一种亚洲棉miR172c在调控目的植物应答盐胁迫中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种亚洲棉miR172c在调控目的植物应答盐胁迫中的应用，可通过调节该miRNA表达量以调控目的植物应答盐胁迫的能力。实验证明，300mM NaCl溶液浇灌营养土之后光照16h，黑暗8h，交替浸泡48h后，亚洲棉过表达植株CLCrV:miR172c的叶片出现萎蔫。进一步测量叶片电导率，结果显示亚洲棉过表达植株CLCrV:miR172c叶片相对电导率显著升高。说明miR172c负调节棉花对盐的胁迫应答，因此可以通过调控植株中miR172c的表达量，调控植株应答盐胁迫的能力，从而提高植株抗性。本发明专利技术为调控目的植物应答盐胁迫的能力提供了一种新的途径，在农业领域具有广阔的应用空间和市场前景。

An Asian cotton mir172c in response to salt stress

【技术实现步骤摘要】
一种亚洲棉miR172c在调控目的植物应答盐胁迫中的应用
本专利技术涉及一种miRNA的应用，具体涉及一种亚洲棉miR172c在调控目的植物应答盐胁迫中的应用。
技术介绍
棉花是重要的天然纤维作物和油料作物之一，属于非粮食作物，具有较高的经济价值，并具有一定的耐干旱盐碱的能力。亚洲棉是一种主要的栽培棉花和有用的育种资源，具有很强的遗传稳定性和对一系列胁迫的良好抗性。但随着全球气候变化，许多环境因素(如养分流失、土壤盐渍化和温室效应)严重制约农业产业的发展。其中，盐胁迫是植物生长和发育的主要威胁。每年，它都会在世界范围内造成棉花纤维和种子产量的巨大损失。因此包括棉花在内的部分植物已经进化出对应的反应和调节机制，以避免或抵抗外源胁迫。miRNAs被转录并切割成一系列保守的小的非编码RNA，通常长度为18-22个核苷酸(Nt)。它们可以结合到下游的靶基因的mRNA上，通过翻译抑制或切割来转录后调节它们的表达。已有大量文献报道microRNA(miRNA)参与植株应答干旱、冷、热、ABA处理，紫外处理等多种胁迫应答过程，例如miR319，miR396c，miR394参与植物应答盐胁迫。陆地棉中一个新发现的miRNA，通过调控靶标CHR基因来响应盐胁迫。因此研究miRNAs调控植株耐盐将有助于理解棉花中逆境响应miRNAs的动态特征和生物学功能，为棉花育种提供更多的数据。研究植株耐盐相关的功能基因对于提高植物耐盐性，降低盐胁下的产量损失，对造福农业生产有着重要的意义。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种亚洲棉miR172c在调控目的植物应答盐胁迫中的应用，可通过调节该miRNA表达量以调控目的植物应答盐胁迫的能力。为了实现上述目的，本专利技术的技术方案是：一种亚洲棉miR172c在调控目的植物应答盐胁迫中的应用。其中，亚洲棉miR172c负调节目的植物对盐的胁迫应答。目的植物为双子叶植物。双子叶植物为亚洲棉。亚洲棉miR172c的序列如SEQIDNO.5所示，miR172c的前体序列如SEQIDNO.6所示。一种亚洲棉miR172c在培育耐盐目的植物中的应用。一种亚洲棉miR172c的重组表达载体CLCrV:miR172c，由以下方法制备：(1)合成SEQIDNO.6所示miR172c前体序列的片段；(2)得到的片段用限制性内切酶SpeI和AscI双酶切，并连接到载体pCLCrVA中，得到重组载体CLCrV:miR172c。一种调控目的植物应答盐胁迫的方法，包括以下步骤：(1)将重组载体CLCrV:miR172c转入农杆菌菌株GV3101感受态细胞中；(2)农杆菌转化至目的植物。本专利技术的有益效果：本专利技术提供一种亚洲棉miR172c在调控目的植物应答盐胁迫中的应用，实验证明，300mMNaCl溶液浇灌营养土之后光照16h，黑暗8h，交替浸泡48h后，亚洲棉过表达植株CLCrV:miR172c的叶片出现萎蔫。进一步测量叶片电导率，结果显示亚洲棉过表达植株CLCrV:miR172c叶片相对电导率显著升高。本专利技术为调控目的植物应答盐胁迫的能力提供了一种新的途径，在农业领域具有广阔的应用空间和市场前景。附图说明图1为150mMNaCl处理3h之后，miR172c在处理组和对照组根组织中的表达量。图2为棉花叶皱缩病毒(CLCrV)沉默载体的基因组结构示意图。棉花叶皱缩病毒是双组分的双生蛋白，pCLCrVA和pCLCrVB是该病毒的两个组分。其中，AC1、AC2、AC3和AC4都是pCLCrVA的编码蛋白，pre-miRNA代表插入的miRNA前体序列，AC1是外壳蛋白，AC2是转录激活蛋白，AC3是复制增强蛋白，AC4功能不明确。BV1和BC1是pCLCrVB的编码蛋白，其中BV1是核穿梭蛋白，BC1是编码运动蛋白。CR表示基因共同区域。LB和RB分别代表T-DNA的左臂和右臂，图3为300mMNaCl溶液处理48h后，感染空载体CLCrV:00和重组载体CLCrV:miR172c的植株叶片中miR172c表达情况的qRT-PCR鉴定结果。图4为300mMNaCl溶液处理48h后，感染空载体CLCrV:00和重组载体CLCrV:miR172c的植株表型照片。图5为300mMNaCl溶液处理48h后，感染空载体CLCrV:00和重组载体CLCrV:miR172c的植株离体叶片中相对电导率的检测结果。具体实施方式以下结合实施例对本专利技术的具体实施方式作进一步详细说明。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1、miR172c响应棉花应答盐胁迫1、植株培养及胁迫处理将亚洲棉Shixiya1(SXY1)品种的种子在3％(v/v)双氧水中浸泡2h，然后转移至培养皿发芽(1d)；培养至芽露白，移入40目石英砂中培养(约5d)；待苗长到6-10cm高，两片子叶完全展开后，转移至营养液中进行水培(约18d)，营养液配方见表1和表2；当棉花幼苗长出3-5片真叶，将棉花幼苗随机分为两组，即处理组和对照组，处理组将棉花幼苗根浸没在150mMNaCl溶液中，对照组将棉花幼苗根浸没在蒸馏水中，浸没3h之后对根组织进行取材。表1.棉花幼苗水培营养液的微量元素配方表2.棉花幼苗水培营养液的大量元素配方2、植株RNA提取、反转录及定量鉴定(1)RNA提取利用多糖多酚植物总RNA提取试剂盒提取上述样品的总RNA，本专利技术具体操作如下：a.取处理组和对照组植株根组织新鲜样品放置于研钵中，加入适量液氮研磨至粉末状。b.将粉末转移至2ml的RNase-Free离心管中，用移液枪加入含5％的β-巯基乙醇的裂解液SL500μl，涡旋振荡使样品充分裂解。c.离心2min(12000rpm，室温)后将上清液转移至过滤柱CS中(放置于收集管)，离心2min(12000rpm，室温)，收集液体。d.用移液枪将收集管中的液体转移至新的RNase-Free离心管中，加入收集管中的液体体积的0.4倍体积的无水乙醇。轻轻混匀后转移至吸附柱CR3中(放置在收集管中)，离心30s(12000rpm，室温)，倒掉收集管中的废液，并将吸附柱放回收集管。e.加350μl去蛋白液RW1到吸附柱中，离心30s(12000rpm，室温)，然后倒掉收集管里废液，再将吸附柱放回收集管。重复两次。f.在吸附柱中加入80μlRDD和DNaseⅠ储存液(体积比7：1)的混合液，室温静置15min。g.加入500μl漂洗液RW(RW在使用前已按比例加入无水乙醇)，离心30s(12000rpm，室温)，倒掉收集管中的废液，再将吸附柱放回收集管。重复两次。h.空离心2min(本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种亚洲棉miR172c在调控目的植物应答盐胁迫中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.一种亚洲棉miR172c在调控目的植物应答盐胁迫中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用为亚洲棉miR172c负调节目的植物对盐的胁迫应答。


3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述目的植物为双子叶植物。


4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述双子叶植物为亚洲棉。


5.根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于，所述亚洲棉miR172c的序列如SEQIDNO.5所示，miR172c的前体序列如SEQIDNO.6所示。


6.一种亚...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛晓阳，李付广，苏震，徐文英，达玲玲，詹晶晶，姚冬霞，张力圩，
申请(专利权)人：中国农业科学院棉花研究所，
类型：发明
国别省市：河南;41