一种新型冠状病毒肺炎dsRNA疫苗的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种用于医学领域的新型冠状病毒肺炎dsRNA疫苗的制备方法，扩增nCoV2019的靶向干扰基因shRNA序列，所得产物与空干扰载体pSilencer经BamH I和Hind III酶切而构建干扰载体pSilencer‑shRNA，该干扰载体经感受态大肠杆菌DH5a扩增和shRNA插入正确性鉴定后，用Hind lII和EcoR I同时酶切pSilencer‑shRNA和空穿梭载体pDC312，构建穿梭载体pDC312‑shRNA，使其与腺病毒骨架质粒pBHGloxAEl共转染HEK293细胞，在胞内同源重组而获得重组腺病毒Ad‑shRNA，再经HEK293细胞多次扩增和纯化制备nCoV dsRNA疫苗，通过喷雾接种，重组腺病毒载体Ad将shRNA导入呼吸道上皮细胞并在细胞内合成dsRNA，继之特异性诱导同源的nCoV mRNA降解，产生抗nCoV2019的转录后基因沉默或RNA干扰。

A novel coronavirus pneumonia dsRNA vaccine preparation method

【技术实现步骤摘要】
一种新型冠状病毒肺炎dsRNA疫苗的制备方法
本专利技术涉及一种用于传染病防治领域的新型冠状病毒肺炎dsRNA疫苗的制备方法，属于疫苗制备方法

技术介绍
人类冠状病毒(HcoV229E和HcoVOC43)可引起达30％的感冒。动物冠状病毒，如猪胃肠炎冠状病毒(TGEV)、小鼠肝炎冠状病毒(MHV)、鸟传染性气管炎冠状病毒(IBV)等可感染相应宿主的呼吸道、胃肠道、神经系统和肝脏，导致相应症状。冠状病毒的包膜呈花瓣形突起，使冠状病毒看起来像王冠(拉丁语，corona)，其核衣壳是可变的长螺旋形。冠状病毒的病毒粒子直径为60nm～140nm，球形，病毒基因组是27kb～32kb的单链正义RNA，是所有RNA病毒基因组中最大的。2003年冠状病毒的一个变种引起了严重急性呼吸综合征即非典(SARS)的爆发，SARS-CoV基因组大小为27～3lkb，有14个开放读码框(openreadingframe，ORF)和1个s2m模序(s2mmotif)。石正丽等报道从5名病人体内获得了基本一致的nCoV-2019全基因组，其中有79.5％的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新型冠状病毒肺炎dsRNA疫苗的制备方法，其特征在于，扩增nCoV2019的靶向干扰基因shRNA序列，所得产物与空干扰载体pSilencer经BamH I和Hind III酶切而构建干扰载体pSilencer-shRNA，该干扰载体pSilencer-shRNA经感受态大肠杆菌DH5a扩增和shRNA插入正确性鉴定后，用HindlII和EcoRI酶切pSilencer-shRNA和空穿梭载体pDC312，构建穿梭载体pDC312-shRNA，使穿梭载体pDC312-shRNA与腺病毒骨架质粒pBHGloxAEl共转染HEK293细胞，在胞内同源重组而获得重组腺病毒Ad-shRNA，再...

【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒肺炎dsRNA疫苗的制备方法，其特征在于，扩增nCoV2019的靶向干扰基因shRNA序列，所得产物与空干扰载体pSilencer经BamHI和HindIII酶切而构建干扰载体pSilencer-shRNA，该干扰载体pSilencer-shRNA经感受态大肠杆菌DH5a扩增和shRNA插入正确性鉴定后，用HindlII和EcoRI酶切pSilencer-shRNA和空穿梭载体pDC312，构建穿梭载体pDC312-shRNA，使穿梭载体pDC312-shRNA与腺病毒骨架质粒pBHGloxAEl共转染HEK293细胞，在胞内同源重组而获得重组腺病毒Ad-shRNA，再经HEK293细胞多次扩增和纯化制备Ad-nCoVdsRNA疫苗。


2.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒肺炎dsRNA疫苗的制备方法，其特征在于，所述靶向干扰基因shRNA序列指长度为19nt的与siRNA序列互补的RNA序列。


3.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒肺炎dsRNA疫苗的制备方法，其特征在于，所述靶向干扰基因shRNA序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：翁炳焕，李兰娟，
申请(专利权)人：翁炳焕，
类型：发明
国别省市：浙江;33