Compbody–多价靶结合物制造技术

本文中报道了一种包含五个单体融合多肽的多聚体融合多肽，所述单体融合多肽各自包含至少一个Fab片段和SEQ ID NO:01的COMP结构域或其功能片段。

Compbody \u2013 multivalent target complex

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】Compbody–多价靶结合物本专利技术属于靶结合分子领域。本文中报道了包含多聚化结构域的多价结合物，所述多聚化结构域衍生自人软骨寡聚基质蛋白的卷曲螺旋结构域。
技术介绍
自1974年Koehler和Milstein开发首批单克隆抗体以来，已经投入许多工作来开发适于人体中疗法的抗体。已经在小鼠和大鼠中开发了可用的首批单克隆抗体。这些抗体在用于治疗人类时由于导致抗啮齿类抗体而造成不想要的副作用。已经投入许多工作来减少或甚至消除这类不想要的副作用。在过去多年，数目日益增长的人单克隆抗体或人源化单克隆抗体已经投入市场。熟知实例包括例如来自巴赛尔Hoffmann-LaRoche的和另外，已经开发了衍生自野生型四链Y形抗体样式的新抗体样式。这些样式主要地是双特异性样式和多特异性样式。综述参见例如Kontermann,R.,mAbs4(2012)182-197。在US2009/0175867中，报道了具有效应子功能的单链多价结合蛋白。在WO2014/131711中，报道了其中第二和第三抗原结合部分可以直接或通过免疫球蛋白铰链区与Fc结构域融合的双特异性抗体。在EP15176083中，报道了与全长抗体相比，具有降低分子量的新抗体样式及其用途。WO2007/048022公开了抗体-多肽融合蛋白和用于产生和使用其的方法。WO2007/146968公开了具有效应子功能的单链多价结合蛋白。EP1378520公开了环状单链三特异性抗体。EP0938571B1公开了包含2个或更多个单元的寡聚体，其中每个单元包含(i)能够组装单体单元的软骨寡聚基质蛋白的寡聚化结构域；和(ii)蛋白质结构域或低分子量化合物，其中所述蛋白质结构域或低分子量化合物不是软骨寡聚基质蛋白。WO00/44908公开了嵌合蛋白，所述嵌合蛋白含有TSP-1、TSP-2、内皮抑素、血管抑制素、血小板因子4或催乳素的抗血管生成部分，所述抗血管生成部分与人软骨寡聚基质蛋白(COMP)的N端区域的一部分融合，因此允许五聚体形成。US6,218,513公开了珠蛋白，其含有非天然存在的结合结构域，以产生所述珠蛋白的寡聚体。COMP寡聚化结构域是公开的结合结构域之一。US9,133,259公开了分离的蛋白质复合体，其包含与一种或多种生长因子结合的一个或多个软骨寡聚基质蛋白(COMP)单体，其中一个或多个COMP单体包含生长因子结合结构域。WO2014/003679公开了哺乳动物软骨寡聚基质蛋白COMP的分离的C末端截短的片段。US2016/0176944一般地公开了寡聚受体-配体对子成员并且具体地公开了寡聚MHC-肽复合体及一种通过使用该寡聚体，根据哺乳动物T细胞的抗原受体的特异性，标记、检测和分离哺乳动物T细胞的方法。US2005/096459公开了一种寡聚受体-配体对子成员复合体，其包含(i)寡聚核芯，所述寡聚核芯包含至少两个嵌合蛋白，所述嵌合蛋白包含第一区段和第二区段，所述第一区段包括形成互补结合对的部分第一成员的的至少一个结构域，所述第二区段包含寡聚化结构域；和(ii)至少两个受体-配体对子成员肽，其中每个受体-配体对子成员肽通过结合互补结合对的第一和第二成员与核芯结合；和在该复合体中，至少两个受体-配体对子成员肽衍生自相同的受体-配体对子成员肽链。优选地，寡聚化结构域包含人COMP的氨基酸1至128、优选地氨基酸20至83、最优选地氨基酸20至72并且优选地由它们组成。WO2016/151315公开了形成嵌合抗原受体(CAR)的多肽，所述多肽包含：(i)抗原结合结构域；(ii)卷曲螺旋间隔区结构域；(iii)跨膜结构域；和(iv)胞内结构域。WO99/27964公开了生成与鼻病毒和尤其与HRV的细胞受体结合的高亲和力多价重组抗体和多价肽。在所述文献中公开的一个实施方案中，多价抗体含有通过其聚合结构域聚合的多个单元。每单元含有连接在一起的Fv片段和聚合结构域(优选地作为单链多肽表达)。WO02/055718公开了高效生成蛋白质复合体并筛选它们与其他蛋白质或寡核苷酸序列结合的能力的组合物、方法和试剂盒。在该文件中，进一步公开了，据信可以通过使成束结构域(例如COMP)与重链的C末端融合，大幅度增加在抗体的重链和轻链区域之间形成的蛋白质复合体(即，抗体)的亲合力。成束结构域的聚合应当使多个抗体聚拢在一起并且因而因多价结合而增强抗体与其靶之间的亲合力相互作用。这个过程模拟初次免疫反应期间生成的多个IgM的天然装配过程。IgM的低亲和力由其五聚体结构补偿，产生针对细菌或病毒表面上存在的重复性抗原决定簇的高亲合力。专利技术概述人软骨寡聚基质蛋白(COMP)的卷曲螺旋结构域是五聚化结构域。已经发现这种结构域可以用来使全长IgG抗体或Fab片段五聚化。因此，SEQIDNO:01的COMP结构域通过肽接头(例如G4S-接头(SEQIDNO:03))融合至结入扣全长人IgG1抗体的结重链C末端。在另一个构建体中，SEQIDNO:01的COMP结构域与人Fab片段CH1结构域的C末端融合。如本文中报道的一个方面是一种包含五个(相同或不同)单体融合多肽的多聚体融合多肽，所述单体融合多肽各自包含由一对抗体轻链可变结构域和抗体重链可变结构域形成的至少一个结合位点和由SEQIDNO:01组成的COMP结构域(或其结合性功能片段)。在一个实施方案中，结合位点是通过一个或多个二硫键彼此共价缀合的一对抗体重链可变结构域和抗体轻链可变结构域。在一个实施方案中，COMP结构域与重链可变结构域的C末端缀合。在一个优选的实施方案中，重链可变结构域和COMP结构域借助肽接头缀合。在一个实施方案中，肽接头选自SEQIDNO:02至SEQIDNO:18组成的接头群组。在一个实施方案中，结合位点是scFv。亲合力介导的结合作用改善原理基于这样的抗体衍生物，其在单价形式下具有不良结合功能至无结合功能，结合功能/特异性/亲和力(亲合力)仅通过两个(不同)单价结合位点与多价抗体的物理连接实现。多价态产生亲合力，同时特异性取决于不同结合位点的结合作用。以上原理的共同点是(单独的单价结合实体无功能或至多不良功能且)但多价形式下具有所需功能。如本文中报道的一个方面是一种包含五个(相同或不同的)单体融合多肽的多聚体融合多肽，所述单体融合多肽各自包含至少Fab(片段)和SEQIDNO:01(由其组成)的COMP结构域或其结合性功能片段。在一个实施方案中，至少Fab(片段)的每者与COMP结构域的N末端缀合。在一个优选的实施方案中，借助肽接头缀合。在一个实施方案中，肽接头选自SEQIDNO:02至SEQIDNO:18组成的接头群组。在一个实施方案中，单体融合多肽具有相同的氨基酸序列。在一个实施方案中，单体融合多肽具有不同的氨基酸序列。在一个实施方案中，全部单体融合多肽在其C末端包含跨膜结构域。在一个实施方案中，全部单体融合多肽不包含跨膜结构域和/或胞内信号传导结本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多特异性多聚体融合多肽，其包含五个单体融合多肽，所述单体融合多肽各自包含至少一个Fab和SEQ ID NO:01的COMP结构域或SEQ ID NO:01的COMP结构域的可以与其他COMP结构域缔合的片段。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171101 EP 17199607.71.一种多特异性多聚体融合多肽，其包含五个单体融合多肽，所述单体融合多肽各自包含至少一个Fab和SEQIDNO:01的COMP结构域或SEQIDNO:01的COMP结构域的可以与其他COMP结构域缔合的片段。


2.根据权利要求1所述的多聚体融合多肽，其中对于五个单体融合多肽彼此独立地，Fab直接或通过肽接头缀合于COMP结构域。


3.根据权利要求1或2所述的多聚体融合多肽，其中对于五个单体融合多肽彼此独立地，COMP结构域与Fab的C末端或N末端缀合。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的多聚体融合多肽，其中所述Fab选自Fab、scFab、双特异性Fab和DAF。


5.根据权利要求1至3中任一项所述的多聚体融合多肽，其中所述Fab是半抗体。


6.根据权利要求5所述的多聚体融合多肽，其中所述半抗体是二聚的半抗体...

【专利技术属性】
技术研发人员：G·乔治斯，J·普拉策尔，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH