【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及用于检测耳念珠菌的crrna及其组合和应用、快速检测耳念珠菌的方法。
技术介绍
1、耳念珠菌(candida auris)在2009年首次从一位日本女性患者的外耳道中分离的一种新的病原真菌。通过形态、代谢特征和系统发育特征等特点分析，鉴定为一种新的念珠菌命名为耳念珠菌。随后耳念珠菌在世界范围快速传播，已经在至少40多个国家有病例报道。耳念珠菌可以在环境中长期存活，对常规的消毒剂有很强的耐受能力，尤其在各种医疗机构中如果污染传播会导致院内感染的集中爆发。耳念珠菌可以感染各个年龄段的人群，其中对老年人和免疫力低下人群的威胁最大，尤其容易感染患有严重高血压、心脏病等疾病的患者。耳念珠菌可以引起多种侵袭性感染，包括血液感染、尿路感染、皮肤感染和下呼吸道感染，而肺、皮肤和软组织、脑、腹腔感染较少见。耳念珠菌引起念珠菌性败血症，临床死亡率30％-70％，并且分离到的菌株普遍存在耐药或者多重耐药，一度被称为“超级真菌”在全球范围内引起广泛重视。
2、耳念珠菌感染在我国也有散发报道。尽管在我国目前报道的病例很少，菌株也以单耐药为主，不存在多重耐药现象，但是也面临着菌株变异以及外来人员输入新的具有多重耐药菌株的威胁。因此，建立快速、灵敏、技术方案方便可行的检测方法对于耳念珠菌防止快速传播和耳念珠菌感染的预防非常紧迫。
3、目前针对各种真菌感染检测技术还很落后，传统的方法主要通过分离培养结合，镜检来确定真菌的类型。由于耳念珠菌在表型及各种遗传性状和其他念珠菌很相近，因此利用培养后的形态鉴定，检测结
4、cas12a(cpf1)与crispr/cas9相似也具备通过guide rna(grna)指导结合并剪切dna的能力。与cas9不同的是cas12a的grna指导下的双链dna(dsdna)内切酶活性只有一个ruvc催化活性区域。研究人员将来自毛螺菌科细菌的cas12a(lbcas12a)与靶标为m13噬菌体环状单链基因组的grna装配在一起，意外地发现在guide rna指导下，lbcas12a与靶标结合后具有剪切任意单链dna的能力。后来研究人员也在其他v型crispr/cas12中发现了这种与靶标结合后即被激活的非特异性的dna酶活性。2018年chen js等利用cas12a的非特异性剪切能力与rpa等温扩增技术结合构建了detectr(dna endonuclease-targeted crjsprtrans reporter)dna检测平台。在detectr检测平台中，设计了一个以人乳头瘤病毒(humanpapilloma virus，hpv)特定片段作为靶标的lbcas 12a-crrna与连接荧光报告元件和抑制元件的ssdna组成，当ssdna断裂时荧光基团即可发出报告荧光。实验证明该检测平台具有很高的敏感性和特异性，可以通过识别毒株之间的碱基变异来区分不同病毒毒株(chenjs，ma e，harrington lb，da costa m，tian x，palefsky jm，doudna ja.crispr-cas12atarget binding unleashes indiscriminate single-stranded dnaseactivity.science.2018apr 27；360(6387):436-439.doi:10.1126/science.aar6245.epub 2018feb 15.erratumin:science.2021feb 19；371(6531).)。2019年全球爆发新型冠状肺炎。broughton jp等首先将此方法成功应用于新冠病毒的检测(broughton jp，deng x,yu g，fasching cl，servellitav，singh j，miao x，streithorstja，granadosa，sotomayor-gonzaleza，zornk，gopeza，hsu e，gu w，miller s，pan cy，guevara h，wadford da，chen js，chiu cy.crispr-cas12-based detection of sars-cov-2.nat biotechnol.2020jul；38(7):870-874.)。但是由于真菌基因组比病毒更复杂，相关技术还未有在本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于检测耳念珠菌的crRNA，其特征在于，所述crRNA的核苷酸序列如SEQ IDNo.8、SEQ ID No.9、SEQ ID No.10或SEQ ID No.11所示。
2.用于检测耳念珠菌的引物对和crRNA的组合，其特征在于，
3.权利要求1所述的crRNA或权利要求2所述的组合在制备检测耳念珠菌的产品中的应用。
4.一种用于检测耳念珠菌的试剂盒，其特征在于，包括Cas12a蛋白和权利要求2所述的组合。
5.一种非诊断和治疗目的的快速检测耳念珠菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述待检测样本的基因组DNA的制备方法包括：对所述待检测样品进行预处理，向所得沉淀中加入裂解液进行裂解，得到所述基因组DNA；
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述待检测样本包括气体、液体和固体表面采集物中的一种或多种；
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述裂解的条件为：37℃裂解10-30min后95-98℃裂解10min。
9.
10.根据权利要求5或9所述的方法，其特征在于，所述切割反应的条件为：37℃切割30-60min后85℃切割5-10min。
...【技术特征摘要】
1.一种用于检测耳念珠菌的crrna，其特征在于，所述crrna的核苷酸序列如seq idno.8、seq id no.9、seq id no.10或seq id no.11所示。
2.用于检测耳念珠菌的引物对和crrna的组合，其特征在于，
3.权利要求1所述的crrna或权利要求2所述的组合在制备检测耳念珠菌的产品中的应用。
4.一种用于检测耳念珠菌的试剂盒，其特征在于，包括cas12a蛋白和权利要求2所述的组合。
5.一种非诊断和治疗目的的快速检测耳念珠菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述待检测样本的基因组dna的制备方法包括：对所述待检测样品进行预处理，向...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘涛，徐星晔，金奇，
申请(专利权)人：中国医学科学院病原生物学研究所，
类型：发明
国别省市：
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