靶向HLA-A的嵌合抗原受体、编码基因、CAR-Tregs细胞及其制备方法、用途技术

本发明专利技术公开一种靶向HLA‑A的嵌合抗原受体、编码基因、重组表达载体、CAR‑Tregs细胞及其制备方法、用途，所述嵌合抗原受体包括信号肽、抗原结合结构域、铰链区、跨膜区、共刺激因子和胞内信号传导域；所述抗原结合域为抗HLA‑A11抗体或抗HLA‑A33抗体的结合结构域，本发明专利技术CAR‑Tregs细胞为靶向HLA‑A11或HLA‑A33的嵌合抗原受体修饰的Treg细胞，可抑制特异性免疫反应，可用于实体器官移植术后排斥反应的抑制。

【技术实现步骤摘要】
靶向HLA-A的嵌合抗原受体、编码基因、CAR-Tregs细胞及其制备方法、用途
本专利技术涉及分子基因
，具体涉及一种靶向HLA-A的嵌合抗原受体、编码基因、重组表达载体、CAR-Tregs细胞及制备方法、用途。
技术介绍
我国现存大约有30万实体器官移植受者，其术后有面临排斥反应的巨大风险。现阶段免疫抑制剂的使用虽然可以有效降低排斥风险，提高移植物存活率，但由于其是降低机体整体免疫功能，特异性不高，因此导致肿瘤、感染等发病风险增高。同时，由于免疫抑制剂均具有一定的药物毒性，长期使用容易引发一些慢性疾病，如慢性肾损伤，高尿酸血症等。
技术实现思路
有鉴于此，本申请提供一种靶向HLA-A的嵌合抗原受体、编码基因、重组表达载体、CAR-Tregs细胞及其制备方法、用途，本专利技术CAR-Tregs细胞为靶向HLA-A11或HLA-A33的嵌合抗原受体修饰的Treg细胞，可抑制特异性免疫反应，可用于实体器官移植术后排斥反应的抑制。为解决以上技术问题，本申请提供的技术方案是一种靶向HLA-A的嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包括信号肽、抗原结合结构域、铰链区、跨膜区、共刺激因子和胞内信号传导域；所述抗原结合域为抗HLA-A11抗体或抗HLA-A33抗体的结合结构域。优选的，所述抗HLA-A11抗体为靶向HLA-A11的单链抗体，其包括串联的HLA-A11单链抗体重链VH、HLA-A11单链抗体轻链VL；HLA-A11单链抗体重链VH位于所述靶向HLA-A11的单链抗体的N端，HLA-A11单链抗体轻链VL位于靶向所述HLA-A11的单链抗体的C端；HLA-A11单链抗体重链VH编码基因如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列，HLA-A11单链抗体轻链VL编码基因如SEQIDNO.2所示的核苷酸序列；所述抗HLA-A33抗体为靶向HLA-A33的单链抗体，其包括串联的HLA-A33单链抗体重链VH、HLA-A33单链抗体轻链VL；HLA-A33单链抗体重链VH位于所述靶向HLA-A33的单链抗体的N端，HLA-A33单链抗体轻链VL位于靶向所述HLA-A33的单链抗体的C端；HLA-A33单链抗体重链VH编码基因如SEQIDNO.3所示的核苷酸序列，HLA-A33单链抗体轻链VL编码基因如SEQIDNO.4所示的核苷酸序列；HLA-A11单链抗体重链VH和HLA-A11单链抗体轻链VL，HLA-A33单链抗体重链VH和HLA-A33单链抗体轻链VL均通过连接肽连接。优选的，所述连接肽为本领域常用的连接肽。优选的，所述连接肽编码基因如SEQIDNO.5所示的核苷酸序列。优选的，所述信号肽选自CD8信号肽、CD28信号肽和CD4信号肽中的任意一种；所述铰链区选自CD8α铰链区、IgD铰链区、IgG1FcCH2CH3铰链区、IgG4FcCH2CH3铰链区和4-1BB铰链区中的一种或多种；所述跨膜区选自CD28跨膜区、CD8跨膜区、CD3ζ跨膜区、CD134跨膜区、CD137跨膜区、ICOS跨膜区、DAP10跨膜区和4-1BB跨膜区中的一种或多种；所述共刺激因子选自CD27、CD28、4-1BB、OX40、CD30、CD40和ICOS中的一种或多种；所述胞内信号传导域为CD28信号传导域或CD3ζ信号传导域。优选的，所述信号肽为CD8信号肽，所述铰链区为CD8α铰链区和4-1BB铰链区，所述跨膜区为CD8跨膜区和4-1BB跨膜区，所述共刺激因子为4-1BB胞内信号域，所述胞内信号传导域为CD3ζ胞内信号域。优选的，从N端到C端，所述嵌合抗原受体依次包括CD8信号肽、抗原结合结构域、CD8α铰链区、CD8跨膜区、4-1BB铰链区、4-1BB跨膜区、4-1BB胞内信号域和CD3ζ信号传导域；所述抗原结合域为抗HLA-A11抗体或抗HLA-A33抗体的结合结构域。优选的，CD8信号肽编码基因如SEQIDNO.6所示的核苷酸序列；CD8α铰链区如SEQIDNO.7所示的核苷酸序列；CD8跨膜区如SEQIDNO.8所示的核苷酸序列；4-1BB铰链区如SEQIDNO.9所示的核苷酸序列；4-1BB跨膜区如SEQIDNO.10所示的核苷酸序列；4-1BB胞内信号域如SEQIDNO.11所示的核苷酸序列；CD3ζ信号传导域如SEQIDNO.12所示的核苷酸序列。本专利技术还提供了一种编码基因，其编码上述的嵌合抗原受体。优选的，所述编码基因的核苷酸序列如SEQIDNO.13或SEQIDNO.14所示。本专利技术还提供了一种重组表达载体，包括上述的编码基因。优选的，所述重组表达载体为慢病毒表达质粒。本专利技术还提供了一种CAR-Tregs细胞，所述的CAR-Tregs细胞是上述的嵌合抗原受体修饰的Treg细胞。本专利技术还提供了一种上述CAR-Tregs细胞的制备方法，包括：所述的嵌合抗原受体通过其编码的核酸序列转染到Treg细胞中表达。优选的，所述制备方法具体包括：(1)靶向HLA-A的嵌合抗原受体慢病毒表达质粒的构建；(2)靶向HLA-A的嵌合抗原受体慢病毒的制备；(3)用步骤(2)制备好的靶向HLA-A的嵌合抗原受体慢病毒转染Treg细胞。本专利技术提供了上述CAR-Tregs细胞在用于制备治疗或预防移植排斥、移植物抗宿主病症的药物中的应用，或在用于制备诱导移植耐受的药物中的应用。优选的，所述移植排斥为急性移植排斥、慢性移植排斥、肝移植排斥、肾移植排斥、心脏移植排斥、肺移植排斥。本申请与现有技术相比，其详细说明如下：本专利技术提供了一种嵌合抗原受体、编码基因、重组表达载体、CAR-Tregs细胞及制备方法、用途，本专利技术CAR-Tregs细胞为靶向HLA-A11或HLA-A33的嵌合抗原受体修饰的Treg细胞，Treg细胞是一类控制体内免疫反应性的T细胞亚群，其通过主动调节的方式抑制存在于正常机体内潜在的反应性T细胞的活化与增殖，本专利技术通过基因工程的方法，将普通Treg细胞改造成CAR-Tregs细胞，使其具有抑制体内特异性免疫反应的功能。且HLA-A基因的位点众多，本专利技术选择的HLA-A11、HLA-A33这两个位点用于治疗或预防移植排斥、移植物抗宿主病症，诱导移植耐受。同时，抗体序列设计的差异直接影响CAR-Tregs的结合效果，进一步影响其治疗相关病症的效果，本专利技术针对HLA-A11、HLA-A33抗原设计的单链抗体序列，得到的CAR-Tregs的结合效果好。本专利技术CAR-Tregs可以特异性激活Treg细胞，通过Treg细胞对T细胞的抑制作用，明显特异性抑制T细胞针对HLA-A11、HLA-A33抗原刺激引起的活化和增殖反应，可用于实体器官移植术后排斥反应的抑制，提高移植受者生存质量和时间，可用于用于制备治疗或预防移植排斥、移植物抗宿主病症的药物中的应用，或在用于制备诱导移植耐受的药物中的应用。附图说明图1为本专利技术慢病毒表本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种靶向HLA-A的嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体包括信号肽、抗原结合结构域、铰链区、跨膜区、共刺激因子和胞内信号传导域；所述抗原结合域为抗HLA-A11抗体或抗HLA-A33抗体的结合结构域。/n

【技术特征摘要】
1.一种靶向HLA-A的嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体包括信号肽、抗原结合结构域、铰链区、跨膜区、共刺激因子和胞内信号传导域；所述抗原结合域为抗HLA-A11抗体或抗HLA-A33抗体的结合结构域。


2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述抗HLA-A11抗体为靶向HLA-A11的单链抗体，其包括串联的HLA-A11单链抗体重链VH、HLA-A11单链抗体轻链VL；HLA-A11单链抗体重链VH位于所述靶向HLA-A11的单链抗体的N端，HLA-A11单链抗体轻链VL位于靶向所述HLA-A11的单链抗体的C端；HLA-A11单链抗体重链VH编码基因如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列，HLA-A11单链抗体轻链VL编码基因如SEQIDNO.2所示的核苷酸序列；
所述抗HLA-A33抗体为靶向HLA-A33的单链抗体，其包括串联的HLA-A33单链抗体重链VH、HLA-A33单链抗体轻链VL；HLA-A33单链抗体重链VH位于所述靶向HLA-A33的单链抗体的N端，HLA-A33单链抗体轻链VL位于靶向所述HLA-A33的单链抗体的C端；HLA-A33单链抗体重链VH编码基因如SEQIDNO.3所示的核苷酸序列，HLA-A33单链抗体轻链VL编码基因如SEQIDNO.4所示的核苷酸序列；
HLA-A11单链抗体重链VH和HLA-A11单链抗体轻链VL，HLA-A33单链抗体重链VH和HLA-A33单链抗体轻链VL均通过连接肽连接。


3.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述信号肽选自CD8信号肽、CD28信号肽和CD4信号肽中的任意一种；所述铰链区选自CD8α铰链区、IgD铰链区、IgG1FcCH2CH...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏亮，
申请(专利权)人：成都仕康美生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51