腺病毒及其用途制造技术

本文提供了腺病毒核酸序列和包含所述核酸序列的腺病毒载体。所提供的腺病毒载体可用于在受试者中诱导保护性免疫应答。

Adenovirus and its application

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】腺病毒及其用途
本专利技术涉及生物技术。更具体地说，涉及腺病毒载体诸如复制缺陷型腺病毒载体在宿主中递送抗原并引发免疫应答的领域和用途。
技术介绍
重组腺病毒载体广泛应用于基因治疗应用和疫苗。基于AdV-5载体的疫苗已显示出在多种动物模型中引发强有力的和保护性的免疫应答(参见例如WO2001/02607；WO2002/22080；Shiver等人,Nature[自然]415:331(2002)；Letvin等人,Ann.Rev.Immunol.[免疫学年鉴]20:73(2002)；Shiver和Emini,Ann.Rev.Med.[医学年鉴]55:355(2004))。然而，基于重组AdV-5载体的疫苗的效用将可能受到人群中AdV-5特异性中和抗体(NAb)的高血清阳性率的限制。在小鼠、恒河猴和人的研究中，抗AdV-5免疫的存在已经显示出基本上抑制了基于AdV-5的疫苗的免疫原性。一种在先前已被最常见的人腺病毒(例如AdV-5)感染或治疗的个体中规避预先存在的免疫性的有前景的策略涉及开发来自腺病毒血清型的重组载体，这些腺病毒血清型未遇到这种预先存在的免疫性。一种这样的策略是基于使用猿猴腺病毒，因为这些腺病毒通常不感染人并且在人样品中表现出低血清阳性率。猿猴腺病毒可应用于人类用途，因为已表明这些病毒可在体外感染人细胞(WO2003/000283、WO2004/037189)。因此，本领域需要可大量生产的、在宿主中不会遇到预先存在的免疫、但仍具有免疫原性并能够诱导针对由插入载体中的异源核酸编码的抗原的强烈免疫应答的替代性腺病毒载体。
技术实现思路
已经分离了新型猿腺病毒，这些腺病毒在系统发育上与人腺病毒C种属于同一组。已经开发了含有新的猿腺病毒分离株的新型核酸序列的腺病毒载体以满足尚未满足的需要。提供了编码新型猿腺病毒分离株的六邻体多肽的分离的核酸序列。在某些实施例中，六邻体多肽包括具有SEQIDNO:1的氨基酸序列的含六邻体高变区多肽。在某些实施例中，六邻体多肽包含BZ1六邻体多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:2)。还提供了编码新型猿腺病毒分离株的纤维多肽的分离的核酸序列。在某些实施例中，纤维多肽包含BZ28纤维多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:3)。本专利技术的实施例还包括由本专利技术的核酸序列编码的分离的纤维多肽和六邻体多肽。本文进一步提供了分离的核酸，这些分离的核酸包含编码本文披露的六邻体多肽中的至少一种的核酸序列，以及编码本文披露的纤维多肽中的至少一种的核酸序列。在某些实施例中，本文提供了包含本文所述的分离的核酸的载体。在一个实施例中，该载体是病毒载体。在另一个实施例中，该载体是表达载体。在一个优选的实施例中，该载体是腺病毒载体。更优选地，该载体进一步包含至少一种转基因。还提供了包含本文所述的载体的重组细胞。这样的细胞可以用于重组蛋白生产、重组蛋白表达，或载体或病毒颗粒的生产。还提供了生产载体的方法。这些方法包括(a)使本文披露的重组细胞在用于生产载体的条件下生长；以及(b)从该重组细胞中分离该载体。在某些实施例中，提供了包含本文披露的载体的免疫原性组合物。还提供了在有需要的受试者中诱导免疫应答的方法，这些方法包括向该受试者施用本文披露的免疫原性组合物。在某些实施例中，提供了腺病毒载体，这些腺病毒载体包含(a)至少一个转基因；以及(b)根据本专利技术的实施例的编码六邻体多肽的核酸序列。六邻体多肽可以例如包含具有SEQIDNO:1的氨基酸序列的含六邻体高变区多肽。在某些实施例中，六邻体多肽包含BZ1六邻体多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:2)或BZ28六邻体多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:5)。在某些实施例中，提供了腺病毒载体，这些腺病毒载体包含(a)至少一个转基因；以及(b)根据本专利技术的实施例的编码纤维多肽的核酸序列。在某些实施例中，纤维多肽包含选自BZ1(SEQIDNO:4)或BZ28纤维多肽(SEQIDNO:3)的氨基酸序列。本专利技术的实施例还包括腺病毒载体，这些腺病毒载体包含：(a)至少一个转基因；(b)根据本专利技术的实施例的编码六邻体多肽的核酸序列；以及(c)根据本专利技术的实施例的编码纤维多肽的核酸序列。在某些实施例中，本文提供的腺病毒载体是复制缺陷型腺病毒载体(rAd)。在一个实施例中，腺病毒载体可以包含E1缺失。在某些实施例中，本文提供的腺病毒载体可进一步包含E3缺失。腺病毒载体可以是包含来自一种或多种猿猴腺病毒(SAdV)诸如黑猩猩腺病毒(例如ChAd3)、大猩猩腺病毒或恒河猴腺病毒(例如，rhAd51、rhAd52或rhAd53)的腺病毒核酸序列的猿猴腺病毒载体。腺病毒载体可以是包含来自一种或多种人腺病毒(例如，hAdV-4、hAdV-5、hAdV-26、hAdV-35)的腺病毒序列的人腺病毒载体。优选地，腺病毒载体是包含一个或多个人腺病毒核酸序列的嵌合腺病毒载体。人腺病毒核酸序列可以例如来自人腺病毒-4(hAdV-4)、人腺病毒-5(hAdV-5)、人腺病毒-26(hAdV-26)或人腺病毒-35(hAdV-35)。腺病毒载体可以例如包含人腺病毒-5(hAdV-5)E4orf6和orf6/7。在某些实施例中，转基因与反向末端重复序列(ITR)相邻定位。在某些实施例中，转基因位于E1缺失处或附近、E3缺失处或附近、和/或右ITR(rITR)附近。在某些实施例中，本文提供的腺病毒载体包含SEQIDNO:9或SEQIDNO:10的核酸序列。还提供了包含本文所述的腺病毒载体和药学上可接受的载剂的免疫原性组合物或疫苗。进一步提供了用于在有需要的受试者中诱导免疫应答的方法。这些方法包括向该受试者施用本文披露的疫苗。进一步提供了生产疫苗的方法。这些方法包括将本文披露的腺病毒载体与药学上可接受的载剂组合。附图说明当结合附图阅读时，将更好地理解前述
技术实现思路
以及本申请的优选实施例的以下详细描述。然而，应当理解，本申请不限于附图中所示的精确实施例。图1显示由BZ1/BZ28.FLuc诱导的细胞和体液免疫应答。图1A显示实验设置。图1B显示免疫后2周时由Ad26.FLuc和BZ1/BZ28.FLuc诱导的针对载体编码的插入物(即，FLuc，萤火虫萤光素酶)的细胞免疫应答，如通过干扰素γ(IFN-γ)ELISPOT分析所测定的。图1C显示用Ad26.FLuc、BZ1/BZ28.Fluc和空Ad26载体免疫后2周在小鼠中诱导的FLuc特异性IgG抗体滴度的图。图2显示在用腺病毒载体Ad35、Ad26、Ad5、Ad4和BZ1/BZ28免疫的小鼠中诱导的同源和异源腺病毒中和滴度。图3显示Ad26和BZ1/BZ28在200个来自年龄为18-55岁、生活在美国(US)和欧盟(EU)的成人的人类群组血清样品中的血清阳性率。将这些血清中针对每种载体测得的中和滴度分成四个类别(<16(无中和)、16至300、300至1,000、1000至4000和>4000)，如在所示的图表中表示的。图4显示质粒p本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的核酸序列，该分离的核酸序列编码六邻体多肽，该六邻体多肽包括具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的含六邻体高变区多肽。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171031 EP 17199354.61.一种分离的核酸序列，该分离的核酸序列编码六邻体多肽，该六邻体多肽包括具有SEQIDNO:1的氨基酸序列的含六邻体高变区多肽。


2.如权利要求2所述的分离的核酸序列，其中该六邻体多肽包含SEQIDNO:2的氨基酸序列。


3.如权利要求1或2所述的分离的核酸序列，该分离的核酸序列进一步包含编码纤维多肽的核酸序列。


4.如权利要求3所述的分离的核酸序列，其中该纤维多肽包含SEQIDNO:3的氨基酸序列。


5.一种分离的核酸序列，该分离的核酸序列编码纤维多肽，该纤维多肽包含SEQIDNO:3的氨基酸序列。


6.一种载体，该载体包含如权利要求1-5中任一项所述的核酸。


7.如权利要求6所述的载体，该载体为腺病毒载体，并且进一步包含转基因。


8.如权利要求7所述的腺病毒载体，其中该腺病毒载体进一步包含E1缺失和E3缺失中的至少一种。


9.如...

【专利技术属性】
技术研发人员：T·G·乌伊尔，S·罗伊，S·卡恩，J·H·H·V·屈斯泰，
申请(专利权)人：扬森疫苗与预防公司，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL