日本乙型脑炎病毒基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种日本乙型脑炎病毒基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用。所述疫苗包含重组蛋白以及医药学上可接受的载剂，所述重组蛋白具有SEQ ID NO:2所示序列。本发明专利技术提供的所述疫苗安全性高，免疫原性好，能够在动物体内产生较强的体液免疫，免疫后的动物能够抵御强毒攻毒，并且还可以使用生物反应器大规模无血清悬浮培养制备，具有质控容易、批次间稳定、生产成本低等优点。

【技术实现步骤摘要】
日本乙型脑炎病毒基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用
本专利技术涉及一种基因工程疫苗，具体涉及一种日本乙型脑炎病毒基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用，属于动物免疫药物

技术介绍
日本乙型脑炎（JapaneseEncephalitis，JE）又称为流行性乙型脑炎（简称乙脑），是由日本乙型脑炎病毒（JapaneseEncephalitisVirus，JEV）引起的一种以蚊虫为媒介的人畜共患自然疫源性传染病。JE可感染多种生物如猪、马、牛、羊、鼠、犬和人等，临床上以高热、意识障碍、惊厥或抽搐、呼吸衰竭、运动及反射障碍等神经症状为特征。该病具有明显的季节性和一定的地域性，多发生于夏秋蚊虫孽生的季节，猪是JEV主要的储存宿主和扩散宿主之一，一般在蚊-猪-蚊三者之间形成循环感染，也可以通过猪-蚊-人途径感染人类。因此预防和控制病毒的传播不仅对养殖业而且对人类健康都具有十分重要的意义。世界动物卫生组（OIE）将JE划归为B类传染病，我国农业部将其列为乙类法定传染病和二类动物疫病。JEV属于黄病毒科（Flaviviridae）黄病毒属（Flavivirus），有囊膜，呈球形，二十面体对称。其基因组为单股正链RNA，全长约11kb，含有一个长的开放阅读框（ORF），编码多聚蛋白。多聚蛋白通过蛋白酶剪切为三个结构蛋白：核衣壳蛋白C蛋白、膜蛋白前体蛋白prM、纤突糖蛋白E蛋白和七个非结构蛋白：NSl、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5。E蛋白为病毒主要的结构蛋白，是JEV的重要抗原蛋白，具有与细胞表面受体结合的能力，诱导机体产生中和抗体，与病毒毒力、致病性、膜融合、免疫保护、血凝反应力和血清特异性等密切相关。乙脑的传播主要以蚊虫叮咬为主，夏秋季蚊虫繁殖快，环境难控制，防蚊灭蚊效果不理想，因此大规模的疫苗接种成为乙脑防控的主要措施。现今广泛使用的JEV疫苗主要有灭活疫苗和减毒活疫苗两种，但灭活苗在应用的过程中存在副反应多、生产和纯化工艺复杂、生产设施要求高，生产成本高、抗体保持水平不高等缺点；减毒活疫苗中SA14-14-2减毒株从原代仓鼠肾细胞（PHK）经过多次传代多次蚀斑筛选纯化得到，其来源细胞系不被FDA认可，应用范围小，具有返祖风险性，纯化工艺也有待改善。鉴于此，业界亟需发展出一种安全性高、免疫原性强的JEV基因工程亚单位疫苗。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于提供一种日本乙型脑炎病毒基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用，以克服现有技术中的不足。为实现前述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案包括：本专利技术实施例提供了一种重组蛋白，其具有SEQIDNO:2所示序列或者与SEQIDNO:2的全长序列95％以上相同的序列。即，本专利技术实施例提供的重组蛋白的氨基酸序列可以是原始序列，增加或截短的序列。本专利技术实施例还提供了用于编码所述重组蛋白的编码基因。在一些实施方式中，所述的编码基因具有SEQIDNO:1所示序列或者与SEQIDNO:1的全长序列95％以上相同的序列。本专利技术实施例还提供了一种重组载体，其包含所述重组蛋白的编码基因。在一些实施方式中，所述重组载体包括但不限于pFastBac1、pVL1393、pFastBacdual等，并优选采用pFastBac1。本专利技术实施例还提供了一种宿主细胞，其包含所述重组蛋白的编码基因。在一些实施方式中，所述宿主细胞选自昆虫细胞，例如Sf9细胞系，优选的，所述Sf9细胞系包括但不限于Sf9、HighFive或Sf21细胞，更优选为Sf9细胞。本专利技术实施例还提供了一种免疫组合物，其特征在于包括：所述的重组蛋白；以及，医药学上可接受的载剂。在一些实施方式中，所述医药学上可接受的载剂包括但不限于MONTANIDEISA206VG、MONTANIDEISA201VG、MONTANIDEISA15VG、液体石蜡、樟脑油、植物细胞凝集素之中的任意一种或者两种以上的组合，优选为MONTANIDEISA201VG。本专利技术实施例还提供了一种重组蛋白的制备方法，其包括：将所述重组蛋白的编码基因克隆到穿梭载体中，获得含有目的基因的重组穿梭载体；将所述重组穿梭载体转化感受态细胞，并分离获得含有目的基因表达框的重组杆状病毒基因组质粒；以所述重组杆状病毒基因组质粒转染昆虫细胞，并获得重组杆状病毒；将所述重组杆状病毒接种昆虫细胞并进行培养，之后分离获得所述重组蛋白。在一些实施方式中，所述穿梭载体包括但不限于pFastBac1、pVL1393、pFastBacdual等，优选为pFastBac1。在一些实施方式中，所述昆虫细胞包括但不限于Sf9、HighFive或Sf21细胞等，优选为Sf9细胞。本专利技术实施例还提供了一种日本乙型脑炎病毒基因工程亚单位疫苗的制备方法，其包括：采用前述的任一种方法制备重组蛋白，并将所述重组蛋白与医药学上可接受的载剂混合。本专利技术实施例还提供了所述重组蛋白或所述免疫组合物在制备日本乙型脑炎病毒检测试剂，在生产用于在受试动物中诱导针对日本乙型脑炎病毒抗原的免疫反应的药剂，或者，在生产用于预防动物受日本乙型脑炎病毒感染的药剂中的用途。本专利技术实施例还提供了所述重组蛋白或所述免疫组合物在制备日本乙型脑炎病毒基因工程亚单位疫苗中的用途。本专利技术实施例提供了一种日本乙型脑炎病毒基因工程亚单位疫苗，其包含前述的任一种免疫组合物。进一步的，所述疫苗还可包含医药学上可接受的载剂。本专利技术实施例还提供了包含所述重组蛋白的编码基因的重组载体或宿主细胞在生产用于检测动物受日本乙型脑炎病毒感染的试剂的用途。本专利技术实施例还提供了包含所述重组蛋白的编码基因的重组载体或宿主细胞在生产用于在受试动物中诱导针对日本乙型脑炎病毒抗原的免疫反应的药剂的用途。本专利技术实施例还提供了包含所述重组蛋白的编码基因的重组载体或宿主细胞在生产用于预防动物受日本乙型脑炎病毒感染的药剂的用途。本专利技术实施例还提供了一种诱导针对日本乙型脑炎病毒抗原的免疫反应的方法，所述方法包括向受试动物施用所述日本乙型脑炎病毒基因工程亚单位疫苗。本专利技术实施例还提供了一种保护受试动物免受日本乙型脑炎病毒感染的方法，所述方法包括向受试动物施用所述日本乙型脑炎病毒基因工程亚单位疫苗。本专利技术实施例还提供了一种适用于在受试动物中产生针对日本乙型脑炎病毒感染的免疫反应的疫苗，所述疫苗包含：本专利技术的重组蛋白以及佐剂分子。如本说明书所述的“佐剂”意指被添加到本说明书所述的疫苗中来增强由下文所述编码核酸序列的所编码的抗原的免疫原性的任何分子。例如，所述佐剂可为IL-12、IL-15、IL-28、CTACK、TECK、血小板源性生长因子(PDGF)、TNFα、TNFβ、GM-CSF、表皮生长因子(EGF)、IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-18、IL-21、IL-31、IL-33或其组合；并且在一些实施方式中，可为IL-12本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.重组蛋白，其具有SEQ ID NO:2所示序列。/n

【技术特征摘要】
1.重组蛋白，其具有SEQIDNO:2所示序列。


2.用于编码权利要求1所述重组蛋白的编码基因。


3.如权利要求2所述的编码基因，其特征在于：它具有SEQIDNO:1所示序列。


4.重组载体，其包含权利要求1所述重组蛋白的编码基因。


5.如权利要求4所述的重组载体，其特征在于：所述重组载体包括pFastBac1、pVL1393或pFastBacdual。


6.宿主细胞，其包含权利要求1所述重组蛋白的编码基因。


7.如权利要求6所述的宿主细胞，其特征在于：所述宿主细胞为昆虫细胞，所述昆虫细胞包括Sf9、HighFive或Sf21细胞。


8.一种免疫组合物，其特征在于包括：权利要求1所述的重组蛋白；以及，医药学上可接受的载剂。


9.如权利要求8所述的免疫组合物，其特征在于：所述医药学上可接受的载剂包括MONTANIDEISA206VG、MONTANIDEISA201VG、MONTANIDEISA15VG、液体石蜡、樟脑油、植物细胞凝集素中的...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹文龙，孔迪，滕小锘，张大鹤，
申请(专利权)人：苏州世诺生物技术有限公司，苏州米迪生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32