细胞接合的结合分子制造技术

本公开广泛地涉及癌症免疫治疗领域。例如，本公开一般涉及结合分子，所述结合分子包括抗体可变轻链(VL)区、可变重链(VH)区、恒定重链1(CH1)区和轻链恒定(CL)区，其配置形成两个抗原结合Fab区和一个抗原结合Fv区，使所述结合分子结合两种不同的抗原。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞接合的结合分子交叉引用本申请要求2018年4月10日提交的美国临时申请号62/655,762和2018年8月17日提交的美国临时申请号62/719,484的优先权。本申请进一步要求2019年4月1日提交的美国申请号16/372,172、2019年4月1日提交的美国申请号16/372,190和2019年4月1日提交的美国申请号16/372,196的优先权。上述每个申请的全部内容均通过引用并入本文。序列表本申请通过引用整体并入通过EFS-Web提交的ASCII文本格式的序列表的计算机可读形式(CRF)。通过EFS-Web提交的序列表文本文件名为14489-004-228_SEQ_LISTING.txt，创建于2019年4月2日，大小为140,862字节。
本公开一般涉及细胞接合的结合分子、制备所述结合分子的方法、包含所述结合分子的组合物及其用途。
技术介绍
现在抗体和/或基于抗体的试剂是治疗多种疾病和病症的选择。目前，美国和/或欧盟至少批准了70种抗体，并且在临床前研究和临床试验中有大量新分子。然而，在研究和临床领域中持续寻求新的、更好和更安全的治疗剂。天然产生的抗体是单特异性的，并且结合一个表位或抗原。多特异性抗体结合了多种抗体的特异性，并具有结合不同抗原或表位的能力。但是，许多技术障碍阻碍了多特异性抗体的发展；正因如此，很少有多特异性抗体被批准用作治疗剂。因此，仍然需要更好的多特异性抗体和高效生产功能的和稳定的多特异性抗体的方法。专利技术概述本公开分别提供了具有多个结合结构域的细胞接合的结合分子、制备所述结合分子的方法以及包含所述结合分子的药物组合物。本文还提供了包括施用所述结合分子的治疗方法。一方面，本文提供了细胞接合的结合分子。在一些实施方案中，提供了一种结合分子，其包括：(a)第一多肽和第二多肽，所述第一多肽和第二多肽各自包含抗体轻链，(b)第三多肽，所述第三多肽以从N端至C端的顺序包含第一可变重链(VH)区和第一恒定重链1(CH1)区、以及第二VH区；和(c)第四多肽，所述第四多肽以从N端至C端的顺序包含第三VH区和第二CH1区以及可变轻链(VL)区，其中，所述第一多肽与所述第三多肽的第一VH区和第一CH1区形成第一抗原结合Fab区；其中，所述第二多肽与所述第四多肽的第三VH区和第二CH1区形成第二抗原结合Fab区；其中，所述第三多肽的第二VH区和所述第四多肽的VL区形成抗原结合Fv区；和其中，所述第一Fab区和所述第二Fab区结合第一抗原，所述Fv区结合第二抗原，并且所述第一抗原与所述第二抗原不同。在一些实施方案中，对于任何前述结合分子，所述第三多肽还包含在所述第二VH区C端的恒定重链3(CH3)区。在一些实施方案中，对于任何前述结合分子，所述第四多肽进一步包含在VL区C端的CH3区。在一些实施方案中，对于任何前述结合分子，所述第三和第四多肽都进一步包含分别在所述第二VH区C端和所述VL区C端的CH3区。在一些实施方案中，对于任何前述结合分子，所述第三多肽进一步包含在所述第二VH区C端的白蛋白结合结构域或位点(ABS)。在一些实施方案中，对于任何前述结合分子，所述第四多肽进一步包含在所述VL区C端的ABS。在一些实施方案中，对于任何前述结合分子，所述第三和第四多肽都还分别包含在所述第二VH区和所述VL区C端的ABS。在一些实施方案中，对于任何前述结合分子，所述第三多肽在第二VH区的C端还包含恒定重链3(CH3)区和ABS。在一些实施方案中，对于任何前述结合分子，所述第四多肽在VL区的C端进一步包含CH3区和ABS。在一些实施方案中，对于任何前述结合分子，所述第三和第四多肽在第二VH区和VL区的C端都还分别包含CH3区ABS的。在一些实施方案中，对于任何前述结合分子，所述第三多肽和/或四个多肽在第二VH区和/或VL区的C端还分别包含CH1区和ABS的。在一些实施方案中，对于任何前述结合分子，所述第一和/或第二多肽还包含ABS。在一些实施方案中，对于任何前述结合分子，所述第一和/或第二多肽在抗体轻链的C端还包含ABS。在具体的实施方案中，对于任何前述结合分子，所述第一和/或第二多肽在抗体轻链的C端还包含一个ABS。在一些实施方案中，本文提供了结合分子，其中，所述第一Fab区和所述第二Fab区通过柔性肽区连接至所述Fv区。在一些实施方案中，所述第一Fab区和所述第二Fab区通过融合连接至所述Fv区。在一些实施方案中，所述柔性肽区包含抗体铰链区。在一些实施方案中，所述抗体铰链区是免疫球蛋白G(IgG)铰链区。在一些实施方案中，所述抗体铰链区选自由IgG1、IgG2、IgG3、和IgG4组成的组的铰链区。在一些实施方案中，所述抗体铰链区包括在所述第三多肽和所述第四多肽之间的链间二硫键。在一些实施方案中，所述柔性肽区还包括接头。在一些实施方案中，所述接头包含氨基酸序列GGGGS(G4S)。在一些实施方案中，所述接头包含氨基酸序列GGGGS(G4S)的两个串联拷贝。在一些实施方案中，所述第一Fab区和所述第二Fab区结合所述第一抗原的相同表位。在一些实施方案中，所述第二抗原在免疫细胞上表达。在一些实施方案中，所述免疫细胞选自由淋巴细胞和单核细胞组成的组。在一些实施方案中，所述免疫细胞是效应细胞。在一些实施方案中，所述免疫细胞选自由T细胞、B细胞、树突细胞、粒细胞、先天淋巴样细胞、巨核细胞、单核细胞、骨髓来源的抑制细胞和自然杀伤(NK)细胞组成的组。在一些实施方案中，所述第一抗原是癌症抗原。在一些实施方案中，所述癌症抗原是肿瘤相关抗原(TAA)或肿瘤特异性抗原(TSA)。在一些实施方案中，所述第一抗原选自CD19、CD20、EGFR、Her2、和PD-L1组成的组。在一些实施方案中，所述第二抗原是CD3或TNFα。在一些实施方案中，所述第一抗原是癌症抗原，所述第二抗原是CD3。在一些实施方案中，所述癌症抗原选自CD19、CD20、EGFR、Her2和PD-L1组成的组。另一方面，本文提供了制备结合分子的方法。在一些实施方案中，提供了一种制备结合分子的方法，包括：(i)在宿主细胞中表达一种或多种载体的结合分子，其中，所述一种或多种载体包括(a)第一核酸，所述第一核酸编码所述第一多肽，和第二核酸，所述第二核酸编码所述第二多肽，其中，所述第一多肽和所述第二多肽各自是抗体轻链，(b)第三核酸，所述第三核酸编码所述第三多肽，所述第三多肽按从N端到C端的顺序包含第一VH区，和第一CH1区以及第二VH区；和(c)第四核酸，所述第四核酸编码所述第四多肽，所述第四多肽按从N端至C端的顺序包含第三VH区、第二CH1区和VL区，其中，所述第一多肽和所述第三多肽的所述第一VH区和所述第一CH1区能够形成第一抗原结合Fab区；其中，所述第二多肽和所述第四多肽的所述第三VH区和所述第二CH1区能够形成第二抗原结合Fab本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种结合分子，其包含：/n(a)第一抗原结合结构域，所述第一抗原结合结构域包含两个抗体Fab区，每个区包括：/n(i)第一部分，所述第一部分包含抗体可变重链(VH)区和抗体CH1区，其中所述第一部分不包含抗体CH2区和抗体CH3区；和/n(ii)第二部分，所述第二部分包含抗体轻链(LC)，所述抗体轻链(LC)包含抗体可变轻链(VL)区和抗体轻链恒定区(CL)，/n其中，所述两个抗体Fab区各自结合抗原，以及/n(b)第二抗原结合结构域，所述第二抗原结合结构域包含抗体Fv区，所述抗体Fv区包含VH区和VL区，/n其中，所述第二抗原结合结构域与存在于免疫细胞上的抗原结合；并且/n其中，所述第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域相连。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180410 US 62/655,762;20180817 US 62/719,484;20191.一种结合分子，其包含：
(a)第一抗原结合结构域，所述第一抗原结合结构域包含两个抗体Fab区，每个区包括：
(i)第一部分，所述第一部分包含抗体可变重链(VH)区和抗体CH1区，其中所述第一部分不包含抗体CH2区和抗体CH3区；和
(ii)第二部分，所述第二部分包含抗体轻链(LC)，所述抗体轻链(LC)包含抗体可变轻链(VL)区和抗体轻链恒定区(CL)，
其中，所述两个抗体Fab区各自结合抗原，以及
(b)第二抗原结合结构域，所述第二抗原结合结构域包含抗体Fv区，所述抗体Fv区包含VH区和VL区，
其中，所述第二抗原结合结构域与存在于免疫细胞上的抗原结合；并且
其中，所述第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域相连。


2.如权利要求1所述的结合分子，其中，所述第一抗原结合结构域的每个所述Fab区的第一部分和第二部分在同一多肽上。


3.如权利要求2所述的结合分子，其中，至少一个所述Fab区按以下顺序从N端至C端取向：VH-CH1-VL-CL。


4.如权利要求2的结合分子，其中，至少一个所述Fab区按以下顺序从N端至C端取向：VL-CL-VH-CH1。


5.如权利要求1所述的结合分子，其中，每个所述Fab区的第一部分和第二部分存在于分开的多肽上。


6.如权利要求1-5中任一项所述的结合分子，其中，所述Fv区的VH区和VL区在同一多肽上。


7.如权利要求6所述的结合分子，其中，所述Fv区按以下顺序从N端至C端取向：VH-VL。


8.如权利要求6所述的结合分子，其中，所述Fv区按以下顺序从N端到C端取向：VL-VH。


9.如权利要求1-5中任一项所述的结合分子，其中，所述Fv区的VH区和VL区在分开的多肽上。


10.如权利要求1-9中任一项所述的结合分子，其中，所述第一抗原结合结构域和所述第二抗原结合结构域通过柔性肽区连接。


11.如权利要求10所述的结合分子，其中，所述柔性肽区包括抗体铰链区。


12.如权利要求11所述的结合分子，其中，所述抗体铰链区为IgG铰链区。


13.如权利要求12所述的结合分子，其中，所述IgG铰链区为IgG1亚型的IgG铰链区。


14.如权利要求12所述的结合分子，其中，所述IgG铰链区为IgG2亚型的IgG铰链区。


15.如权利要求12所述的结合分子，其中，所述IgG铰链区为IgG3亚型的IgG铰链区。


16.如权利要求12所述的结合分子，其中，所述IgG铰链区为IgG4亚型的IgG铰链区。


17.如权利要求11所述的结合分子，其中，所述柔性肽区还包括所述抗体铰链区和所述第二抗原结合结构域之间的接头。


18.如权利要求17所述的结合分子，其中，所述接头包括氨基酸序列GGGGS(G4S)。


19.如权利要求1所述的结合分子，其中，所述第二抗原结合结构域还包括连接至所述Fv区域的所述VH区的第一CH3区和连接至所述Fv区域的所述VL区的第二CH3区。


20.如权利要求1所述的结合分子，其中，所述结合分子还包括一个或多个白蛋白结合区域或位点(ABS)。


21.如权利要求20所述的结合分子，其中，所述ABS连接至所述Fv区的所述VH区的C端。


22.如权利要求20所述的结合分子，其中，所述ABS连接至所述Fv区的所述VL区的C端。


23.如权利要求20所述的结合分子，其中，所述ABS连接至至少一个所述Fab区的所述CL区。


24.如权利要求1所述的结合分子，其中，所述结合分子还包含一个或多个白蛋白结构域。


25.如权利要求1-18中任一项所述的结合分子，其中，所述两个Fab区结合不同的抗原。


26.如权利要求1-18中任一项所述的结合分子，其中，所述两个Fab区结合相同抗原。


27.如权利要求26所述的结合分子，其中，所述两个Fab区结合相同抗原的相同表位。


28.如权利要求26所述的结合分子，其中，所述两个Fab区结合相同抗原的不同表位。


29.如权利要求26所述的结合分子，其中，所述第一抗原结合结构域和所述第二抗原结合结构域结合相同抗原。


30.如权利要求26所述的结合分子，其中，所述第二抗原结合结构域结合与所述第一抗原结合结构域结合的至少一个表位相同的表位。


31.如权利要求26所述的结合分子，其中，所述第一抗原结合结构域和所述第二抗原结合结构域结合不同的抗原，并且其中，所述第一抗原结合结构域结合第一抗原，并且所述第二抗原结合结构域结合第二抗原。


32.如权利要求31所述的结合分子，其中，所述第一抗原为癌症抗原。


33.如权利要求31所述的结合分子，其中，所述第一抗原不为癌症抗原。


34.如权利要求31所述的结合分子，其中，所述第二抗原在选自由淋巴细胞和单核细胞组成的组中的免疫细胞上表达。


35.如权利要求31所述的结合分子，其中，所述第二抗原在效应细胞上表达。


36.如权利要求34所述的结合分子，其中，所述第二抗原在T细胞上表达。


37.如权利要求36所述的结合分子，其中，所述第二抗原在T辅助细胞、调节性T细胞或细胞毒性T细胞上表达。


38.如权利要求37所述的结合分子，其中，所述第二抗原在T辅助细胞上表达。


39.如权利要求37所述的结合分子，其中，所述第二抗原在调节性T细胞上表达。


40.如权利要求37所述的结合分子，其中，所述第二抗原在细胞毒性T细胞上表达。


41.如权利要求36所述的结合分子，其中，所述第二抗原在CD8+T细胞上表达。


42.如权利要求36所述的结合分子，其中，所述第二抗原在CD4+T细胞上表达。


43.如权利要求34所述的结合分子，其中，所述第二抗原包括胞外结构域。


44.如权利要求35所述的结合分子，其中，所述第二抗原为CD3。


45.如权利要求31所述的结合分子，其中，所述第一抗原为癌症抗原，并且所述第二抗原为CD3。


46.如权利要求45所述的结合分子，其中，所述第一抗原为PD-L1，并且所述第二抗原为CD3。


47.如权利要求46所述的结合分子，
其中，每个Fab区的所述第一部分的所述VH区包含三个氨基酸序列如SEQIDNO.:5、SEQIDNO.:6和SEQIDNO.:7所示的CDR；
其中，每个Fab区的所述第二部分的所述VL区包含三个氨基酸序列如SEQIDNO.:9、SEQIDNO.:10和SEQIDNO.:11所示的CDR；
其中，所述Fv区的所述VH区包含三个氨基酸序列如SEQIDNO.:13、SEQIDNO.:14、SEQIDNO.:15所示的CDR；和
其中，所述Fv区的所述VL区包含三个氨基酸序列如SEQIDNO.:17、SEQIDNO.:18和SEQIDNO.:19所示的CDR。


48.如权利要求46所述的结合分子，
其中，每个Fab区的所述第一部分的所述VH区的氨基酸序列如SEQIDNO.:4所示；
其中，每个Fab区所述第二部分的所述VL区的氨基酸序列如SEQIDNO.:8所示；
其中，所述Fv区的所述VH区的氨基酸序列如SEQIDNO.:12所示；和
其中，所述Fv区的所述VL区的氨基酸序列如SEQIDNO.:16所示。


49.如权利要求45所述的结合分子，其中，所述第一抗原为CD20，并且所述第二抗原为CD3。


50.如权利要求49所述的结合分子，
其中，每个Fab区的所述第一部分的所述VH区包含三个氨基酸序列如SEQIDNO.:27、SEQIDNO.:28、SEQIDNO.:29所示的CDR；
其中，每个Fab区的所述第二部分的所述VL区包含三个氨基酸序列如SEQIDNO.:31、SEQIDNO.:32和SEQIDNO.:33所示的CDR；
其中，所述Fv区的所述VH区包含三个氨基酸序列如SEQIDNO.:13、SEQIDNO.:14、SEQIDNO.:15所示的CDR；和
其中，所述Fv区的所述VL区包含三个氨基酸序列如SEQIDNO.:17、SEQIDNO.:18和SEQIDNO.:19所示的CDR。


51.如权利要求49所述的结合分子，
其中，每个Fab区的所述第一部分的所述VH区的氨基酸序列如SEQIDNO.:26所示；
其中，每个Fab区所述第二部分的所述VL区的氨基酸序列如SEQIDNO.:30所示；
其中，所述Fv区的所述VH区的氨基酸序列如SEQIDNO.:12所示；和
其中，所述Fv区的所述VL区的氨基酸序列如SEQIDNO.:16所示。


52.如权利要求45所述的结合分子，其中，所述第一抗原为EGFR，并且所述第二抗原为CD3。


53.如权利要求52所述的结合分子，
其中，每个Fab区的所述第一部分的所述VH区包含三个氨基酸序列如SEQIDNO.:41、SEQIDNO.:42和SEQIDNO.:43所示的CDR；
其中，每个Fab区所述第二部分的所述VL区包含三个氨基酸序列如SEQIDNO.:45、SEQIDNO.:46和SEQIDNO.:47所示的CDR；
其中，所述Fv区的所述VH区包含三个氨基酸序列如SEQIDNO.:13、SEQIDNO.:14和SEQIDNO.:15所示的CDR和
其中，所述Fv区的所述VL区包含三个氨基酸序列如SEQIDNO.:17、SEQIDNO.:18和SEQIDNO.:19所示的CDR。


54.如权利要求52所述的结合分子，
其中，每个Fab区的所述第一部分的所述VH区的氨基酸序列如SEQIDNO.:40所示；
其中，每个Fab区的所述第二部分的所述VL区的氨基酸序列如SEQIDNO.:44所示；
其中，所述Fv区的所述VH区的氨基酸序列如SEQIDNO.:12所示；和
其中，所述Fv区的所述VL区的氨基酸序列如SEQIDNO.:16所示。


55.一种结合分子，其包括：
(a)第一多肽和第二多肽，所述第一多肽和第二多肽各自包含抗体轻链，
(b)第三多肽，所述第三多肽包含第一VH区和第一CH1区以及第二VH区；和
(c)第四多肽，所述第四多肽包含第三VH区和第二CH1，以及VL区；
其中，所述第一多肽、以及所述第三多肽的第一VH区和第一CH1区形成第一抗原结合Fab区；
其中，所述第二多肽、以及所述第四多肽的第三VH区和第二CH1区形成第二抗原Fab区；和
其中，所述第三多肽的第二VH区和所述第四多肽的VL区形成抗原结合Fv区。


56.如权利要求55所述的结合分子，其中，所述第一Fab区和所述第二Fab区通过柔性肽区连接至所述Fv区。


57.如权利要求56所述的结合分子，其中，所述柔性肽区包括抗体铰链区。


58.如权利要求57所述的结合分子，其中，所述抗体铰链区为IgG铰链区。


59.如权利要求58所述的结合分子，其中，所述IgG铰链区为IgG1亚型的IgG铰链区。


60.如权利要求58所述的结合分子，其中，所述IgG铰链区为IgG2亚型的IgG铰链区。


61.如权利要求58所述的结合分子，其中，所述IgG铰链区为IgG3亚型的IgG铰链区。


62.如权利要求58所述的结合分子，其中，所述IgG铰链区为IgG4亚型的IgG铰链区。


63.如权利要求57所述的结合分子，其中，所述柔性肽区还包括接头。


64.如权利要求63所述的结合分子，其中，所述接头包含氨基酸序列GGGGS(G4S)。


65.如权利要求55-64中任一项所述的结合分子，其中，所述第一Fab区和所述第二Fab区结合不同的抗原。


66.如权利要求55-64中任一项所述的结合分子，其中，所述第一Fab区和所述第二Fab区结合相同的抗原。


67.如权利要求66所述的结合分子，其中，所述第一Fab区和所述第二Fab区结合相同抗原的相同表位。


68.如权利要求66所述的结合分子，其中，所述第一Fab区和所述第二Fab区结合相同抗原的不同表位。


69.如权利要求66所述的结合分子，其中，所述第一Fab区和所述第二Fab区形成第一抗原结合结构域，并且所述Fv区域为第二抗原结合结构域。


70.如权利要求69所述的结合分子，其中，所述第一抗原结合结构域和所述第二抗原结合结构域结合相同的抗原。


71.如权利要求69所述的结合分子，其中，所述第二抗原结合结构域结合与所述第一抗原结合结构域结合的至少一个表位相同的表位。


72.如权利要求69所述的结合分子，其中，所述第一抗原结合结构域和所述第二抗原结合结构域结合不同的抗原，并且其中，所述第一抗原结合结构域结合第一抗原，并且所述第二抗原结合结构域结合第二抗原。


73.如权利要求72所述的结合分子，其中，所述第一抗原为癌症抗原。


74.如权利要求72所述的结合分子，其中，所述第一抗原不为癌症抗原。


75.如权利要求72所述的结合分子，其中，所述第二抗原在选自由淋巴细胞和单核细胞组成的组中的免疫细胞上表达。


76.如权利要求72所述的结合分子，其中，所述第二抗原在效应细胞上表达。


77.如权利要求75所述的结合分子，其中，所述第二抗原在T细胞上表达。


78.如权利要求77所述的结合分子，其中，所述第二抗原在T辅助细胞、调节性T细胞或细胞毒性T细胞上表达。


79.如权利要求78所述的结合分子，其中，所述第二抗原在T辅助细胞上表达。


80.如权利要求78所述的结合分子，其中，所述第二抗原在调节性T细胞上表达。


81.如权利要求78所述的结合分子，其中，所述第二抗原在细胞毒性T细胞上表达。


82.如权利要求77所述的结合分子，其中，所述第二抗原在CD8+T细胞上表达。


83.如权利要求77所述的结合分子，其中，所述第二抗原在CD4+T细胞上表达。


84.如权利要求75所述的结合分子，其中，所述第二抗原包含胞外结构域。


85.如权利要求75所述的结合分子，其中，所述第二抗原为CD3。


86.如权利要求72所述的结合分子，其中，所述第一抗原为癌症抗原，并且所述第二抗原为CD3。


87.如权利要求86所述的结合分子，其中，所述第一抗原为PD-L1，并且所述第二抗原为CD3。


88.如权利要求87所述的结合分子，
其中，每个Fab区的所述第一部分的所述VH区包含三个氨基酸序列如SEQIDNO.:5、SEQIDNO.:6和SEQIDNO.:7所示的CDR；
其中，每个Fab区的所述第二部分的所述VL区包含三个氨基酸序列如SEQIDNO.:9、SEQIDNO.:10和SEQIDNO.:11所示的CDR；
其中，所述Fv区的所述VH区包含三个氨基酸序列如SEQIDNO.:13、SEQIDNO.:14和SEQIDNO.:15所示的CDR；和
其中，所述Fv区的所述VL区包含三个氨基酸序列如SEQIDNO.:16、SEQIDNO.:17和SEQIDNO.:19所示的CDR。


89.如权利要求87所述的结合分子，
其中，每个Fab区的所述第一部分的所述VH区的氨基酸序列如SEQIDNO.:4所示；
其中，每个Fab区所述第二部分的所述VL区的氨基酸序列如SEQIDNO.:8所示；
其中，所述Fv区的所述VH区的氨基酸序列如SEQIDNO.:12所示；和
其中，所述Fv区的所述VL区的氨基酸序列如SEQIDNO.:16所示。


90.如权利要求87所述的结合分子，其中，所述第一多肽和所述第二多肽各自具有如SEQIDNO.:3所示的氨基酸序列，所述第三多肽的氨基酸序列如SEQIDNO.:1所示，并且所述第四多肽的氨基酸序列如SEQIDNO.:2所示。


91.如权利要求72所述的结合分子，其中，所述第一抗原为CD20，并且所述第二抗原为CD3。


92.如权利要求91所述的结合分子，
其中，每个Fab区的所述第一部分的所述VH区包含三个氨基酸序列如SEQIDNO.:27、SEQIDNO.:28和SEQIDNO.:29所示的CDR；
其中，每个Fab区的所述第二部分的所述VL区包含三个氨基酸序列如SEQIDNO.:31、SEQIDNO.:32和SEQIDNO.:33所示的CDR；
其中，所述Fv区的所述VH区包含三个氨基酸序列如SEQIDNO.:13、SEQIDNO.:14和SEQIDNO.:15所示的CDR；和
其中，所述Fv区的所述VL区包含三个氨基酸序列如SEQIDNO.:17、SEQIDNO.:18和SEQIDNO.:19所示的CDR。


93.如权利要求91所述的结合分子，
其中，每个Fab区的所述第一部分的所述VH区的氨基酸序列如SEQIDNO.:26所示；
其中，每个Fab区所述第二部分的所述VL区的氨基酸序列如SEQIDNO.:30所示；
其中，所述Fv区的所述VH区的氨基酸序列如SEQIDNO.:12所示；和
其中，所述Fv区的所述VL区的氨基酸序列如SEQIDNO.:16所示。


94.如权利要求91所述的结合分子，其中，所述第一多肽和所述第二多肽各自具有如SEQIDNO.:25所示的氨基酸序列；所述第三多肽的氨基酸序列如SEQIDNO.:23所示；且所述第四多肽的氨基酸序列如SEQIDNO.:24所示。


95.如权利要求72所述的结合分子，其中，所述第一抗原为EGFR，并且所述第二抗原为CD3。


96.如权利要求95所述的结合分子，
其中，每个Fab区的所述第一部分的所述VH区包含三个氨基酸序列如SEQIDNO.:41、SEQIDNO.:42、SEQIDNO.:43所示的CDR；
其中，每个Fab区的所述第二部分的所述VL区包含三个氨基酸序列如SEQIDNO.:45、SEQIDNO.:46和SEQIDNO.:47所示的CDR；
其中，所述Fv区的所述VH区包含三个氨基酸序列如SEQIDNO.:13、SEQIDNO.:14和SEQIDNO.:15所示的CDR；和
其中，所述Fv区的所述VL区包含三个氨基酸序列如SEQIDNO.:17、SEQIDNO.:18和SEQIDNO.:19所示的CDR。


97.如权利要求95所述的结合分子，
其中，每个Fab区的所述第一部分的所述VH区的氨基酸序列如SEQIDNO.:40所示；
其中，每个Fab区的所述第二部分的所述VL区的氨基酸序列如SEQIDNO.:44所示；
其中，所述Fv区的所述VH区的氨基酸序列如SEQIDNO.:12所示；和
其中，所述Fv区的所述VL区的氨基酸序列如SEQIDNO.:16所示。


98.如权利要求95所述的结合分子，其中，所述第一多肽和所述第二多肽各自具有如SEQIDNO.:39所示的氨基酸序列；所述第三多肽的氨基酸序列如SEQIDNO.:37所示；且所述第四多肽的氨基酸序列如SEQIDNO.:38所示。


99.一种制备结合分子的方法，包括将一种或多种载体转染到宿主细胞中，其中所述一种或多种载体包括：
(a)第一核酸，所述第一核酸编码第一多肽和第二多肽，所述第一多肽和第二多肽各自为抗体轻链；
(b)第二核酸，所述第二核酸编码第三多肽，所述第三多肽包含第一VH区和第一CH1区以及第二VH区；和
(c)第三核酸，所述第三核酸编码第四多肽，所述第四多肽包含第三VH区和第二CH1和VL区；
其中，所述第一多肽与所述第三多肽的第一VH区和一CH1区能够形成第一抗原结合Fab区；
其中，所述第二多肽与所述第四多肽的第三VH区和第二CH1区能够形成第二抗原结合Fab区；和
其中，所述第三多肽的第二VH区与所述第四多肽的VL区能够形成抗原结合Fv区。


100.如权利要求99所述的方法，其中，所述第一Fab区和所述第二Fab区通过柔性肽区连接至所述Fv区。


101.如权利要求100所述的方法，其中，所述柔性肽区包括抗体铰链区。


102.如权利要求101所述的方法，其中，所述抗体铰链区为IgG铰链区。


103.如权利要求102所述的方法，其中，所述IgG铰链区为IgG1亚型的IgG铰链区。


104.如权利要求102所述的方法，其中，所述IgG铰链区为IgG2亚型的IgG铰链区。


105.如权利要求102所述的方法，其中，所述IgG铰链区为IgG3亚型的IgG铰链区。


106.如权利要求102所述的方法，其中，所述IgG铰链...

【专利技术属性】
技术研发人员：张世逸，朴范灿，朴荣祐，
申请(专利权)人：Y生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：韩国;KR