副鸡禽杆菌基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种副鸡禽杆菌基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用。所述疫苗包含融合蛋白以及医药学上可接受的载剂，所述融合蛋白具有SEQ ID NO:2所示序列。本发明专利技术提供的所述疫苗无任何毒性，安全性高，免疫原性好，能够在鸡体内产生较强的体液免疫，免疫后的鸡能够抵御强毒攻毒，并且还可以使用生物反应器大规模无血清悬浮培养制备，具有质控容易、批次间稳定、生产成本低等优点。

【技术实现步骤摘要】
副鸡禽杆菌基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用
本专利技术涉及一种基因工程疫苗，具体涉及一种副鸡禽杆菌基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用，属于动物免疫药物

技术介绍
鸡传染性鼻炎（InfectiousCoryza，IC）是由副鸡禽杆菌（Avibacteriumparagallinarum，Apg）引起的一种急性鸡上呼吸道传染病。该病发生后可引起蛋鸡产蛋量下降、育成鸡生长发育受阻和淘汰率增加、肉鸡肉质下降等问题；剖检后以鼻腔和窦粘膜呈现急性卡他性炎症，呼吸道粘膜充血、发红和肿胀为主要特征。Apg可感染任何年龄段鸡群，4周龄以上的育成鸡和产蛋鸡的敏感性较高。病鸡与隐形带菌鸡是主要的传染源，Apg通过消化道排泄物、呼吸道、大气、尘埃和饲料等传播，后期容易和其他病原体混合感染，造成鸡群死亡率很高。目前IC在世界许多地方发生和流行，给养鸡业造成巨大经济损失。Apg原名副鸡嗜血杆菌（Haemophilusparagallinarum，Hpg），属于巴氏杆菌科禽杆菌属，是一种革兰氏阴性的细小杆菌，长1-3µm，宽0.4-0.8µm，两极浓染、没有运动性、不形成芽孢，毒力菌株往往具有荚膜，但这种能力在体外传代时容易丧失。根据血凝抑制试验的分型方法，Apg分为A型、B型和C型三个血清型，目前的研究结果表明A、C两型Apg均具有不同程度的致病力，而B型致病力因菌株而异。人工感染任一型的Apg后可对其它两型感染产生一定程度的抵抗力，但三者的灭活菌体不存在型间交叉免疫，A型存在型内的交叉免疫，B型存在株间抗原多样性和部分交叉免疫。血凝素（Haemagglutinin，HA）是Apg的主要抗原成分之一，也是Apg分型的基础，在细菌定植过程中起关键作用。HA作为Apg的一种保护性抗原，不同血清型的Apg菌株的HA基因的同源性在95％以上，可与Apg的阳性血清发生反应，因此HA也是研究Apg基因工程亚单位疫苗的最适合抗原成分。菌毛是革兰阴性菌菌体表面密布的细而短的丝状物，由结构蛋白亚单位菌毛蛋白（pilin）组成，具有抗原性。在巴氏杆菌科的其他菌属中，菌毛作为细菌表面的一种常在结构，在细菌与细胞作用、DNA的摄取和转移以及生物被膜的形成中都发挥了重要的作用。定期进行免疫接种是我国和世界许多国家预防IC的重要手段，目前国际上普遍使用的多为灭活疫苗，大多只包含A型和C型血清型，但Apg的三个血清型之间不具有交叉保护力，导致灭活疫苗不能起到全面地保护作用，而且Apg还含有LPS等毒素物质，大量接种会带毒副作用，从而影响鸡的产蛋和生长。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于提供一种副鸡禽杆菌基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用，以克服现有技术中的不足。为实现前述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案包括：本专利技术实施例提供了一种融合蛋白，其具有SEQIDNO:2所示序列或者与SEQIDNO:2的全长序列95％以上相同的序列。即，本专利技术实施例提供的所述融合蛋白的氨基酸序列可以是原始序列，增加或截短的序列。本专利技术实施例还提供了用于编码所述融合蛋白的基因。在一些实施方式中，所述的基因具有SEQIDNO:1所示序列或者与SEQIDNO:1的全长序列95％以上相同的序列。本专利技术实施例还提供了包含所述融合蛋白的编码基因的重组载体。在一些实施方式中，所述重组载体包括但不限于pFastBac1、pVL1393、pFastBacDual等，例如可以优选采用pFastBac1。本专利技术实施例还提供了包含所述融合蛋白的编码基因的宿主细胞。在一些实施方式中，所述宿主细胞选自昆虫细胞，例如Sf9细胞系，优选的，所述Sf9细胞系包括但不限于Sf9、HighFive或Sf21细胞，更优选为Sf9细胞。本专利技术实施例还提供了一种免疫组合物，其特征在于包括：所述的融合蛋白；以及，医药学上可接受的载剂。在一些实施方式中，所述医药学上可接受的载剂包括但不限于白油、硬脂酸铝、司本、吐温中的任意一种或者两种以上的组合。本专利技术实施例还提供了一种融合蛋白的制备方法，其包括：提供所述融合蛋白的编码基因；将所述融合蛋白的编码基因克隆到穿梭载体中，获得含有目的基因的重组穿梭载体；将所述重组穿梭载体转化感受态细胞，并分离获得含有目的基因表达框的重组杆状病毒基因组质粒；以所述重组杆状病毒基因组质粒转染昆虫细胞，并获得重组杆状病毒；将所述重组杆状病毒接种昆虫细胞并进行培养，之后分离获得所述融合蛋白。在一些实施方式中，所述穿梭载体包括但不限于pFastBac1、pVL1393、pFastBacDual等，例如可以优选采用pFastBac1。在一些实施方式中，所述昆虫细胞可以包括但不限于Sf9、HighFive或Sf21细胞等，优选为Sf9细胞。本专利技术实施例还提供了一种副鸡禽杆菌基因工程亚单位疫苗的制备方法，其包括：采用前述的任一种方法制备融合蛋白，并将所述融合蛋白与医药学上可接受的载剂混合。本专利技术实施例还提供了所述融合蛋白或所述免疫组合物在制备副鸡禽杆菌检测试剂，在生产用于在受试动物中诱导针对副鸡禽杆菌抗原的免疫反应的药剂，或者，在生产用于预防动物受副鸡禽杆菌感染的药剂中的用途。本专利技术实施例还提供了所述融合蛋白或所述免疫组合物在制备副鸡禽杆菌基因工程亚单位疫苗中的用途。本专利技术实施例提供了一种副鸡禽杆菌基因工程亚单位疫苗，其包含前述的任一种免疫组合物。进一步的，所述疫苗还可包含医药学上可接受的载剂。本专利技术实施例还提供了包含所述融合蛋白的编码基因的重组载体或宿主细胞在生产用于检测动物受副鸡禽杆菌感染的试剂的用途。本专利技术实施例还提供了包含所述融合蛋白的编码基因的重组载体或宿主细胞在生产用于在受试动物中诱导针对副鸡禽杆菌抗原的免疫反应的药剂的用途。本专利技术实施例还提供了包含所述融合蛋白的编码基因的重组载体或宿主细胞在生产用于预防动物受副鸡禽杆菌感染的药剂的用途。本专利技术实施例还提供了一种诱导针对副鸡禽杆菌抗原的免疫反应的方法，所述方法包括向受试动物施用所述副鸡禽杆菌基因工程亚单位疫苗。本专利技术实施例还提供了一种保护受试动物免受副鸡禽杆菌感染的方法，所述方法包括向受试动物施用所述副鸡禽杆菌基因工程亚单位疫苗。本专利技术实施例还提供了一种适用于在受试动物中产生针对副鸡禽杆菌感染的免疫反应的疫苗，所述疫苗包含：本专利技术的融合蛋白以及佐剂分子。如本说明书所述的“佐剂”意指被添加到本说明书所述的疫苗中来增强由下文所述编码核酸序列的所编码的抗原的免疫原性的任何分子。例如，所述佐剂可为IL-12、IL-15、IL-28、CTACK、TECK、血小板源性生长因子(PDGF)、TNFα、TNFβ、GM-CSF、表皮生长因子(EGF)、IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-18、IL-21、IL-31、IL-33或其组合；并且在一些实施方式中，可为IL-12、IL-15、IL-28或RANT本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种融合蛋白，其具有SEQ ID NO:2所示序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白，其具有SEQIDNO:2所示序列。


2.用于编码权利要求1所述融合蛋白的基因。


3.如权利要求2所述的基因，其特征在于：所述基因具有SEQIDNO:1所示序列。


4.包含权利要求1所述融合蛋白的编码基因的重组载体或宿主细胞。


5.一种免疫组合物，其特征在于包括：权利要求1所述的融合蛋白；以及，医药学上可接受的载剂。


6.如权利要求5所述的免疫组合物，其特征在于：所述医药学上可接受的载剂包括白油、硬脂酸铝、司本、吐温之中的任意一种或者两种以上的组合。


7.一种融合蛋白的制备方法，其特征在于包括：
提供权利要求1所述融合蛋白的编码基因；
将所述融合蛋白的编码基因克隆到穿梭载体中，获得含有目的基因的重组穿梭载体；
将所述重组穿梭载体转化感受态细胞，并分离获得含有目的基因表达框的重组杆状病毒基因组质粒；
以...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹文龙，孔迪，滕小锘，张大鹤，
申请(专利权)人：苏州世诺生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32