一种基因抑制剂在制备抗胃癌转移制剂中的用途制造技术

本发明专利技术提供了一种基因抑制剂在制备抗胃癌转移制剂中的用途，属于生物医药技术领域。本发明专利技术通过实验证明长链非编码RNA LINC02033在胃癌组织中高表达，同时，本发明专利技术证明通过siRNA抑制剂抑制LINC02033表达能够显著的抑制胃癌细胞的迁移和侵袭，因此，LINC02033 siRNA能够用于制备抗胃癌转移制剂。

The application of a gene inhibitor in the preparation of anti gastric cancer metastasis preparation

【技术实现步骤摘要】
一种基因抑制剂在制备抗胃癌转移制剂中的用途
本专利技术属于生物医药
，尤其涉及一种基因抑制剂及其应用。
技术介绍
胃癌是消化系统常见的一种恶性肿瘤，由于胃癌的发病机制十分复杂，且患者的早期症状不明显，导致胃癌患者的早期诊断率较低。胃癌是全球第四大恶性肿瘤，虽然，最近几年胃癌的发病率有所下降，但是患者的死亡率仍然没有有效的降低，在中国胃癌患者的死亡率仍然在所有肿瘤中位列第二。胃癌分为早期胃癌和进展性胃癌，大部分胃癌患者诊断时就已处于进展期。很多的早期胃癌患者都缺乏特异性的临床症状，患者通常并不会重视，从而致使胃癌被忽视。临床数据表明，晚期胃癌患者的术后5年生存率只有30％-40％，而早期胃癌患者的术后生存率则可以达到70-80％。长链非编码RNA是一类大约200个核苷酸，缺少完整特异性阅读框的非编码能力的RNA分子。长链非编码RNA在细胞和组织中具有较强的特异性，且具有广泛的生物学功能，并且多数的长链非编码RNA在疾病中呈现为异常表达。现有的研究显示，长链非编码RNA在染色质水平、转录水平、转录后水平、翻译水平等均具有着重要的作用。按照长链非编码RNA在基因组内与相邻蛋白编码基因的相对位置差异，将长链非编码RNA分为5类，分别是：同义lncRNA、反义lncRNA、双向lncRNA、内含子lncRNA和基因间lncRNA。位置上的不同，将会使lncRNA发挥不同的作用。目前的研究表明，长链非编码RNA在肿瘤的发生发展中扮演着重要的作用，因此，寻找新的与胃癌发生发展有关的长链非编码RNA，并设计相应的分子靶向药物对于胃癌的治疗具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种特异性抑制LINC02033的siRNA，用于制备抗胃癌制剂。为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：一种基因抑制剂，所述基因抑制剂为siRNA，所述siRNA抑制长链非编码RNALINC02033的表达，所述siRNA用于制备抗胃癌制剂。优选地，所述siRNA的正义链为GGAGCAAGAUCUAAGAUUAAA，siRNA的反义链为UAAUCUUAGAUCUUGCUCCAA。此外，本专利技术提供了LINC02033基因抑制剂在制备抗胃癌药物中的用途。优选地，所述用途包括LINC02033在制备抗胃癌转移制剂中的用途。除此之外，本专利技术提供了一种抗胃癌转移的制剂，所述制剂包括LINC02033的基因抑制剂。优选地，所述基因抑制剂为LINC02033的siRNA。优选地，所述siRNA的正义链为GGAGCAAGAUCUAAGAUUAAA，所述siRNA的反义链为UAAUCUUAGAUCUUGCUCCAA。优选地，所述制剂还包括其他药学上可接受的药物载体。本专利技术的有益效果在于：本专利技术通过实验证明长链非编码RNALINC02033在胃癌组织中高表达，同时，本专利技术证明通过siRNA抑制剂抑制LINC02033表达能够显著的抑制胃癌细胞的迁移和侵袭，因此，LINC02033siRNA能够用于制备抗胃癌转移制剂，从而为开发新的胃癌药物提供了可能。附图说明图1LINC02033在胃癌组织和癌旁组织中的表达差异图2si-LINC02033基因抑制剂对于LINC02033的抑制效果图3细胞划痕实验检测抑制LINC02033对于胃癌细胞迁移的影响图4Transwell实验检测抑制LINC02033对于胃癌细胞迁移和侵袭的影响图5WesternBlot实验检测抑制LINC02033对于胃癌细胞EMT相关蛋白的影响具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术，即所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。实施例1检测LINC02033在胃癌组织和癌旁组织表达差异1.研究对象20例胃癌组织和20例相应的癌旁组织，组织来源于青岛市肿瘤医院，所有组织标本均通过医院伦理委员会审查和批准，所有组织标本来源患者均签署知情同意书。胃癌组织经病理检测证实为胃癌(胃癌组织切除时，患者尚未进行化疗，放疗等治疗)。具体组织情况如下2.组织RNA提取(1)将50mg胃癌组织或癌旁组织放入到研钵中，加入少量的液氮，进行迅速的研磨，组织变软后，再次加入少量液氮进行研磨，重复三次；(2)加入1mLTrizol，使用电动匀浆器匀浆2分钟，之后，将组织转移至离心管中，室温放置5分钟；(3)离心机12000r/min离心5分钟，保留上清，去除沉淀；(4)在离心管中加入200μl氯仿，震荡混匀后，室温放置5分钟；(5)离心机12000r/min，4℃，离心15min；(6)吸取上清转移至另一离心管中，加入500μl预冷的异丙醇混匀，混匀之后冰上静置10分钟；(7)离心机12000r/min，4℃，离心10min，去除上清，保留沉淀；(8)在沉淀中加入1ml75％乙醇，温和的震荡离心管，悬浮沉淀；(9)离心机8000r/min，4℃，离心5min，小心去除上清；(10)室温静置10分钟，待RNA干燥后，使用50μlDEPC水溶解RNA，并使用微量紫外分光光度计测定RNA的纯度和浓度。3.荧光定量PCR检测(1)去除基因组DNA反应试剂：反应条件：42℃2分钟，4℃。(2)逆转录反应反应试剂：反应条件：37℃15分钟，85℃5秒，4℃。4.荧光定量PCR检测反应试剂:反应条件：95℃5min；95℃60s，62℃40s40个循环；72℃5min。LINC02033引物序列为Forward5’-GGCCTTCTCCAGCAGCCTAA-3’(SEQNO:1)Reverse5’-TCTGCAGCACCAGGAGGAAG-3’(SEQNO:2)GAPDH引物序列为Forward5’-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3’(SEQNO:3)Reverse5’-GAAGATGGTGATGGGATTTC-3’(SEQNO:4)采用2-△△ct方法处理实时定量PCR数据，计算LINC02033的表达变化。实验结果实验结果如图1所示，从图中可以看出，胃癌组织中LINC02033的相对表达量(2.394±0.168)明显高于癌旁组织中，且差异具有统计学意义，说明相较于癌旁组织，LINC02033在胃癌组织中高表达，因此，LINC02033可以作为胃癌治疗的靶点。实施例2荧光定量PCR检测LINC02033基因抑制剂的效果1.细胞培养人胃癌细胞MKN-45采用高糖本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基因抑制剂，其特征在于，所述基因抑制剂为siRNA，所述siRNA抑制长链非编码RNA LINC02033的表达，所述siRNA用于制备抗胃癌制剂。/n

【技术特征摘要】
1.一种基因抑制剂，其特征在于，所述基因抑制剂为siRNA，所述siRNA抑制长链非编码RNALINC02033的表达，所述siRNA用于制备抗胃癌制剂。


2.根据权利要求1所述的基因抑制剂，其特征在于，所述siRNA的正义链为GGAGCAAGAUCUAAGAUUAAA，siRNA的反义链为UAAUCUUAGAUCUUGCUCCAA。


3.LINC02033基因抑制剂在制备抗胃癌药物中的用途。


4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述用途包括LINC02033在制备抗胃癌...

【专利技术属性】
技术研发人员：王颖翠，
申请(专利权)人：青岛思拓新源细胞医学有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37