抗人DLK1的抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及针对δ样1同源物(果蝇属)(DLK1)的抗体或其抗原结合片段，编码所述抗体或其抗原结合片段的核酸，包含所述核酸的载体，用所述载体转化的细胞，用于产生所述抗体或其抗原结合片段的方法，包含所述抗体或其抗原结合片段的抗体药物缀合物(ADC)，包含所述抗体或其抗原结合片段的用于治疗癌症的药物组合物、用于诊断癌症的组合物、以及嵌合抗原受体(CAR)和T细胞衔接物。

Anti human DLK1 antibody and its application

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗人DLK1的抗体及其用途
本专利技术涉及针对δ样1同源物(果蝇属(Drosophila))(DLK1)的抗体或其抗原结合片段，编码所述抗体或其抗原结合片段的核酸，包含所述核酸的载体，用所述载体转化的细胞，产生所述抗体或其抗原结合片段的方法，包含所述抗体或其抗原结合片段的抗体-药物缀合物(ADC)，包含所述抗体或其抗原结合片段的用于治疗癌症的药物组合物、用于诊断癌症的组合物、以及嵌合抗原受体(CAR)和T细胞衔接物(engager)。
技术介绍
人来源的δ样1同源物(果蝇属)(DLK1)是单次跨膜蛋白，其包含总共383个氨基酸并且在细胞外结构域中具有六个表皮生长因子样重复结构域。DLK1由于氨基酸序列与Notch受体的配体δ(其为调节细胞分化的因子)的同源性而一般被称为“DLK1”基因，并且也被称为“Pref-1”、“pG2”、“SCP-1”和“ZOG”。DLK1是膜蛋白，但也作为具有单独功能性的蛋白质而被熟知，所述蛋白质是通过肿瘤坏死因子α转化酶(TACE)使其细胞外结构域从细胞膜脱落而产生的。DLK1在未分化且因此易于增殖的胎儿细胞中高表达。特别地，DLK1在胎儿肝脏、肾脏、骨骼肌、脑等中高表达，但是在出生后，在大多数组织中没有发现DLK1的表达，并且DLK1仅在某些细胞如前脂肪细胞、胰岛细胞、胸腺基质细胞和肾上腺细胞中表达。DLK1被称为前脂肪细胞因子-1(Pref-1)，它是抑制脂肪细胞分化的因子，并且关于DLK1的功能研究在这方面进行地最活跃。除了抑制脂肪细胞分化的能力以外，已知DLK1参与抑制造血干细胞分化的功能、调节淋巴祖细胞分化的功能和促进伤口愈合的功能。还已经报道，DLK1在多个种类的癌症和肿瘤中以高频率表达。迄今为止已经在其中发现DLK1表达的癌症的例子包括：作为实体癌，神经内分泌肿瘤、神经母细胞瘤、神经胶质瘤、1型神经纤维瘤病、小细胞肺癌、肝癌、肾癌、卵巢癌、结直肠癌、乳腺癌和胰腺癌；以及作为血液癌症，骨髓增生异常综合征和急性髓性白血病。已经对DLK1与癌症之间的关系进行研究。例如，已经报道，DLK1在脑癌细胞(神经胶质瘤)中过表达，并且DLK1的cDNA在神经胶质瘤中的过表达增强神经胶质瘤的增殖，从而促进转移。已经报道，DLK1在肝癌中的表达水平高于在正常肝细胞中的表达水平，并且在通过siRNA实验减少DLK1表达时，肿瘤的大小减小。同时，虽然癌症是最常见死因之一的严重疾病，但是其治疗需求尚未得到满足。最近，为了解决常规化学疗法也对正常细胞造成损伤的问题，已经对使用分子靶向药物的癌症治疗展开积极研究，所述分子靶向药物被设计为靶向并治疗癌细胞中特异性表达的特异性分子。靶向特异性抗原的分子靶向药物已经可作为抗体药物广泛使用，并且其大多数例子具有抗体依赖性细胞毒性(ADCC)作为主要作用机制。然而，药物的功效不符合要求，并且针对更有效的抗癌活性的技术的开发也在进行中。增强抗体的抗癌活性的一个有效手段是将抗体与具有强毒性的物质(毒素)相连接。毒素在单独给予至患者时也对正常组织造成损伤，并且不能作为有效的治疗手段。然而，通过将毒素与结合至癌细胞特异性抗原的抗体相连接，可以实现仅杀伤癌细胞而对正常组织没有不良影响的能力。此类药物被称为抗体-药物缀合物(ADC)。在通过内吞作用将与癌细胞表面上存在的特异性靶受体结合的ADC掺入细胞中之后，抗体在溶酶体中降解而毒素从溶酶体中释放，使得毒性仅在特定的细胞内部表达，并且由于所述毒性的作用而杀伤所述细胞。迄今为止仅开发出有限数量的用于ADC的抗体，其代表性例子是赫赛汀(GenentechInc.)，它是抗Her2抗体，并且其他例子包括来自其他国际跨国制药公司的针对CD33、CD30、CD22、CD138、PMSA、EphA2等的相应抗体，这些抗体处于临床试验阶段或新药开发的早期阶段。在韩国，迄今为止开发用于ADC的新抗体的努力已经无关紧要。在这种技术背景下，本专利技术人已经尽力开发与DLK1特异性结合的抗体。因此，本专利技术人已经通过开发对DLK1展现出极佳结合亲和力的抗DLK1抗体以及证实可以通过使用所述抗DLK1抗体治疗或诊断目标癌症来完成本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的一个目标是提供针对δ样1同源物(DLK1)的新型抗体或其抗原结合片段。本专利技术的另一个目标是提供编码所述抗体或其抗原结合片段的核酸。本专利技术的另一个目标是提供包含所述核酸的载体、用所述载体转化的细胞、和产生所述抗体或其抗原结合片段的方法。本专利技术的另一个目标是提供包含所述抗体或其抗原结合片段的抗体-药物缀合物(ADC)。本专利技术的另一个目标是提供包含所述抗体或其抗原结合片段的用于预防或治疗癌症的药物组合物。本专利技术的另一个目标是提供包含所述抗体或其抗原结合片段的用于诊断癌症的组合物。本专利技术的另一个目标是提供包含所述抗体或其抗原结合片段的嵌合抗原受体(CAR)。本专利技术的另一个目标是提供包含所述抗体或其抗原结合片段的T细胞衔接物。【技术解决方案】为了实现上述目标，根据本专利技术的一个方面，提供与人δ样1同源物(果蝇属)(DLK1)特异性结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含以下重链可变区和轻链可变区：重链可变区，其包含选自SEQID.NO:2、16、30、44、58、72和86的至少一个重链CDR1，选自SEQID.NO:4、18、32、46、60、74和88的至少一个重链CDR2，和选自SEQIDNO:6、20、34、48、62、76和90的至少一个重链CDR3；和轻链可变区，其包含选自SEQIDNO:9、23、37、51、65、79、93、115和121的至少一个轻链CDR1，选自SEQIDNO:11、25、39、53、67、81和95的至少一个轻链CDR2，和选自SEQIDNO:13、27、41、55、69、83、97、116和125的至少一个轻链CDR3。在本专利技术的另一方面中，提供编码所述抗体或其抗原结合片段的核酸。在本专利技术的另一方面中，提供包含所述核酸的载体。在本专利技术的另一方面中，提供用所述载体转化的细胞。在本专利技术的另一方面中，提供产生所述抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括以下步骤：(a)培养细胞；以及(b)从所述培养的细胞回收抗体或其抗原结合片段。在本专利技术的另一方面中，提供包含所述抗体或其抗原结合片段和药物的抗体-药物缀合物(ADC)。在本专利技术的另一方面中，提供包含所述抗体或其抗原结合片段的双特异性抗体。在本专利技术的另一方面中，提供用于预防或治疗癌症的药物组合物，其包含所述抗体或其抗原结合片段、所述抗体-药物缀合物或所述双特异性抗体作为活性成分。在本专利技术的另一方面中，提供包含所述抗体或其抗原结合片段的用于诊断癌症的组合物。在本专利技术的另一方面中，提供包含所述抗体或其抗原结合片段的嵌合抗原受体(CAR)。在本专利技术的另一方面中，提供包含所述抗体或其抗原结合片段的T细胞衔接物，所述抗体或本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与δ样1同源物(果蝇属(Drosophila))(DLK1)特异性结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含以下重链可变区和轻链可变区：/n重链可变区，其包含：/n选自SEQ ID.NO:2、16、30、44、58、72和86的至少一个重链CDR1，选自SEQ ID.NO:4、18、32、46、60、74和88的至少一个重链CDR2，和/n选自SEQ ID NO:6、20、34、48、62、76和90的至少一个重链CDR3；和/n轻链可变区，其包含：/n选自SEQ ID NO:9、23、37、51、65、79、93、115和121的至少一个轻链CDR1，/n选自SEQ ID NO:11、25、39、53、67、81和95的至少一个轻链CDR2，和/n选自SEQ ID NO:13、27、41、55、69、83、97、116和125的至少一个轻链CDR3。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170908 KR 10-2017-01152631.一种与δ样1同源物(果蝇属(Drosophila))(DLK1)特异性结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含以下重链可变区和轻链可变区：
重链可变区，其包含：
选自SEQID.NO:2、16、30、44、58、72和86的至少一个重链CDR1，选自SEQID.NO:4、18、32、46、60、74和88的至少一个重链CDR2，和
选自SEQIDNO:6、20、34、48、62、76和90的至少一个重链CDR3；和
轻链可变区，其包含：
选自SEQIDNO:9、23、37、51、65、79、93、115和121的至少一个轻链CDR1，
选自SEQIDNO:11、25、39、53、67、81和95的至少一个轻链CDR2，和
选自SEQIDNO:13、27、41、55、69、83、97、116和125的至少一个轻链CDR3。


2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：
选自SEQIDNO:1、15、29、43、57、71、85和119的至少一个重链FR1；
选自SEQIDNO:3、17、31、45、59、73和87的至少一个重链FR2；
选自SEQIDNO:5、19、33、47、61、75和89的至少一个重链FR3；
选自SEQIDNO:7、21、35、49、63、77和91的至少一个重链FR4；
选自SEQIDNO:8、22、36、50、64、78、92、117和120的至少一个轻链FR1；
选自SEQIDNO:10、24、38、52、66、80、94和122的至少一个轻链FR2；
选自SEQIDNO:12、26、40、54、68、82、96、118和123的至少一个轻链FR3；或
选自SEQIDNO:14、28、42、56、70、84、98和125的至少一个轻链FR4。


3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含与选自SEQIDNO:99、101、103、105、107、109、111和127的序列具有至少90％同源性的序列。
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【专利技术属性】
技术研发人员：林廷采，申智英，尹善河，李相弼，崔允瑄，李智秀，曹英圭，刘奭镐，金应彻，李始炯，朴哉垠，宋英子，白基善，朴范灿，朴荣佑，
申请(专利权)人：Y生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：韩国;KR