛的保护能力，几乎能保护所有不同毒株病毒的攻击，利用其制备的禽呼肠孤病毒疫苗的抗原性、免疫原性和功能与天然蛋白质相似，表达水平较高，免疫原性强，对禽类没有致病性，并且可以通过生物反应器大规模无血清悬浮培养制备，大大降低了疫苗生产成本。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施方式的技术方案，下面将对实施方式中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1是实施例1中SBC基因PCR扩增产物的凝胶电泳图，其中在1.0kbp位置出现目的条带。图2是实施例1中菌落PCR扩增产物的凝胶电泳图，其中在1.0kbp位置本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白，其氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。


2.如权利要求1所述融合蛋白的编码基因。


3.如权利要求2所述的编码基因，其特征在于：所述编码基因的序列如SEQIDNO:1所示。


4.包含权利要求2或3所述编码基因的重组基因载体、重组杆状病毒或昆虫细胞。


5.一种免疫组合物，其特征在于包括：权利要求1所述的融合蛋白；以及，药学上可接受的载体。


6.如权利要求5所述的免疫组合物，其特征在于：所述药学上可接受的载体包括白油、硬脂酸铝、司本、吐温中的任意一种或者两种以上的组合。


7.如权利要求1所述融合蛋白的制备方法，其特征在于包括：
S1、将所述融合蛋白的编码基因克隆到杆状病毒表达系统转移载体上，获得重组表达载体；
S2、将所述重组杆状病毒转移载体与杆状病毒基因组质粒共转染昆虫细胞，筛选获得重组杆状病毒；
S3、将所述重组...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹文龙，孔迪，滕小锘，易小萍，张大鹤，
申请(专利权)人：苏州世诺生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32