针对程序性细胞死亡1(PD-1)的新抗体及其用途制造技术

本文公开一种针对人类程序性细胞死亡1(PD‑1)的抗体或其抗原结合片段、编码该抗体或其抗原结合片段的核酸、包括该核酸的载体、经该载体转化的经分离细胞、用于产生该抗体或其抗原结合片段的方法、以及含有该抗体或其抗原结合片段的用于预防或治疗癌症的组合物。该结合至PD‑1的新颖抗体或其抗原结合片段可结合至PD‑1并抑制PD‑1的活性，因此可用于研发针对多种与PD‑1相关的疾病的免疫治疗剂。

New antibodies against programmed cell death-1 (PD-1) and their applications

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】针对程序性细胞死亡1(PD-1)的新抗体及其用途
本公开文本涉及一种针对人类程序性细胞死亡1(PD-1)的抗体或其抗原结合片段、编码该抗体或其抗原结合片段的核酸、包括该核酸的载体、经该载体转化的经分离细胞、用于产生该抗体或其抗原结合片段的方法、以及含有该抗体或其抗原结合片段的用于预防或治疗癌症的组合物。
技术介绍
目前广泛应用的第一代化学治疗抗癌药和第二代靶向抗癌药具有以下问题：抗癌药毒性产生的副作用，高抗药性风险，以及只能将其给予具有特定基因突变的患者的限制。免疫抗癌药(免疫肿瘤学药物)称为“第三代抗癌药”，其克服了这些问题，作用于免疫细胞的信号传导路径以激活免疫细胞，并由此攻击癌细胞，从而提供治疗效果。与常规抗癌药不同，免疫抗癌药可以利用人类免疫系统治疗疾病的方式应用于包括癌症在内的多种疾病，并且所报告的副作用少于常规抗癌药。PD-1(也称为“CD279”)是与CD28/CTLA4共刺激性/抑制性受体家族结合的55KD受体蛋白(Blank等人,2005CancerImmunolImmunother54:307-314)。通过克隆编码PD-1的基因和cDNA来检查在小鼠和人类中的特征(Ishida等人,1992EMBOJ11:3887-3395；Shinohara等人,1994Genomics23:704-706)。全长PD-1含有288个氨基酸残基(NCBI登录号：NP_005009)。细胞外结构域由氨基酸残基1-167组成，并且细胞质C末端尾含有氨基酸残基191-288，其含有两个假设的免疫调节基序，即免疫受体酪氨酸基抑制性基序(ITIM；Vivier等人,1997ImmunolToday18:286-291)和免疫受体酪氨酸转换基序(ITSM；Chemnitz等人,2004JImmunol173:945-954)。迄今，已知两个序列相关配体PD-L1(B7-H1)和PD-L2(B7-DC)与PD-1特异性地相互作用以诱导细胞内信号传导，并抑制CD3和CD28介导的T细胞激活(Riley,2009ImmunolRev229:114-125)，从而最终调节T细胞活性，例如，减少其他生长因子和细胞因子的分泌，以及降低细胞生长，以及减少IL-2和IFN-γ的分泌。PD-1的表达在诸如T细胞、B细胞、单核细胞和天然杀伤(NK)细胞等免疫细胞中常见，并且在诸如肌肉、上皮和神经组织等其他人类组织中几乎不表达。另外，高PD-1表达水平通常与免疫细胞的活性相关。例如，在人类T细胞系Jurkat由PHA(植物血细胞凝集素)或12-O-十四酰基佛波醇-13-乙酸酯或TPA激活时，PD-1的表现上调，如根据Weston印迹法所见。由于抗CD3抗体的刺激，在经刺激的小鼠T淋巴细胞和B淋巴细胞以及初代人类CD4+T细胞中观察到相同现象。PD-1表达增加引起对效应T细胞的刺激并将活化的效应T细胞引导至耗尽和减少免疫激活的方向。因此，已知PD-1介导的抑制性信号在免疫耐受中具有关键作用。肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)中的PD-1表达增加以及肿瘤细胞中的PD-1配体表达增加已在多种癌症中报道，并且已在其他类型的组织和器官中报道，包括肺、肝、胃、乳房、卵巢、胰腺、黑色素细胞和食道。更通常地，PD-1和PD-L1在所述癌症中的表达与关于患者存活结果的较差预后相关。通过转基因小鼠更详细地描述PD-1信号传导对用于癌症移除或耐受的免疫系统调节的重要性，该转基因小鼠通过敲除PD-1基因来抑制异种移植癌细胞的生长。PD-1信号传导的上调导致免疫耐受性癌症增生以及人类病毒感染和转移。流行性乙型肝炎病毒、HBV和HCV诱导肝细胞中PD-1配体过表达，并激活效应T细胞中的PD-1信号传导，导致T细胞耗尽和对病毒感染的耐受。类似地，HIV感染通常通过类似的机制逃避人类免疫系统。PD-1信号传导可通过拮抗性分子进行治疗性调节，使得免疫细胞可从耐受恢复，并且可被再次激活以消除癌症和慢性病毒感染。纳武单抗(nivolumab)和派姆单抗(pembrolizumab)是单克隆抗体，已知可作为靶向PD-1的药物并且用作恶性黑色素瘤和非小细胞肺癌的治疗剂。然而，据报道，由于需要高生产成本和准确检验，这些药物会对患者造成巨大的经济压力。因此，业内急需研发新的靶向PD-1的治疗剂，其可克服常规药物的限制。在这种技术背景下，本专利技术人做出巨大努力来研发用于治疗癌症的特异性结合至PD-L1的抗体。因此，本专利技术人已使用噬菌体展示技术研发出以高亲和性与PD-L1结合的抗PD-L1抗体，并且已发现所述抗PD-L1抗体可显著抑制PD-1/PD-L1复合物的形成，由此实现本公开文本。公开内容技术问题因此，本公开文本的一个目标是提供针对PD-1或其抗原结合片段的新颖抗体。本公开文本的另一个目标是提供编码该抗体或其抗原结合片段的核酸。本公开文本的另一个目标是提供包括该核酸的载体、引入了该载体的重组细胞以及其产生方法。本公开文本的另一个目标是提供含有该抗体或其抗原结合片段的用于预防或治疗癌症的组合物。技术方案根据本公开文本，上述和其他目标可通过提供结合至PD-1的抗体或其抗原结合片段来完成，所述抗体或其抗原结合片段包括：重链可变区，其包括重链CDR1，该重链CDR1包括与选自下组的序列具有90％或更高序列同一性的序列，该组由如SEQIDNO:1至30中所述的序列组成；重链CDR2，该重链CDR2包括与选自下组的序列具有90％或更高序列同一性的序列，该组由如SEQIDNO:31至56中所述的序列组成；和重链CDR3，该重链CDR3包括与选自下组的序列具有90％或更高序列同一性的序列，该组由如SEQIDNO:57至79中所述的序列组成；以及轻链可变区，其包括轻链CDR1，该轻链CDR1包括与选自下组的序列具有90％或更高序列同一性的序列，该组由如SEQIDNO:198至222中所述的序列组成；轻链CDR2，该轻链CDR2包括与选自下组的序列具有90％或更高序列同一性的序列，该组由如SEQIDNO:223至241中所述的序列组成；和轻链CDR3，该轻链CDR3包括与选自下组的序列具有90％或更高序列同一性的序列，该组由如SEQIDNO:242至269中所述的序列组成。根据本公开文本的另一方面，提供编码该抗体或抗原结合片段的核酸。根据本公开文本的另一方面，提供包括该核酸的表达载体。根据本公开文本的另一方面，提供经该表达载体转化的细胞。根据本公开文本的另一方面，提供用于产生该抗体或其抗原结合片段的方法，包括(a)培养细胞，并且(b)从所培养的细胞回收抗体或其抗原结合片段。根据本公开文本的另一方面，提供用于预防或治疗癌症的组合物，其含有该抗体或其抗原结合片段作为活性成分。附图说明根据以下具体实施方式，结合附图，将更清楚地理解本公开文本的上述和其他目标、特征和其他优点，在所述附图中：图1是显示PD-1表达载体的示意图，该PD-1表达载体包括与其羧基末端融合的人类Fc或小鼠Fc；图2显示PD-1蛋白纯化的结果；图2A显示在10％SDS-PAGE凝胶上，在RE(还原性)和NR(非还原性)条件下，关于PD1-hFc的蛋白质鉴定的结果；图2B显示在1ml/min的流速下，且使用PBS作为显本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种结合至PD‑1的抗体或其抗原结合片段，其包含：重链可变区，其包含：重链CDR1，其包含与选自下组的序列具有90％或更高序列同一性的序列，该组由如SEQ ID NO:1至30中所述的序列组成；重链CDR2，其包含与选自下组的序列具有90％或更高序列同一性的序列，该组由如SEQ ID NO:31至56中所述的序列组成；和重链CDR3，其包含与选自下组的序列具有90％或更高序列同一性的序列，该组由如SEQ ID NO:57至79中所述的序列组成；以及轻链可变区，其包含：轻链CDR1，其包含与选自下组的序列具有90％或更高序列同一性的序列，该组由如SEQ ID NO:198至222中所述的序列组成；轻链CDR2，其包含与选自下组的序列具有90％或更高序列同一性的序列，该组由如SEQ ID NO:223至241中所述的序列组成；和轻链CDR3，其包含与选自下组的序列具有90％或更高序列同一性的序列，该组由如SEQ ID NO:242至269中所述的序列组成。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.08.05 KR 10-2016-01002101.一种结合至PD-1的抗体或其抗原结合片段，其包含：重链可变区，其包含：重链CDR1，其包含与选自下组的序列具有90％或更高序列同一性的序列，该组由如SEQIDNO:1至30中所述的序列组成；重链CDR2，其包含与选自下组的序列具有90％或更高序列同一性的序列，该组由如SEQIDNO:31至56中所述的序列组成；和重链CDR3，其包含与选自下组的序列具有90％或更高序列同一性的序列，该组由如SEQIDNO:57至79中所述的序列组成；以及轻链可变区，其包含：轻链CDR1，其包含与选自下组的序列具有90％或更高序列同一性的序列，该组由如SEQIDNO:198至222中所述的序列组成；轻链CDR2，其包含与选自下组的序列具有90％或更高序列同一性的序列，该组由如SEQIDNO:223至241中所述的序列组成；和轻链CDR3，其包含与选自下组的序列具有90％或更高序列同一性的序列，该组由如SEQIDNO:242至269中所述的序列组成。2.权利要求1的抗体或其抗原结合片段，其包含：重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:31的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3；重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:32的重链CDR2和SEQIDNO:79的重链CDR3；或重链可变区，其包含SEQIDNO:1的重链CDR1、SEQIDNO:32的重链CDR2和SEQIDNO:57的重链CDR3。3.权利要求1的抗体或其抗原结合片段，其包含：轻链可变区，其包含SEQIDNO:198的...

【专利技术属性】
技术研发人员：朴哉垠，金秀盈，李玄美，李始炯，李炫镜，金惠暖，尹镇喆，朴范灿，林廷采，曹英圭，朴荣祐，
申请(专利权)人：Y生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：韩国,KR