用于检测呼吸道感染病毒的核酸试剂、试剂盒、系统及方法技术方案

本公开涉及一种用于检测呼吸道感染病毒的核酸试剂，其中，所述核酸试剂包括分别彼此独立存放或互相任意混合存放的SEQ ID NO.1‑8所示的引物和SEQ ID NO.11‑14所示的探针。本公开通过以上所述引物和探针建立了检测新型冠状病毒、甲型流感病毒和乙型流感病毒的核酸试剂、试剂盒、系统及方法，同时加入内参基因作为对照，实现快速、全面、灵敏、特异、自动的检测结果判定，显著提高了对上述检测目标同时进行检测的灵敏性、特异性和简便性。

Nucleic acid reagent, kit, system and method for detecting respiratory tract infection virus

【技术实现步骤摘要】
用于检测呼吸道感染病毒的核酸试剂、试剂盒、系统及方法
本公开涉及生物
，具体地，涉及一种用于检测呼吸道感染病毒的核酸试剂、试剂盒、系统及方法。
技术介绍
呼吸道感染(Respiratorytractinfection，RTI)是一种常见疾病，广泛发生于任何年龄、性别及地域的人群中，对个人、家庭和社会造成了严重的疾病负担。病毒感染是引发呼吸道感染的重要因素，在发达国家，急性病毒性呼吸道感染是导致婴幼儿和儿童住院的首要因素；在发展中国家，急性病毒性呼吸道感染是导致婴幼儿和儿童死亡的首要因素。新型冠状病毒是2019年末首次发现的一种呼吸道感染病毒，被命名为2019-nCoV，能够引发严重的肺炎症状，严重时可以导致患者死亡。因此，早日对新型冠状病毒感染和普通呼吸道病毒感染进行诊断，早日对新型冠状病毒感染的患者进行隔离和治疗，对于遏制疫情发展、缓解社会压力极为重要。病毒的分离培养是呼吸道感染病毒检验的常用方法，其检验结果常被作为呼吸道病毒感染确诊的“金标准”，常用的培养细胞由人肺癌细胞(A59)、马丁达比犬肾细胞(MDCK)等，根据培养样本的不同，不同病毒培养的时间也有所不同，一般需要花费数日到两周不等，培养时间较长，不利于呼吸道病毒感染的快速检测，容易导致延误治疗，而且该方法的特异性和敏感性均较差，不适用于感染程度较轻时的早期诊断。
技术实现思路
本公开的目的是提供一种特异性和灵敏度高的、快速、准确检测呼吸道感染病毒的核酸试剂、试剂盒及系统。为了实现上述目的，本公开提供一种用于检测呼吸道感染病毒的核酸试剂，其中，所述核酸试剂包括分别彼此独立存放或互相任意混合存放的SEQIDNO.1-8所示的引物和SEQIDNO.11-14所示的探针。可选地，所述核酸试剂中，分别由SEQIDNO.1-8所示的引物的含量各自为0.4-0.6μmol，分别由SEQIDNO.11-14所示的探针的含量各自为0.1-0.3μmol。可选地，所述核酸试剂还包括内标对照；所述内标对照含有SEQIDNO.9-10所示的引物和SEQIDNO.15所示的探针，其中，分别由SEQIDNO.9-10所示的引物的含量各自为0.2-0.4μmol，由SEQIDNO.15所示的探针的含量为0.1-0.3μmol。可选地，所述核酸试剂包括A管和B管；A管含有SEQIDNO.1-4、9-10所示的引物和SEQIDNO.11-12、15所示的探针；B管含有SEQIDNO.5-8、9-10所示的引物和SEQIDNO.13-14、15所示的探针。可选地，SEQIDNO.11和13所示的探针具有第一荧光标记；SEQIDNO.12和14所示的探针具有第二荧光标记；SEQIDNO.15所示的探针具有第三荧光标记；所述第一荧光标记、所述第二荧光标记和所述第三荧光标记各不相同，且各自独立地选自FAM荧光标记、JOE荧光标记、CY5荧光标记、VIC荧光标记和ROX荧光标记中的一种。可选地，所述呼吸道感染病毒包括新型冠状病毒、甲型流感病毒和乙型流感病毒中的至少一种。本公开还提供一种用于检测呼吸道感染病毒的试剂盒，该试剂盒含有上述任意一项所述的核酸试剂，并且可选地，所述试剂盒还含有反应体系缓冲液、逆转录酶、DNA聚合酶、阳性对照和水中的至少一种。本公开还提供上述任意一项所述的核酸试剂在制备用于检测呼吸道感染病毒的试剂盒中的用途。本公开还提供一种用于检测呼吸道感染病毒的系统，该系统包括具有A管检测器和B管检测器的PCR仪、计算装置和输出装置；所述A管检测器和B管检测器分别为装载有上述任意一项所述的核酸试剂的核酸试剂储藏容器；所述PCR仪包括第一荧光通道、第二荧光通道和第三荧光通道；所述第一荧光通道、所述第二荧光通道和所述第三荧光通道各不相同，且各自独立地选自FAM荧光通道、JOE荧光通道和CY5荧光通道中的一种；所述计算装置包括存储器和处理器，所述存储器中存储有计算机程序，所述处理器被配置为执行所述存储器中存储的计算机程序，以实现如下的判别：若空白对照、阳性对照和内标对照成立，则检测结果有效；若荧光通道检测到的扩增曲线呈S型，且CT值＜38，则判定检测结果为阳性；若荧光通道检测到的扩增曲线呈S型，且38≤CT值＜40，则重新提取样本并复检，若复检得到的扩增曲线呈S型，且CT值＜40，则判定检测结果为阳性，否则为阴性；若A管第一荧光通道和第二荧光通道的检测结果均为阳性，则判定样品中含有新型冠状病毒；若A管第三荧光通道的检测结果为阳性，则判定样本提取正常，检测结果正常；若B管第一荧光通道的检测结果为阳性，则判定样品中含有甲型流感病毒；若B管第二荧光通道的检测结果为阳性，则判定样品中含有乙型流感病毒；若B管第三荧光通道的检测结果为阳性，则判定样本提取正常，检测结果正常。本公开还提供一种用于检测呼吸道感染病毒的方法，其中，该方法包括：采用上述任意一项所述的核酸试剂，对待测样本的核酸序列进行PCR扩增；进行所述PCR扩增的PCR仪包括第一荧光通道、第二荧光通道和第三荧光通道；所述第一荧光通道、所述第二荧光通道和所述第三荧光通道各不相同，且各自独立地选自FAM荧光通道、JOE荧光通道和CY5荧光通道中的一种；并且进行如下的判别：若空白对照、阳性对照和内标对照成立，则检测结果有效；若荧光通道检测到的扩增曲线呈S型，且CT值＜38，则判定检测结果为阳性；若荧光通道检测到的扩增曲线呈S型，且38≤CT值＜40，则重新提取样本并复检，若复检得到的扩增曲线呈S型，且CT值＜40，则判定检测结果为阳性，否则为阴性；若A管第一荧光通道和第二荧光通道的检测结果均为阳性，则判定样品中含有新型冠状病毒；若A管第三荧光通道的检测结果为阳性，则判定样本提取正常，检测结果正常；若B管第一荧光通道的检测结果为阳性，则判定样品中含有甲型流感病毒；若B管第二荧光通道的检测结果为阳性，则判定样品中含有乙型流感病毒；若B管第三荧光通道的检测结果为阳性，则判定样本提取正常，检测结果正常。本公开的有益效果在于：利用本公开提供的核酸试剂、试剂盒、系统和方法，能够快速、准确地实现待测样本中新型冠状病毒、甲型流感病毒和乙型流感病毒的检测，避免病毒培养学的繁琐操作，达到如下的检测效果：(一)较高的多重检测能力本公开所建立的检测方法，能够在2个反应体系中同时筛查新型冠状病毒、甲型流感病毒和乙型流感病毒，快速简便地鉴定导致呼吸道感染的病原种类，节省时间、人力和试剂成本。(二)灵敏度高本公开所建立的检测方法能够实现新型冠状病毒、甲型流感病毒和乙型流感病毒的同时检测，反应体系中每种检测目标病原的目标基因的检测灵敏度均可达到500拷贝/mL，检测敏感度高。(三)特异性高本公开所建立的检测方法中，所有引物及探针都经过BLAST比对分析，具有高度的保守性和特异性，不仅能够将检测目标相互区分，而且还能与其它种属相近、生存环境相同、核酸序列具有同源性、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测呼吸道感染病毒的核酸试剂，其中，所述核酸试剂包括分别彼此独立存放或互相任意混合存放的SEQ ID NO.1-8所示的引物和SEQ ID NO.11-14所示的探针。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于检测呼吸道感染病毒的核酸试剂，其中，所述核酸试剂包括分别彼此独立存放或互相任意混合存放的SEQIDNO.1-8所示的引物和SEQIDNO.11-14所示的探针。


2.根据权利要求1所述的核酸试剂，其中，所述核酸试剂中，分别由SEQIDNO.1-8所示的引物的含量各自为0.4-0.6μmol，分别由SEQIDNO.11-14所示的探针的含量各自为0.1-0.3μmol。


3.根据权利要求1所述的核酸试剂，其中，所述核酸试剂还包括内标对照；
所述内标对照含有SEQIDNO.9-10所示的引物和SEQIDNO.15所示的探针，其中，分别由SEQIDNO.9-10所示的引物的含量各自为0.2-0.4μmol，由SEQIDNO.15所示的探针的含量为0.1-0.3μmol。


4.根据权利要求3所述的核酸试剂，其中，所述核酸试剂包括A管和B管；A管含有SEQIDNO.1-4、9-10所示的引物和SEQIDNO.11-12、15所示的探针；B管含有SEQIDNO.5-8、9-10所示的引物和SEQIDNO.13-14、15所示的探针。


5.根据权利要求4所述的核酸试剂，其中，SEQIDNO.11和13所示的探针具有第一荧光标记；SEQIDNO.12和14所示的探针具有第二荧光标记；SEQIDNO.15所示的探针具有第三荧光标记；所述第一荧光标记、所述第二荧光标记和所述第三荧光标记各不相同，且各自独立地选自FAM荧光标记、JOE荧光标记、CY5荧光标记、VIC荧光标记和ROX荧光标记中的一种。


6.根据权利要求1～5中任意一项所述的核酸试剂，其中，所述呼吸道感染病毒包括新型冠状病毒、甲型流感病毒和乙型流感病毒中的至少一种。


7.一种用于检测呼吸道感染病毒的试剂盒，该试剂盒含有权利要求1～6中任意一项所述的核酸试剂，并且可选地，所述试剂盒还含有反应体系缓冲液、逆转录酶、DNA聚合酶、阳性对照和水中的至少一种。


8.权利要求1～6中任意一项所述的核酸试剂在制备用于检测呼吸道感染病毒的试剂盒中的用途。


9.一种用于检测呼吸道感染病毒的系统，该系统包括具有A管检测器和B管检测器的PCR仪、计算装置和输出装置；所述A管检测器和B管检测器分别为装载有权利要求4～6中任意一项所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：任丽丽，林笑冬，王晓艳，郭丽，杨海英，肖艳，岳素文，冯志迪，傅成波，王雷，王健伟，张志强，
申请(专利权)人：中国医学科学院病原生物学研究所，北京卓诚惠生生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11