本发明专利技术涉及一种抗PTN抗体在抑制白血病干细胞以及治疗慢性粒细胞白血病中的应用,所述抗PTN抗体能够以较高的亲和力结合PAI‑1蛋白,能够抑制CML干细胞的植入,能够抑制CML细胞生长,能够用于预防或治疗慢性粒细胞白血病,有着广阔的应用前景。
The application of anti PTN antibody in the inhibition of leukemia stem cells and the treatment of chronic myeloid leukemia
【技术实现步骤摘要】
抗PTN抗体在抑制白血病干细胞以及治疗慢性粒细胞白血病中的应用
本专利技术涉及生物医药领域,具体的涉及抗PTN抗体在抑制白血病干细胞以及治疗慢性粒细胞白血病中的应用。
技术介绍
慢性粒细胞性白血病(chronicmyelocyticleukemia,CML)是骨髓造血干细胞异常增殖形成的恶性肿瘤。起病较慢,以脾脏增大、外周血粒细胞明显增多为特征,第9号染色体和22号染色体的易位,形成费城染色体(Philadelphiachromosome,Ph),进而编码产生BCR-ABL1融合基因是其特殊性生物学标志,最终导致白血病干细胞(leukemiastemcell,LSC)的形成[1-3]。由于BCR-ABL1致癌蛋白具有持续激活的酪氨酸激酶活性,可诱导白血病细胞增殖失控、凋亡抑制,引起慢性粒细胞白血病的发生发展[4]。目前CML主要是通过酪氨酸激酶抑制剂(tyrosinekinaseinhibitors,TKIs)进行治疗。但TKIs治疗一旦中止,疾病常常会复发,说明TKIs只能抑制但不能将疾病治愈[5-7]。后续研究证明CML停药后复发与患者体内的白血病干细胞的持续存在有关。各项研究证明TKIs只能杀死处于分裂增殖状态的白血病细胞,并不能清除处于静止休眠期的慢粒白血病干细胞[8-11],这也是导致CML复发的关键原因。因此,清除白血病干细胞成为完全治愈慢性粒细胞白血病的关键点,也是当前慢性粒细胞白血病研究的热点[12]。现研究表明多效生长因子(pleiotrophin,PTN)在慢性粒细胞白血病干细胞的生长、存活以及慢性粒细胞白血病疾病发展过程中起到重要作用[13]。多效生长因子是Bohlen等在20世纪80年代从成年牛脑中分离纯化出的一种蛋白质,因为这种蛋白质可以与肝素结合因此称其为肝素结合生长因子。之后因其具有多种功能而被重新命名为多效生长因子。实验研究表明,PTN与细胞增殖与迁移[14]、肿瘤生长[15]、细胞分化[16,17]等功能有关。除此之外,研究表明小鼠CML干细胞中PTN的表达上调、分泌增多[18];TKIs处理后小鼠CML干细胞中PTN表达上调,且PTN以依赖c-Jun和UPR基因活化的方式诱导CML干细胞的生长和存活,表明PTN基因表达可能是TKIs处理后,CML干细胞仍然存活的原因[13]。因此可通过靶向PTN,达到清除CML干细胞以及完全治愈慢性粒细胞白血病的目的。到目前为止,已有PTN抗体在US20040234519专利中提及,但一方面它们对PTN的结合能力还并不十分理想,另一方面,它也没有用来治疗慢性粒细胞白血病。
技术实现思路
为了克服现有技术的上述缺陷,本专利技术的目的在于提供一种新的且具有更高PTN结合能力的抗PTN抗体,为治愈慢性粒细胞白血病提供一种新可能性。本专利技术提供以下技术方案:一种PTN抗体,由重链和轻链组成,重链和轻链分别包括可变区和恒定区,其中重链可变区包含3个互补决定区,分别命名为VH-CDR1,VH-CDR2,VH-CDR3;同样地,轻链可变区也包含3个互补决定区,分别命名为VL-CDR1,VL-VDR2,VL-CDR3。所述PTN抗体的重链包含如SEQIDNO:1所示的VH-CDR1氨基酸序列,和如SEQIDNO:2所示的VH-CDR2氨基酸序列,和如SEQIDNO:3所示的VH-CDR3氨基酸序列;所述PTN抗体的轻链包含如SEQIDNO:4所示的VL-CDR1氨基酸序列,和如SEQIDNO:5所示的VL-CDR2氨基酸序列,和如SEQIDNO:6所示的VL-CDR3氨基酸序列。本专利技术所述PTN抗体包含SEQIDNO:7所示的重链可变区和SEQIDNO:8所示的轻链可变区。本专利技术所述PTN抗体的重链可变区和轻链可变区均包含框架区,所述抗体轻链可变区进一步包含人源κ、λ链或其变体的轻链框架区。所述抗体重链可变区进一步包含人源IgG1、IgG2a、IgG2b或IgG3或IgG4或其变体的重链框架区。本专利技术所述PTN抗体包含恒定区,并且所述恒定区是人源化的,包含选自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区和包含选自kappa或Lambda亚型的轻链恒定区。在一些实施方案中,所述PTN抗体以37.2±5.3ng/ml的EC50值与PTN相结合。在一些实施方案中,所述PTN抗体能够抑制CML干细胞的植入。在一些实施方案中,所述PTN抗体能够抑制CML细胞生长。本专利技术提供一种治疗慢性粒细胞白血病的方法,其特征在于:使用本专利技术所述的抗PTN抗体或者将TKI抑制剂的与本专利技术所述的抗PTN抗体联合应用。本专利技术所述的PTN抗体可应用于制备治疗慢性粒细胞白血病的药物中,优选为与TKI抑制剂联合应用。本专利技术所使用的术语“抗体”指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分,即含有特异性结合抗原的抗原结合位点的分子,涵盖全长抗体(例如,IgG1或IgG4抗体)、其各种功能性片段(例如可仅包含抗原结合部分,如Fab、Fab′、F(ab′)2)。抗体的实例包括但不限于多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、Fab、Fab′、F(ab′)2片段等。术语“单克隆抗体”,指由单一的克隆细胞株得到的抗体,所述的细胞株不限于真核的,原核的或噬菌体的克隆细胞株。单克隆抗体或抗原结合片段可以用如杂交瘤技术、重组技术、噬菌体展示技术,合成技术(如CDR-grafting),或其它现有技术进行重组得到。Fab片段”由一条轻链和一条重链的CH1及可变区组成。Fab分子的重链不能与另一个重链分子形成二硫键。“Fab′片段”含有一条轻链和一条重链的VH结构域和CH1结构域以及CH1和CH2结构域之间的恒定区部分,由此可在两个Fab′片段的两条重链之间形成链间二硫键以形成F(ab′)2分子。“F(ab′)2片段”含有两条轻链和两条重链的VH结构域和CH1结构域以及CH1和CH2结构域之间的恒定区部分,由此在两条重链间形成链间二硫键。因此,F(ab′)2片段由通过两条重链间的二硫键保持在一起的两个Fab′片段组成。本文所用术语“超变区”或“CDR区”或“互补决定区”,是指负责抗原结合的抗体氨基酸残基。CDR区序列可以由Kabat、Chothia方法来定义或本领域熟知的任何CDR区序列确定方法而鉴定的可变区内的氨基酸残基。本专利技术所用的方法可利用或根据这些方法中的任一种所定义的CDR,包括但不限于Kabat定义、Chothia定义中的任一者来定义。具体地,本专利技术提供的CDR序列根据Kabat定义。术语“人源化抗体”是指抗体具有的人源框架、铰链区和恒定区与来自人基因组序列的框架和恒定区相同或基本上相同(基本上人源)。全人框架、铰链区和恒定区为那些人种系序列和具有自然发生的体细胞突变的序列。人源改造抗体可包含来自全人框架、铰链或恒定区的框架、铰链或恒定区,并在其中包含一个或多个氨基酸取代、缺失或添加。通常,人源改造抗体优选的在入中基本上没有免疫原性。在本专利技术的一优选实施方案中,所述的PTN人源本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗PTN抗体,由重链和轻链组成,重链和轻链分别包括可变区和恒定区,其中重链可变区中VH-CDR1-3的序列分别如SEQ ID NO:1-3所示;轻链可变区中VL-CDR1-3的序列分别如SEQ ID NO:4-6所示。/n
【技术特征摘要】
1.一种抗PTN抗体,由重链和轻链组成,重链和轻链分别包括可变区和恒定区,其中重链可变区中VH-CDR1-3的序列分别如SEQIDNO:1-3所示;轻链可变区中VL-CDR1-3的序列分别如SEQIDNO:4-6所示。
2.根据权利要求1所述的抗PTN抗体,其特征在于:所述重链可变区序列如SEQIDNo:7所示;所述轻链可变区序列如SEQIDNo:8所示。
3.根据权利要求1-2任一项所述的抗PTN抗体,其特征在于:所述抗体为全长抗体或其各种功能性片段。
4.根据权利要求1-2任一项所述的抗PTN抗体,其特征在于:所述抗体还包含选自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区和包含选自kappa或Lambda亚型的轻链恒定区。...
【专利技术属性】
技术研发人员:彭菲,顾超,
申请(专利权)人:北京岳昊科技发展有限公司,
类型:发明
国别省市:北京;11
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