绵羊Lrh-1短发夹RNA及其干扰载体制造技术

本发明专利技术涉及生物工程领域，尤其涉及绵羊Lrh‑1短发夹RNA及其干扰载体。本发明专利技术根据绵羊Lrh‑1基因的cDNA序列及设计原则筛选出靶序列，根据靶序列设计有短发夹RNA结构的单链寡核苷酸，经变性退火为双链寡核苷酸插入融合有绿色荧光的pENTR/U6载体，构建pENTR/U6‑shRNA‑GFP干扰载体。通过转染到湖羊卵巢颗粒细胞中，利用实时荧光定量PCR方法在mRNA水平检测，证实Lrh‑1‑shRNA干扰载体可以有效抑制绵羊体细胞中Lrh‑1基因的表达。

LRH-1 short hairpin RNA of sheep and its interference vector

【技术实现步骤摘要】
绵羊Lrh-1短发夹RNA及其干扰载体
本专利技术涉及生物工程领域，尤其涉及绵羊Lrh-1短发夹RNA及其干扰载体。
技术介绍
肝受体同系物-1(Liverreceptorhomolog-1,Lrh-1)是一种哺乳动物重要的核受体，属于核受体超家族中的NR5A亚家族的第2个成员，也称NR5A2，在动物的心、胃、肺、脑、胆囊、胰腺外分泌部、唾液腺、肠、卵巢、脂肪、膀胱、睾丸、肾上腺、胎盘等多种组织中均有表达。Lrh-1主要是以一种转录调控因子执行其功能，通过在不同时期的不同组织中调控多种蛋白的表达，从而影响这些组织的发育及生理生化功能，并在动物胚胎发育、分化、胆固醇代谢、胆汁酸的动态平衡、类固醇激素生成、乳腺癌的细胞转移和侵袭、组织炎症反应等过程中具有重要作用。RNA干扰(RNAinterference，RNAi)现象是一种进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制。将与靶基因的转录产物mRNA存在同源互补序列的双链RNA(doublestrandRNA，dsRNA)导入细胞后，能特异性地降解该mRNA，从而产生相应的功能表型缺失。R本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.绵羊Lrh-1短发夹RNA，其正义链5’→3’包括顺序连接的序列A、茎环序列1、序列B；其中，序列A与序列B反向互补；所述序列A如SEQ ID NO:1～3任一项所示。/n

【技术特征摘要】
1.绵羊Lrh-1短发夹RNA，其正义链5’→3’包括顺序连接的序列A、茎环序列1、序列B；其中，序列A与序列B反向互补；所述序列A如SEQIDNO:1～3任一项所示。


2.根据权利要求1所述的绵羊Lrh-1短发夹RNA，其特征在于，其反义链5’→3’包括顺序连接的序列A、茎环序列2、序列B；所述茎环序列2与茎环序列1反向互补。


3.根据权利要求1或2所述的绵羊Lrh-1短发夹RNA，其特征在于，所述正义链和反义链的5’端皆连接有接头，所述正义链的接头序列为CACC；所述反义链的接头序列为AAAA。


4.根据权利要求1～3任一项所述的绵羊Lrh-1短发夹RNA，其特征在于，所述茎环序列1的核酸序列为CGAA。


5.根据权利要求1～4任一项所述的绵羊Lrh-1短发夹RNA，其特征在于，
正义链的核酸序列如SEQIDNO:4所示，反义链的核酸序列如SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：王利红，张伟，
申请(专利权)人：江苏农牧科技职业学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32