包含非结构蛋白的寨卡病毒嵌合多表位及其在免疫原性组合物中的用途制造技术

本发明专利技术涉及一种包含非结构蛋白的寨卡病毒(ZIKV)嵌合多表位及其在免疫原性组合物中的用途。本发明专利技术提供了工具，尤其是表达嵌合多表位的多核苷酸、载体和细胞。本发明专利技术还涉及包含所述多表位、多核苷酸、载体或宿主细胞中的至少一种的组合物或疫苗，其用于预防人对象的ZIKV感染或用于预防人对象的ZIKV和登革热病毒(DENV)感染。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含非结构蛋白的寨卡病毒嵌合多表位及其在免疫原性组合物中的用途本专利技术涉及一种包含非结构蛋白的寨卡病毒(ZIKV)嵌合多表位及其在免疫原性组合物中的用途。本专利技术提供了工具(mean)，尤其是表达所述嵌合多表位的多核苷酸、载体和细胞。本专利技术还涉及包含所述多表位、多核苷酸、载体或宿主细胞中的至少一种的组合物或疫苗，其用于预防人对象的ZIKV感染或用于预防人对象的ZIKV和登革热病毒(DENV)感染。寨卡病毒(ZIKV)是一种由伊蚊属(Aedes)蚊子传播的黄病毒，它是与黄热病病毒、登革热病毒(DENV)和西尼罗病毒密切相关的单股正链RNA病毒(KunoGetal.，1998，JVirol.72(1)：73-83)。它最初于1947年在乌干达的寨卡森林中被分离(DickGWetal.，1952，TransactionsoftheRoyalSocietyofTropicalMedicineandHygiene46(5)：509-520)，在FederatedStatesofMicronesia的YapIsland首次引起爆炸性爆发(DuffyMR，etal.2009，TheNewEnglandjournalofmedicine360(24)：2536-2543)。随后的爆发在2013-2014年发生于法属波利尼西亚和其他南太平洋群岛以及最近发生于美洲，并有较高的病例数(Cao-LormeauVM，etal.2014，Emerginginfectiousdiseases20(6)：1085-1086；CamposGS，etal.2015，Emerginginfectiousdiseases21(10)：1885-1886；Dupont-RouzeyrolM，etal.2015，Emerginginfectiousdiseases21(2)：381-382；ZanlucaC，etal.2015，MemInstOswaldoCruz110(4)：569-572；PachecoO，etal.2016，ZikaVirusDiseaseinColombia-PreliminaryReport.TheNewEnglandjournalofmedicine)。尽管最初被认为仅会导致轻度自限性疾病，但直到最近随着在2013年和2015年在法属波利尼西亚和巴西爆发，才确定ZIKV与神经系统并发症(例如格林-巴利综合征或先天性畸形)之间的因果关系(OehlerE，etal.2014EuroSurveill19(9)；Cao-LormeauVM，etal.2016，Lancet387(10027)：1531-1539；CauchemezS，etal.2016，Lancet387(10033)：2125-2132；SoaresdeAraujoJS，etal.2016，BullWorldHealthOrgan94(11)：835-840)。除了由于NS1中的自发突变导致ZIKV的亚洲谱系(Asianlineage)的感染力增强之外(LiuY，etal.2017，Nature545(7655)：482-486)，这可以解释其最近在美洲的重新出现(EnfissiAetal.，Lancet387(10015)：227-228)，如今最重要的问题之一涉及ZIKV流行地区高水平的DENV血清阳性率(KatzelnickLC，etal.，TheLancet.Infectiousdiseases17(3)：e88-e100)。实际上，最近的研究表明，抗DENV预先存在的抗体可以增强ZIKV感染并增加疾病严重性(DejnirattisaiW，etal.2016NatImmunol17(9)：1102-1108；StettlerK，etal.2016Science353(6301)：823-826；PaulLM，etal.2016DengueVirusAntibodiesEnhanceZikaVirusInfection.BioRxiv；PriyamvadaL，etal.2016，ProcNatlAcadSciUSA113(28)：7852-7857；BardinaSV，etal.2017，Science356(6334)：175-180)。考虑到这些限制因素，以及缺乏针对ZIKV感染的适当治疗，迫切需要开发针对这种传染病的疫苗。虽然针对DENV或ZIKV的E蛋白的抗体显示出高度的交叉反应性，但是T细胞是否可交叉反应，取决于靶向的肽。在针对这些病毒之一免疫的人类供体中确实观察到低程度的DENV和ZIKV之间的CD4T细胞交叉反应性(StettlerK，etal.2016，Science353(6301)：823-826)，而用ZIKV攻击后，在DENV免疫小鼠中鉴定出DENV/ZIKV交叉反应性和保护性CD8T细胞(WenJ，etal.2017，NatMicrobiol2：17036)。考虑DENV和ZIKV之间衣壳和包膜结构蛋白以及非结构蛋白NS3和NS5(分别代表DENV特异性CD4和CD8T细胞的主要靶)的序列相同性，以及DENV-特异性T细胞的保护作用(WeiskopfDetal.，ProcNatlAcadSciUSA2013，110(22)：E2046-2053；WeiskopfDetal.，ProcNatlAcadSciUSA2015，112(31)：E4256-4263，RivinoL&LimMQ，2016，Immunology150(2)：146-154)，因此目前的工作方向是T细胞表位作图，以设计针对ZIKV的新型更有效的疫苗。通过建模可能结合ZIKV蛋白质组中不同的HLAI类或II类等位基因的潜在表位，并通过分析表达人HLA-B*0702和HLA-A*0101分子的转基因小鼠中离体T细胞应答，来进行对T细胞抗原的预测(WenJ，etal.2017，NatMicrobiol2：17036，23-25)。令人惊讶的是，在这些DENV免疫小鼠中鉴定出DENV/ZIKV交叉反应性T细胞，这可以介导针对ZIKV感染的保护作用(WenJ，etal.2017，NatMicrobiol2∶17036，23-25)。该结果与伴随的研究相一致，证明CD8+T细胞在小鼠针对ZIKV的免疫保护中的保护作用(ElongNgonoA，etal.2017，Cellhost&microbe21(1)：35-46)。然而，虽然这些研究表明CD8+T细胞在小鼠中针对ZIKV感染的保护作用，并且虽然在DENV初次和DENV预先暴露的供体中已鉴定出几种衍生自ZIKV的肽(GrifoniA，etal.2017，J.Virol.DOI：10.1128/JVI.01469-17，于2017年10月4日在线发布)，对于ZIKV特有的或与DENV共享的人T细胞表位的精确鉴定仍然不完整。在本研究中，专利技术人从仅有ZIKV感染或有DENV和ZIKV感染史的献血者中鉴定了这些表位。使用来自具有先前的ZIKV感染的哥伦比亚献血者的PBMC，通过酶联免疫吸附斑点(ELISPOT)测定，量化针对覆盖整个ZIKV蛋白质组序本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种嵌合多表位，其包含：(i)至少以下(a)和(b)的T细胞表位，或(ii)至少以下(a)和(c)的T细胞表位，或(iii)至少以下(b)和(c)的T细胞表位，或者其T细胞表位变体：/n(a)寨卡病毒(ZIKV)的非结构(NS)NS1蛋白的T细胞表位，其包含选自SEQ ID NO：10-12、14、15、17-19、23、24和78-83的氨基酸序列或由选自SEQ ID NO：10-12、14、15、17-19、23、24和78-83的氨基酸序列组成，/n(b)ZIKV的NS3蛋白的T细胞表位，其包含选自SEQ ID NO：28、29、31、33-35、84和85的氨基酸序列或由选自SEQ ID NO：28、29、31、33-35、84和85的氨基酸序列组成，/n(c)ZIKV的NS5蛋白的T细胞表位，其包含选自SEQ ID NO：46、48-50、52-55、57-60、62、64、67、69、72、73和86-91的氨基酸序列或由选自SEQ ID NO：46、48-50、52-55、57-60、62、64、67、69、72、73和86-91的氨基酸序列组成，/n所述T细胞表位变体通过一个或多个氨基酸残基的点突变而不同于(a)、(b)或(c)所述T细胞表位的原始氨基酸序列，并且与所述原始序列具有至少90％的序列相同性或超过95％的序列相同性或99％的序列相同性。/n...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171109 EP 17306553.31.一种嵌合多表位，其包含：(i)至少以下(a)和(b)的T细胞表位，或(ii)至少以下(a)和(c)的T细胞表位，或(iii)至少以下(b)和(c)的T细胞表位，或者其T细胞表位变体：
(a)寨卡病毒(ZIKV)的非结构(NS)NS1蛋白的T细胞表位，其包含选自SEQIDNO：10-12、14、15、17-19、23、24和78-83的氨基酸序列或由选自SEQIDNO：10-12、14、15、17-19、23、24和78-83的氨基酸序列组成，
(b)ZIKV的NS3蛋白的T细胞表位，其包含选自SEQIDNO：28、29、31、33-35、84和85的氨基酸序列或由选自SEQIDNO：28、29、31、33-35、84和85的氨基酸序列组成，
(c)ZIKV的NS5蛋白的T细胞表位，其包含选自SEQIDNO：46、48-50、52-55、57-60、62、64、67、69、72、73和86-91的氨基酸序列或由选自SEQIDNO：46、48-50、52-55、57-60、62、64、67、69、72、73和86-91的氨基酸序列组成，
所述T细胞表位变体通过一个或多个氨基酸残基的点突变而不同于(a)、(b)或(c)所述T细胞表位的原始氨基酸序列，并且与所述原始序列具有至少90％的序列相同性或超过95％的序列相同性或99％的序列相同性。


2.根据权利要求1所述的嵌合多表位，其至少包含(a)、(b)和(c)的T细胞表位或其T细胞表位变体。


3.根据权利要求1或2所述的嵌合多表位，其由以下组成：(i)(a)和(b)的T细胞表位，或(ii)(a)和(c)的T细胞表位，或(iii)(b)和(c)的T细胞表位，或(iv)(a)、(b)和(c)的T细胞表位，或其T细胞表位变体。


4.根据权利要求1-3中任一项所述的嵌合多表位，其中(a)的T细胞表位包含选自SEQIDNO：17、23和78-83的氨基酸序列或由选自SEQIDNO：17、23和78-83的氨基酸序列组成，(b)的T细胞表位包含选自SEQIDNO：31、33、84和85的氨基酸序列或由选自SEQIDNO：31、33、84和85的氨基酸序列组成，并且(c)的T细胞表位包含选自SEQIDNO：46、48、52、57、62、64、67和86-91的氨基酸序列或由选自SEQIDNO：46、48、52、57、62、64、67和86-91的氨基酸序列组成。


5.根据权利要求1至3中任一项所述的嵌合多表位，其中(a)的T细胞表位包含SEQIDNO：11、12、17-19、23、24、78、80和83的氨基酸序列或由SEQIDNO：11、12、17-19、23、24、78、80和83的氨基酸序列组成，(b)的T细胞表位包含SEQIDNO：28、31、33、34、84和85的氨基酸序列或由SEQIDNO：28、31、33、34、84和85的氨基酸序列组成，并且(c)的T细胞表位包含SEQIDNO：48-50、52-55、57、58、60、62、67、88、89和90的氨基酸序列或由SEQIDNO：48-50、52-55、57、58、60、62、67、88、89和90的氨基酸序列组成。


6.根据权利要求1至5中任一项所述的嵌合多表位，其还包含选自以下的ZIKV蛋白的至少一个T细胞表位：
(i)ZIKV的C蛋白的T细胞表位，其包含选自SEQIDNO：1、2、4-6和75的氨基酸序列或由选自SEQIDNO：1、2、4-6和75的氨基酸序列组成，
(ii)ZIKV的E蛋白的T细胞表位，其包含选自SEQIDNO：7、76和77的氨基酸序列或由选自SEQIDNO：7、76和77的氨基酸序列组成，
(iii)ZIKV的NS2B蛋白的T细胞表位，其包含SEQIDNO：25的氨基酸序列或由SEQIDNO：25的氨基酸序列组成，
(iv)ZIKV的NS4A蛋白的T细胞表位，其包含SEQIDNO：36的氨基酸序列或由SEQIDNO：36的氨基酸序列组成，以及
(v)ZIKV的NS4B蛋白的T细胞表位，其包含选自SEQIDNO：40-43的氨基酸序列或由选自SEQIDNO：40-43的氨基酸序列组成。


7.根据权利要求6所述的嵌合多表位，其中所述ZIKV蛋白的至少一个T细胞表位选自：
-ZIKV的C蛋白的T细胞表位，其包含选自SEQIDNO：1、2、4-6和75的氨基酸序列或由选自SEQIDNO：1、2、4-6和75的氨基酸序列组成，以及
-ZIKV的NS4B蛋白的T细胞表位，其包含选自SEQIDNO：40-43的氨基酸序列或由SEQIDNO：40-43的氨基酸序列组成。


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【专利技术属性】
技术研发人员：C·罗特，E·西蒙洛列里，A·撒金塔巴伊，F·德尔加多，
申请(专利权)人：巴斯德研究院，埃尔博斯克大学，
类型：发明
国别省市：法国;FR